替莫唑胺胶囊的溶出曲线和稳定性比较

李勇陈勇 杜斌 郑双双（华东理工大学药学院 上海 200237）

替莫唑胺胶囊的溶出曲线和稳定性比较

李勇*陈勇 杜斌 郑双双
（华东理工大学药学院 上海 200237）

比较替莫唑胺国产胶囊与原研胶囊的溶出曲线和稳定性。在4种溶出介质中考察溶出曲线相似性，装置采用转篮法，转速100 r/min。替莫唑胺国产胶囊与原研胶囊在四种溶出介质中的溶出曲线均相似。稳定性影响因素实验表明，国产胶囊在高温（60 ℃）和高湿（相对湿度 92.5%）条件下不稳定，有关物质量增加，而原研胶囊的稳定性良好。

替莫唑胺胶囊 溶出曲线 相似性 稳定性

替莫唑胺（temozolomide）是一种新型烷化剂类抗肿瘤药物，口服吸收完全，生物利用度高，并可透过血脑屏障[1]，对脑部肿瘤的效果较好，能有效治疗新诊断及复发的胶质母细胞瘤和间变性星形细胞瘤，延长患者生存期[2]，而且安全性和耐受性较好[3]。国内的上市制剂出自三个厂家，剂型均为胶囊剂。本文对国产胶囊与原研胶囊的稳定性和溶出曲线相似性进行研究，评估两者之间可能存在的质量差异，为替莫唑胺国产胶囊的品质提升提供参考。

1 试药与仪器

1.1 试药

原研替莫唑胺胶囊（A厂，规格20 mg，批号3CAPA21002）；国产替莫唑胺胶囊（B厂，规格5 mg，批号20140808）；替莫唑胺对照品（Merck Sharp & Dohme Ltd，英国，批号4DZAA04001）；甲醇为色谱纯（北京百灵威科技有限公司）；盐酸、冰醋酸、醋酸钠、磷酸二氢钾、氢氧化钠均为分析纯。

1.2 仪器

LC-10AD岛津高效液相色谱系统（日本岛津，SPD-10Avp紫外检测器，LC-10ADvp泵，SCL-10Avp系统控制器）；AL104分析天平（Mettler Toledo）；ZRS-8GD智能溶出试验仪（天津市天大天发科技有限公司）；UV-5100B紫外/可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）；KBF-250药品稳定性试验箱（上海一恒科学仪器有限公司）；MGC-30F光照试验箱（上海康励仪器设备有限公司）。

2 方法

2.1 溶出曲线相似性比较

1）溶出介质 分别以水、0.1 mol/L盐酸溶液、pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液 、pH 6.8磷酸盐缓冲液[4]）为溶出介质。其中，水为法定标准规定的溶出介质。

2）溶出曲线测定 取本品6粒，照溶出度测定第一法[4]附录XC，溶出介质500 ml（国产胶囊）、900 ml（原研胶囊），转速为100 r/min，依法操作，在5、10、15、20、30 min时，取溶液10 ml，滤过，同时补充37 ℃相应溶出介质10 ml。国产胶囊以续滤液作为供试品溶液；原研胶囊取续滤液5 ml，置10 ml量瓶中，用相应溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取替莫唑胺对照品10 mg，置50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，得浓度为200 mg/ml的贮备液。精密量取贮备液，用相应溶出介质稀释成浓度为10 mg/ml的对照品溶液，照紫外-可见分光光度法[4]附录IVA，在330 nm的波长处测定吸光度，计算各时间点的溶出量，绘制溶出曲线，采用相似因子（f2）进行溶出曲线相似性比较。

2.2 稳定性比较

以稳定性影响因素实验评估国产胶囊和原研胶囊的稳定性。取本品除去外包装，分别置高温（60 ℃、40 ℃）、高湿（相对湿度 92.5%、75%）和强光（4 500 Lx）条件下放置10 d，于第10天取样测定质量、有关物质、替莫唑胺含量和溶出度，并与0 d数据比较。

1）有关物质检查 取本品10粒，精密称定，倒出内容物，将胶囊中残余粉末擦干净后，称定空胶囊重量，计算内容物平均装量，精密称定适量内容物（约相当于替莫唑胺10 mg)，置50 ml量瓶中，加流动相适量，冰浴中超声处理（约10 min）使替莫唑胺溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。照高效液相色谱法测定[4]附录VD。固定相为Gemini C18色谱柱（4.60 mm×250 mm，5 mm）；流动相为甲醇-0.5%冰醋酸溶液（10∶90）；检测波长为254 nm。理论板数按替莫唑胺峰计算不低于9 000，替莫唑胺峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。精密量取2.1中的替莫唑胺贮备液1 ml，置100 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 m1注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使替莫唑胺色谱峰的峰高约为满量程的40%。精密量取供试品溶液20 μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图至替莫唑胺峰保留时间的2.5倍。按不加校正因子的主成分自身对照法计算单一杂质与总杂质含量。

2）含量测定 照有关物质项下的方法，取供试品溶液及对照品溶液（200 mg/ml）分别进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

3）溶出度测定 按2.1中方法，以水为溶出介质，测定国产胶囊和原研胶囊的溶出度。取样时间为10、20和30 min，限度为30 min溶出量为标示量的80%。

3 结果

3.1 溶出曲线相似性

国产胶囊与原研胶囊在四种溶出介质中的溶出曲线见图1。两制剂在四种溶出介质中，15 min的溶出度均大于85%，无需进行f2比较，可直接判定为溶出曲线相似。但国产制剂在5 min时的溶出度均明显小于原研制剂。

图1 四种介质中的溶出曲线

3.2 国产胶囊与原研胶囊的稳定性

有关物质、含量和溶出度数据见表1。结果表明，在去除外包装的情况下，原研胶囊的稳定性优于国产胶囊。具体表现为：原研胶囊在稳定性影响因素实验的各项考核中，有关物质、含量、溶出度指标均未见明显改变，均符合质量标准的规定。国产胶囊在高温60 ℃和高湿92.5%的条件下，有关物质已明显超标；溶出度虽然均在限度范围内，但在高温60 ℃和高湿92.5%的条件下，10 min的溶出量明显降低。

4 讨论

本文中替莫唑胺胶囊剂溶出度测定参照FDA dissolution methods database中的方法[5]；有关物质检查参照2010年版中国药典第二增补本收载的替莫唑胺胶囊中的相关方法[6]；含量测定参照2010年版印度药典中的相关方法[7]。

溶出曲线是反映固体制剂品质的一项重要指标[8]。仿制制剂与原研制剂的体外溶出曲线相似性是保证两制剂体内生物等效的前提之一。自1999年美国FDA颁布采用f2因子比较法以来，该法已被普遍用于溶出曲线相似性的比较。计算f2因子时要求取样时间点应不少于3个，在溶出率85%以上的时间点应不多于一个。对于普通制剂的取样时间通常安排为5、10、15、30 min……，当连续两点溶出率均达85%以上且差值在5%以内时，试验结束[9]。若制剂释药非常迅速，如替莫唑胺胶囊在10 min时溶出度已大于90%，则不满足上述f2因子法的计算要求。故本文参照日本厚生劳动省颁布的《仿制药生物等效性试验指导原则》与《固体制剂处方变更后生物等效性试验指导原则》，当参比制剂与仿制制剂在15 min内平均溶出率均达85%以上，即判定溶出曲线相似[9]。根据这一判定标准，国产替莫唑胺胶囊与原研制剂溶出曲线相似，但国产胶囊在初始时间点的溶出明显较慢。

表1 稳定性考核10 d后的有关物质、替莫唑胺含量和溶出度(%)

采用pH 6.8磷酸盐缓冲液作为溶出介质时，发现替莫唑胺在达到最大溶出量后，介质中的药量随时间逐渐减少。造成这一现象的原因是由于替莫唑胺在中性或碱性条件下稳定性较差，药物发生降解所致[10]。

稳定性研究是药品质量控制研究的主要内容之一。本文采用影响因素实验是为了研究影响替莫唑胺胶囊稳定性的因素，为国产制剂的质量提升提供依据。文献报道，替莫唑胺溶液对温度敏感[10]。本文结果提示，国产胶囊对高温（60 ℃）、高湿（相对湿度92.5%）敏感，有关物质超标。相对而言，原研制剂的稳定性良好。造成这种差异的原因可能是两者选用的原料、辅料或制备工艺不同所致。

[1] Reyderman L, Statkevich P, Thonoor CM, et al. Disposition and pharmacokinetics of temozolomide in rat[J]. Xenobiotica, 2004, 34(5): 487-500.

[2] Hirst TC, Vesterinen HM, Sena ES, et al. Systematic review and meta-analysis of temozolomide in animal models of glioma: was clinical efficacy predicted?[J]. Br J Cancer, 2013, 108(1): 64-71.

[3] Dixit S, Baker L, Walmsley V, et al. Temozolomide-related idiosyncratic and other uncommon toxicities: a systematic review[J]. Anticancer Drugs, 2012, 23(10): 1099-106.

[4] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2010年版二部[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2010: 附录175-177.

[5] U.S. Food and Drug Administration. Dissolution Methods [EB/OL]. (2008-08-11)[2015-05-08]. http://www.accessdata. fda.gov/scripts/cder/dissolution/dsp_SearchResults_ Dissolutions.cfm?PrintAll=1.

[6] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2010版第二增补本[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2013: 318.

[7] The Indian Pharmacopoeia Commission. Indian Pharmacopoeia 2010[M]. New Delhi: National Institute of Science Communication and Information Resources (NISCAIR) Council of Scientific & Industrial Research, 2193-2194.

[8] 谢沐风. 改善溶出度评价方法，提高固体药物制剂水平[J]. 中国医药工业杂志, 2005, 36(7): 447-451.

[9] 谢沐风. 溶出曲线相似性的评价方法[J]. 中国医药工业杂志, 2009, 40(4): 308-311.

[10] 郑蓉, 蒋德锡, 廖心丹, 等. 温度及pH对替莫唑胺溶液稳定性的影响[J]. 华西药学杂志, 2012, 27(5): 550-551.

Comparative study on the dissolution and stability of temozolomide capsules from different pharmaceutical manufactures

LI Yong*, CHEN Yong, DU Bin, ZHENG Shuangshuang
(East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China)

To compare the dissolution profile and stability between domestic and original preparations of temozolomide capsules. Similarity of dissolution curve of two preparations in four different types of dissolution media was evaluated by the basket method at 100 r/min. The dissolution profiles of domestic preparation were similar to those of original preparation in all 4 dissolution media. The study of the stability-influencing factors showed that domestic preparation was unstable with the significant increase in the amount of related substances under high temperature (60℃) and high humidity (RH 92.5%) while original preparation was stable under the same conditions.

temozolomide capsules; dissolution profiles; similarity; stability

R979.11; R927.11

A

1006-1533(2015)19-0076-04

李勇（1990-），男，硕士研究生，主要从事药物制剂研究。 E-mail ：1073513420@qq.com

2015-06-08)