蔬菜中八种氨基甲酸酯类农药残留的SPE—HPLC分析

张建宇 黄义彬 张莉

摘要：建立了固相萃取-高效液相色谱法同时测定蔬菜中8种氨基甲酸酯农药（涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、三羟基克百威、涕灭威、克百威、甲萘威和抗蚜威）残留的方法。蔬菜样品采用乙腈提取，经氨基小柱净化，以（乙腈∶甲醇=8∶3，V/V）-水为流动相进行梯度洗脱，流速1.0 mL/min，柱温40 ℃，C18柱分离，检测波长220 nm。结果表明，8种农药在蔬菜中的加标回收率为75.3%～112.5%，相对偏差小于6%。该方法简便快速、准确度高，符合实际应用需要。

关键词：蔬菜；氨基甲酸酯；固相萃取；高效液相色谱

中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）14-3510-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.14.046

Detecting Eight Kinds of Carbamate Pesticides in Vegetables by SPE-HPLC

ZHANG Jian-yu， HUANG Yi-bin， ZHANG Li

（Agricultural product quality safety supervision and Testing Center of Guiyang，Guiyang， 550004， China）

Abstract： The 8 kinds of carbamate pesticides （including aldicarb sulfoxide， aldicarb sulfone， methomyl， 3-hydroxy carbofuran， aldicarb， carbofuran， carbaryl， pirimicarb） in vegetables by solid phase extraction-high performance liquid chromatography （SPE-HPLC） was investigated. The samples were extracted by acetonitrile and purified by amino solid phase extraction column， and separated gradiently with the mobile phase consisting of acetonitrile methanol mixer（8∶3，V/V） and water on the column of C18 at 40 ℃， the flow rate was 1.0 mL/min，and the wavelengh was detected at 220 nm. The results showed that the recovery rate of 8 kinds of pesticides in vegetable was 75.3%～112.5%，RSD was less than 6%. This method is simple， rapid， accurate for detecting carbamate pesticide residues in vegetables.

Key words： vegetables； carbamate； SPE； HPLC

氨基甲酸酯类农药是一类高效、广谱、低毒的杀虫剂，具有分解快、残留期短、选择性强等特点，使用广泛[1-4]。目前，氨基甲酸酯类农药的检测方法主要为柱后衍生荧光检测HPLC法[5-10]，但该方法需要配套柱后衍生系统和使用衍生化试剂，检测成本居高不下。本研究运用固相萃取技术对样品的前处理过程进行优化，以HPLC紫外检测法建立一种蔬菜中氨基甲酸酯类农药残留的检测技术。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Waters e2695 高效液相色谱仪，TOMTEC全自动匀浆机、EVAP-112氮吹仪，上海安谱CNW氨基固相萃取小柱500 mg、色谱纯甲醇、乙腈和二氯甲烷（美国Tedia）。

1.2 方法

1.2.1 提取与净化 将25.0 g经粉碎均质后的蔬菜置于匀浆机中加入50 mL乙腈，匀浆2 min后过滤，收集滤液至100 mL具塞比色管中，加入6 g氯化钠振荡1 min后，室温静置30 min。吸取上层清液10.0 mL于小烧杯中，80 ℃氮吹至近干，用2.0 mL丙酮溶解，待净化。加样前将氨基柱用4.0 mL甲醇+二氯甲烷（1∶99，V/V）预洗活化，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即加入提取液，用15 mL离心管收集洗脱液。用2.0 mL甲醇+二氯甲烷（1∶99，V/V）冲洗烧杯后过柱，并重复 1 次，50 ℃氮吹至近干，甲醇溶解定容至2.0 mL，摇匀后过0.2 μm滤膜备用。

1.2.2 色谱条件 C18柱（250 mm×4.6 mm，5.0 μm），柱温40 ℃，流动相为（乙腈∶甲醇=8∶3，V/V）和水，梯度洗脱见表1，流速1.0 mL/min，检测波长220 nm。

2 结果与分析

2.1 提取液的选择

分别比较甲醇、乙腈和丙酮的提取效果，结果表明，甲醇提取效果不佳，丙酮提取杂质较多，干扰较大；乙腈毒性小、提取效果好、干扰少、操作简单且加标回收率较高。本试验先用乙腈提取所需组分，再加入过量氯化钠盐析，使水相和有机相充分分离，从而使氨基甲酸酯农药进入乙腈相。因此，本试验选取乙腈作为提取液。

2.2 净化条件的选择

固相萃取法是一种基于液相色谱分离机制的前处理方法，已广泛应用于农药残留检测工作。本试验采用C8、苯基柱和氨基固相柱净化除杂，结果表明氨基固相小柱的净化效果最佳。

2.3 色谱条件的选择

流动相对组分分离效果影响显著。本试验选用甲醇-水和乙腈-水作为流动相进行梯度洗脱，结果发现无论是甲醇-水和乙腈-水体系都无法分离出8种目标物：甲醇-水体系中出峰较晚的3种物质无法有效分离，而乙腈-水体系中出峰较早的4种物质无法有效分离。笔者先试验了不同体积比例的有机相体系（乙腈：甲醇分别为4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4），然后将有机相和水梯度洗脱，构成三元流动相体系，确定有机流动相体系为乙腈∶甲醇=8∶3，然后再和水相混合进行梯度洗脱，成功分离出8种目标物组分。

8种目标物组分有不同的最大吸收波长，经试验分别选取216、218、220、222、224、226和228 nm。最终确定选择220 nm。

2.4 回收率和精密度

在上述条件下，在蔬菜样品中加入0.5、1.0和4.0 mg/kg 3种浓度水平的添加回收试验，每种浓度水平重复3次，结果见表2。在3种添加水平上，8种氨基甲酸酯类农药的平均回收率为75.3%～112.5%，RSD低于6%，符合农药多残留检测要求。

2.5 检出限

按S/N=3计算，9 种氨基甲酸酯杀虫剂及其代谢物的检出限分别为：涕灭威亚砜0.02 mg/kg，涕灭威砜0.02 mg/kg，灭多威0.01 mg/kg，三羟基克百威0.02 mg/kg，涕灭威0.005 mg/kg，克百威0.01 mg/kg，甲萘威0.01 mg/kg，抗蚜威0.02 mg/kg。

3 小结

该试验采用乙腈提取蔬菜样品中的目标物，经氨基小柱进行固相萃取净化。以（乙腈∶甲醇=8∶3，V/V）-水为流动相进行梯度洗脱，流速1.0 mL/min，柱温 40 ℃，C18柱分离，检测波长220 nm，可实现蔬菜中8种氨基甲酸酯类农药的检测。该方法分离效果好、准确度和精密度高，操作简单易行，勿需衍生和荧光检测，适宜基层机构检测蔬菜中多种氨基甲酸酯类农药。

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