至宝咳喘胶囊的质量标准研究

杨荣艳，刘琬晖，王燕

(四平市食品药品检验所，吉林 四平 136000)

·中药工业·

至宝咳喘胶囊的质量标准研究

杨荣艳*，刘琬晖，王燕

(四平市食品药品检验所，吉林 四平136000)

目的：建立至宝咳喘胶囊的质量控制标准。方法：采用薄层色谱法(TLC)鉴别至宝咳喘胶囊中的栀子、黄芩、陈皮；采用高效液相色谱法(HPLC)测定栀子苷的含量。结果：薄层鉴别斑点清晰；栀子苷平均加样回收率为99.5%，RSD=1.03%。结论：所建立的方法操作简便、重复性好，可作为至宝咳喘胶囊的质量控制标准。

至宝咳喘胶囊；薄层色谱法；高效液相色谱法；栀子苷

至宝咳喘胶囊是吉林省四平市骨质增生医院多年临床经验方，由栀子、黄芩、陈皮、茯苓、瓜蒌、桔梗等11味中药组成，具有补肺益气、健脾祛痰、益肾纳气、止咳平喘等功能。用于慢性支气管炎、支气管哮喘、支气管扩张、肺气肿、肺心病等。目前尚缺乏有效的质量控制方法，为了有效控制该制剂的质量，保证其临床疗效，本文参照《中华人民共和国药典》2010版一部，采用薄层色谱法(TLC)对方中的栀子、黄芩、陈皮进行薄层鉴别，获得满意结果；本文参照文献[1-7]，采用高效液相色谱法(HPLC)测定该制剂中栀子苷的含量，此方法简便、快速、准确。

1 仪器与试药

1.1仪器

岛津LC-2010AHT型全自动高效液相色谱仪、CLASS-VP色谱工作站、UV-2450可见-紫外分光光度计、紫外检测器；BT125D型电子分析天平(北京赛多利斯)；LC-250超声清洗器(功率为250W，频率为50kHZ，昆市超声仪器有限公司)；纯水器(德国)。

1.2试药

至宝咳喘胶囊(四平市骨质增生医院，批号分别为20140303，20140304，20130405)；栀子、黄芩、陈皮对照药材、栀子苷对照品、黄芩苷对照品、橙皮苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号分别为120986-201108，120955-201008，120969-201109，110749-201115，110715-201318，110721-201115；市售硅胶G板(青岛海洋化工有限公司，批号：20131126)；聚酰胺薄膜(国药集团化学试剂有限公司，批号：20130422)；乙腈(天津康科德科技有限公司，色谱纯)；其他试剂均为分析纯；水为实验室自制的超纯水。

2 方法与结果

2.1薄层色谱鉴别

2.1.1栀子的鉴别 取本品粉末2.5g，加乙醇25mL，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液。另取栀子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取栀子苷对照品，加乙醇制成质量浓度为2g·L-1的溶液，作为对照品溶液。按其处方比例制备不含栀子的阴性样品，同上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010版一部附录ⅥB)试验，吸取上述4种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶5∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点清晰，专属性强，阴性对照无干扰，见图1。

注：1～3.供试品；4.栀子对照药材；5.栀子苷对照品；6.阴性对照。图1 至宝咳喘胶囊中栀子薄层色谱图

2.1.2黄芩的鉴别 取2.1.1栀子的鉴别项下的供试品溶液。另取黄芩对照药材1g，照2.1.1栀子的鉴别项下供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成质量浓度为1g·L-1的溶液，作为对照品溶液。按其处方比例制备不含黄芩的阴性样品，同上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010版一部附录ⅥB)试验，吸取上述4种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点，斑点清晰，专属性强，阴性对照无干扰，见图2。

注：1～3.供试品；4.黄芩对照药材；5.黄芩苷对照品；6.阴性对照。图2 至宝咳喘胶囊中黄芩薄层色谱图

2.1.3陈皮的鉴别 取本品粉末3g，加甲醇40mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL，用乙醚振摇提取2次，每次20mL，弃去乙醚液；水溶液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL，使其溶解，作为供试品溶液。另取陈皮对照药材1g，加甲醇20mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL，使其溶解，作为对照药材溶液。再取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。按其处方比例制备不含陈皮的阴性样品，同上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010版一部 附录ⅥB)试验，吸取上述4种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶10)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，加热5min，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点，斑点清晰，专属性强，阴性对照无干扰，见图3。

注：1～3.供试品；4.陈皮对照药材；5.橙皮苷对照品；6.阴性对照。图3 至宝咳喘胶囊中陈皮薄层色谱图

2.2含量测定

2.2.1色谱条件 色谱柱：岛津WondaCractODS-2C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-水(10∶90)；流速：1.0mL·min-1；检测波长：238nm；柱温：30℃；进样量：10μL。

2.2.2对照品溶液的制备 精密称取栀子苷对照品适量，加70%甲醇制成质量浓度为40μg·mL-1的溶液，即得[1]。

2.2.3供试品溶液的制备 取装量差异项下的内容物1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量。用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。

2.2.4阴性制剂及阴性对照液的制备 按处方组成比例制备栀子阴性制剂，再按供试品溶液的制备方法，制备栀子阴性对照溶液。

2.2.5系统适用性试验 在选定的色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果栀子苷与其相邻峰之间分离度均大于1.5，拖尾因子在0.95～1.05，阴性样品不干扰测定。理论塔板数按栀子苷峰计算不低于7000[1]，见图4。

注：A.对照品；B.供试品；C.阴性样品；1.栀子苷。图4 至宝咳喘胶囊高效液相色谱图

2.2.6线性关系考察 分别精密量取栀子苷对照品储备液(质量浓度为101.9μg·mL-1)0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mL至10mL量瓶中，分别加70%甲醇至刻度，摇匀，制成栀子苷标准系列浓度溶液。分别精密吸取上述溶液各10μL进样，在2.1.2色谱条件下进行HPLC分析，以栀子苷峰面积Y对浓度X(μg·mL-1)进行回归分析，得回归方程：Y=2.71×104X-2862.8，r=0.9999，结果表明栀子苷在5.095～81.52μg·mL-1与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.7稳定性试验 取供试品溶液，分别于0、2、4、8、16h进样，按2.2.1色谱条件分析，以栀子苷峰面积计算相对标准偏差，RSD=1.03%。表明栀子苷样品溶液至少在16h内基本稳定。

2.2.8精密度试验 取栀子苷对照品溶液，在2.2.1色谱条件下，重复进样5次，以峰面积计算相对标准偏差，RSD为0.3%。

2.2.9重复性试验 精密称取同一批号样品(批号：20140303)5份，照2.2.3项下方法制备供试品溶液，按2.2.1色谱条件测定栀子苷含量，计算得RSD为1.15%。表明本法重复性良好。

2.2.10回收率试验 取己知含量的本品粉末(批号：20140303)6份，每份约0.5g，精密称定，分别精密加入一定量的对照品溶液，按2.2.3供试品溶液的制备项下方法操作，在2.2.1色谱条件下进样分析，计算平均回收率，结果见表1。

表1 栀子苷加样回收率测定结果

2.2.11 样品的测定 按供试品制备方法，每批样品制备两份，测定栀子苷的含量，结果见表2。

表2 3批样品含量测定结果

3 讨论

至宝咳喘胶囊为中药复方制剂，成分复杂，各成分之间干扰较严重。通过多次试验筛选出合理的供试品溶液制备方法和色谱分离系统，对其中主要药味栀子、黄芩、陈皮进行薄层鉴别，对栀子中的栀子苷进行含量测定。3批样品测定表明，该方法简便易行，薄层色谱斑点分离清晰，重复性好，阴性对照无干扰，可以作为该制剂的质量控制方法。

3.1黄芩的鉴别

在黄芩的薄层色谱鉴别中，参照了《中华人民共和国药典》(2010版一部)“牛黄解毒片”中黄芩的薄层色谱条件，试验中考察了甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10∶3∶1∶2)、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)两种展开系统，聚酰胺薄膜[8]、硅胶G薄层板两种吸附剂。结果在硅胶G薄层板上点样，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)展开剂系统为展开剂薄层效果较好，试验结果斑点清晰，阴性无干扰。

3.2陈皮的鉴别

在陈皮的薄层色谱鉴别中，参照了《中华人民共和国药典》(2010版一部)，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)为展开剂时，背景干扰严重，增加了乙醚脱脂处理，薄层斑点更加清晰，专属性强，阴性对照无干扰。

3.3色谱条件的考察

栀子苷的含量测定色谱条件：考察了不同品牌色谱柱ZorbaxSB-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)、GalaksilBF-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)和WondaCractODS-2C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，结果这3种色谱柱分离效果差异不大；考察了流动相的不同比例对分离度和峰形的影响：乙腈-水(15∶85)、(13：87)、(10∶90)。结果表明，乙腈-水(10∶90)最理想，不仅使色谱峰峰形好，而且与相邻杂峰的分离度均大于1.5。

3.4提取溶剂和提取方式的考察

对样品进行提取溶剂和提取方式的考察，分别以甲醇[4]、70%甲醇[1-3]为提取溶剂，超声30min，回流30min。结果两种溶剂、两种提取方式栀子苷含量无明显差异。为了减少试剂毒性、节约能源且操作方便，笔者选取70%甲醇为溶剂，超声处理30min。

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StudiesonQualityControlStandardofZhibaoKechuanCapsules

YANGRongyan*，LIUWanhui，WANGYan

(SipingCityInstituteforFoodandDrugControl，SipingJilin136000，China)

Objective：To establish a method for quality control of Zhibao Kechuan Capules.Methods：TLC was employed to identify three crude herbal elements in Zhibao Kechuan Capules and the content of Geniposide was determined by HPLC.Results：The spot developed on TLC was fairly clear.The average recovery of Geniposide was99.5% with RSD of1.03%.Conclusion：The method is reliable，simple and can be used for the quality control of Zhibao Kechuan Capsules.

Zhibao Kechuan；TLC；HPLC；geniposide

*

杨荣艳，副主任药师，研究方向：中药材、中成药的检验工作；E-mail：yry_lg@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.12.024

2015-01-16)