蒲黄、蒲黄炭与五灵脂配伍对血瘀模型大鼠血小板参数的影响△

沈旭楠，刘晨，陈佩东，丁安伟

(南京中医药大学 江苏省方剂高技术研究重点实验室，江苏 南京 210023)

蒲黄、蒲黄炭与五灵脂配伍对血瘀模型大鼠血小板参数的影响△

沈旭楠，刘晨，陈佩东，丁安伟*

(南京中医药大学 江苏省方剂高技术研究重点实验室，江苏 南京 210023)

目的：考察蒲黄、蒲黄炭分别与五灵脂配伍对血瘀模型大鼠血小板参数的影响。方法：以云南白药为阳性药，空白组与模型组灌胃0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液，云南白药组与生品复方、炭品复方高(7.2 g·kg-1)、中(3.6 g·kg-1)、低(1.8 g·kg-1)剂量组灌胃相应的药物，连续给药7 d，第7天给药后皮下注射肾上腺素加冰水浸泡，复制大鼠急性血瘀模型，采用Born比浊法测定盐酸肾上腺素(ADP)诱导的血小板聚集率，采用ELISA法测定血淤模型大鼠血浆中TXB2、6-keto-PGF1α水平。结果：与空白组比较，模型组大鼠血小板聚集率显著提高(P<0.01)，TXB2显著增加(P<0.01)，6-keto-PGF1α显著减少(P<0.01)。与模型组比较，阳性药可显著抑制血瘀模型大鼠血小板聚集率(P<0.01)，使TXB2显著减少(P<0.01)，6-keto-PGF1α显著增加(P<0.01)；生品复方高、中、低剂量组可显著抑制血瘀模型大鼠血小板聚集率(P<0.01，P<0.05)；炭品复方高剂量组可显著促进血瘀模型大鼠血小板聚集率(P<0.01)；生品复方高、中、低剂量组，炭品复方中、低剂量组均能使血瘀模型大鼠TXB2显著减少，6-keto-PGF1α显著增加(P<0.01，P<0.05)。与相同剂量下蒲黄炭品复方比较，蒲黄生品复方使血瘀模型大鼠TXB2显著减少，6-keto-PGF1α显著增加(P<0.01，P<0.05)。结论：蒲黄生品复方高、中、低剂量组，炭品复方低剂量组均可抑制血瘀模型大鼠的血小板聚集率，改善血浆中TXB2、6-keto-PGF1水平，从而表现出一定的活血作用，且相同剂量下生品复方作用优于炭品复方。炭品复方中、高剂量组可提高血瘀模型大鼠的血小板聚集率，这与蒲黄生品行血，炒炭后活血作用减弱的传统炮制理论相符合，为蒲黄在临床上的生熟异用提供了一定的参考。

蒲黄生品复方；蒲黄炭品复方；血小板聚集率；血栓素B2；6-酮-前列腺素

蒲黄为香蒲科植物水烛香蒲TyphaangustifoliaL.，东方香蒲TyphaorientalisPresl或同属植物的干燥花粉。古代文献研究表明[1]，在临床应用中蒲黄多是针对血证、瘀证，其生品能行血、破血，炒制后具有补血、止血功能。复方是中药用药的基础，研究生熟饮片异用可将单味药纳入复方、生熟饮片互换，进行配伍作用研究。本实验选取了临床较常用的复方失笑散，其为中医经典名方，始载于《证类本草》卷二十二引《近效方》，按蒲黄和五灵脂等量组成，具有活血化瘀、散结止痛之功效[2-3]。本实验用蒲黄炭替换失笑散中的蒲黄，比较二者在复方中的药效学差异，为蒲黄在临床上的生熟异用提供一定的参考。

1 材料

1.1 动物

SD大鼠(雌雄各半)，SPF级，体重(200±20) g，由南通大学实验动物中心提供，合格证号SCXK(苏)2008-0010。

1.2 药品与试剂

蒲黄采自内蒙古巴彦淖尔市五原县境内；五灵脂(批号：20111106)购于山西，经南京中医药大学吴启南教授鉴定为香蒲科植物水烛香蒲TyphaangustifoliaL.的干燥花粉和鼯鼠科动物复齿鼯鼠TrogopterusxanthipesMilne-Edwards的干燥粪便；云南白药(云南白药集团股份有限公司，批号：ZI11023)；盐酸肾上腺素注射液(上海禾丰制药有限公司，批号：H31021062)；羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、枸橼酸钠、乙二胺四乙酸(EDTA)(国药集团化学试剂有限公司，批号分别为：F20101222，F20110506，T20090224)水合氯醛(天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20080329)。ADP试剂盒(北京中勤世帝科学仪器公司)；血栓素B2(TXB2，批号：20121021)、6-酮-前列腺素(6-keto-PGF1α，批号：20121018)均购于北京华英生物技术研究所。

1.3 仪器

离心机(上海安寿科学仪器厂)；LG-PABER血小板聚集凝血因子分析仪(北京世帝科学仪器公司)；r-911全自动放免计数仪(中国科技大学实业总公司)。

1.4 供试品溶液的制备

按照《中华人民共和国药典》2010版一部中的炮制方法制备蒲黄炭。取蒲黄、五灵脂各150 g，加10倍量水，煎煮3次，每次1 h，合并滤液浓缩，即成生品复方。用蒲黄炭替换蒲黄，同样方法制成炭品复方。实验前用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液将云南白药、复方生品、复方炭品浓缩液稀释至所需浓度。

2 方法

2.1 分组、造模与给药

取SD大鼠72只，适应性饲养1周后，随机将其分为9组，每组8只，即空白组、模型组、云南白药组(0.36 g·kg-1)、生品复方高(7.2 g·kg-1)、中(3.6 g·kg-1)、低(1.8 g·kg-1)剂量组、炭品复方高(7.2 g·kg-1)、中(3.6 g·kg-1)、低(1.8 g·kg-1)剂量组。空白组与模型组灌胃0.5% CMC-Na溶液；云南白药组与生品复方高、中、低剂量组，炭品复方高、中、低剂量组灌胃等体积的相应药物，每日1次，连续7 d。

参照文献[4]方法复制急性血瘀大鼠模型。第7天给药后，空白组大鼠皮下注射等量0.9%氯化纳溶液，其余各组大鼠皮下注射盐酸肾上腺素 1 mL·kg-1，共2次，中间间隔4 h，并在第1次注射2 h后将大鼠浸入0～2 ℃冰水中5 min。最后一次注射盐酸肾上腺素后大鼠禁食不禁水。

2.2 血小板聚集率及血浆中TXB2、6-keto-PGF1α含量测定

第8天给药40 min后，将各组大鼠以10%水合氯醛麻醉，颈总动脉取血，3.8%枸橼酸钠(1∶9)抗凝，一部分全血以800 r·min-1离心10 min，取其上清液即为富血小板血浆(PRP)；余下部分以3 500 r·min-1离心10 min，取其上清液即为贫血小板血浆(PPP )[5]。按Born比浊法[6]测定血小板最大聚集率，采用ELISA法分别测定大鼠血浆中TXB2、6-keto-PGF1α含量。

2.3 统计学处理

3 结果

3.1 蒲黄生品复方、炭品复方对血瘀模型大鼠血小板聚集率的影响

与空白组比较，模型组大鼠血小板聚集率显著提高(P<0.01)，说明造模成功。与模型组比较，云南白药可显著抑制盐酸肾上腺素(ADP)诱导的大鼠血小板聚集率(P<0.01)；生品复方高、中、低剂量组，炭品复方低剂量组可显著抑制ADP诱导的大鼠血小板聚集率(P<0.01，P<0.05)；炭品复方高剂量组可显著促进ADP诱导的大鼠血小板聚集率(P<0.01)。与等剂量炭品复方比较，蒲黄生品复方可显著抑制ADP诱导的大鼠血小板聚集率(P<0.01，P<0.05)。结果见表1。

表1 蒲黄生品、炭品复方对血瘀模型大鼠血小板聚集率的影响

注：与空白组比较1)P<0.01；与模型组比较2)P<0.05，3)P<0.01；生品复方与等剂量的炭品复方组比较4)P<0.05，5)P<0.01。下同。

3.2 蒲黄生品复方、炭品复方对血瘀模型大鼠TXB2、6-keto-PGF1α含量的影响

与空白组比较，模型组大鼠TXB2显著增加(P<0.01)，6-keto-PGF1α显著减少(P<0.01)，表明造模成功。与模型组比较，云南白药可使血瘀模型大鼠血浆中TXB2显著减少(P<0.01)，6-keto-PGF1α显著增加(P<0.01)；生品复方高、中、低剂量组，炭品复方中、低剂量组均能使血瘀模型大鼠TXB2显著减少，6-keto-PGF1α显著增加(P<0.01，P<0.05)。与等剂量炭品复方比较，蒲黄生品复方使血瘀模型大鼠血浆中TXB2显著减少，6-keto-PGF1α显著增加(P<0.01，P<0.05)。结果见表2。

表2 蒲黄生品、炭品复方对血瘀模型大鼠TXB2、6-keto-PGF1α含量的影响

4 讨论

血小板聚集在血液流动、止血、血栓形成过程中起重要作用。ADP是血小板聚集诱导剂，其诱导的血小板聚集率是反映血小板功能的重要指标，当聚集率降低时，可抑制血栓形成或使已形成的血栓溶解。蒲黄生品复方高、中、低剂量组，炭品复方低剂量组均能抑制血小板聚集，表现出一定的活血作用，且相同剂量下比较，生品复方效果优于炭品复方。炭品复方中、高剂量组可促进血小板聚集，未表现出活血作用。

在正常生理状态下，血栓素A2(TXA2)和前列环素(PGI2)的产生与释放处于动态平衡，维持机体内环境稳定。TXA2具有强烈的促血管收缩和血小板聚集作用，而PGI2具有抗血小板聚集和舒张血管的功能[7]。由于TXA2与PGI2不稳定，因而大多数情况下以测定其代谢产物TXB2及6-keto-PGF1α的含量来反映体内TXA2和PGI2的水平[8]。大鼠造模后，血浆中TXB2含量升高，6-keto-PGF1α含量降低，出现瘀血倾向，蒲黄生品复方、炭品复方均能调节血瘀模型大鼠血浆中TXB2及6-keto-PGF1α的含量，使其趋于正常。与等剂量炭品复方比较，生品复方效果更优，表现出显著的活血化瘀作用。这与蒲黄生品行血，炭炒后活血作用减弱的传统炮制理论相符合，为蒲黄在临床上的生熟异用提供了一定的参考。

失笑散方中蒲黄的有效成分为香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷和异鼠李素等黄酮类成分[9-10]，五灵脂的有效成分为穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮等[11-12]。本实验前期用蒲黄炭代替蒲黄与五灵脂配伍后，发现香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷及穗花杉双黄酮的溶出率较生品复方均有所降低。生品复方与炭品复方表现出的上述药理作用的差异可能与化学成分的变化有关，其机理有待进一步研究。

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EffectsofTyphaeePollenandCharredTyphaeePollenwithcompatibilityofFaecesTrogopterprionHematoblasticinRatModelswithBloodStasis

SHEN Xunan，LIUChen，CHENPeidong,DINGAnwei*

(NanjingUniversityofChineseMedicine,JiangsuKeyLaboratoryforHighTechnologResearchofTraditionalChineseMedicineFomulae,JiangsuNanjing210023,China)

Objective：To observe the effect of Typhaee Pollen and Charred Typhaee Pollen with compatibility of Faeces Trogopterpri on hematoblastic in rat models with blood stasis.Methods：With the Yunnan Baiyao as positive control，the blank group and the model group wereigadministrated with 0.5% CMC-Na，the high dose(7.2 g·kg-1)，middle dose(7.2 g·kg-1)，and low dose(1.8 g·kg-1)group of Yunnan Baiyao group，the raw products and processed products of puhuang wereigadministrated for seven days.After the seventh day administration，the rats were subcutaneous injected adrenalin and doused in ice water to copy acute model with blood stasis.Born turbidimetry was used to determine ADP induced platelet aggregation rate，and TXB2、6-keto-PGF1αlevel of rat plasma were measured by ELISA.Results：Compared with the blank control group，the platelet aggregation rate of model group was significantly improved(P<0.01)，TXB2was increased significantly(P<0.01)，6-keto-PGF1αwas reduced significantly(P<0.01).Comparing with the model group，positive control drug significantly inhibited the platelet aggregation rate of rats with blood stasis(P<0.01)，and significantly reduced TXB2(P<0.01)，6-keto-PGF1αincreased significantly(P<0.01).The high dose，middle dose and low dose groups of raw products of puhuang could significantly inhibited the platelet aggregation rate of rats with blood stasis(P<0.01，P<0.05).The high dose group of processed products of puhuang significantly promoted the platelet aggregation rate of rats with blood stasis(P<0.01).The high dose，middle dose and low dose groups of raw products of puhuang and the middle dose，low dose groups of processed products of puhuang significantly reduced TXB2of rats model with blood stasis and 6-keto-PGF1αwas increased significantly(P<0.01，P<0.05).Compareing with the same dose group of processed products of puhuang，raw products of puhuang reduced TXB2of rats model with blood stasis and increased 6-keto-PGF1αsignificantly(P<0.01，P<0.05).Conclusion：The high dose，middle dose and low dose groups of raw products of puhuang and low dose group of processed products of puhuang can inhibit the platelet aggregation rate of rats model with blood stasis，improve the level of TXB2、6-keto-PGF1in plasma，and show activating blood circulation effect.In the same dose，the raw products of puhuang are better than processed products of puhuang.The middle and low group of processed products of puhuang can increase the platelet aggregation rate of rats model with blood stasis，which is coincide with the tradition processing theory that Typhaee Pollen can invigorate the circulation of blood and the effect of charred Typhaee Pollen attenuated.This research provides reference to different usage of pollen Typhaeee in clinic uses.

raw products of puhuang；processed products of Puhuang；platelet aggregation rate；TXB2；6-keto-PGF1α

2014-09-09)

国家中医药管理局中医药行业科研专项(201107007)

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丁安伟，博士生导师；Tel：(025)85811523，E-mail：awding105@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.1.003