墨旱莲化学成分的分离鉴定*

马　迪，韩立峰，刘二伟，夏明辉，张　祎，王　涛（.天津中医药大学第一附属医院天津30093；.天津市中药化学与分析重点实验室，天津30093）

墨旱莲化学成分的分离鉴定*

马迪1，韩立峰2，刘二伟2，夏明辉2，张祎2，王涛2
（1.天津中医药大学第一附属医院天津300193；2.天津市中药化学与分析重点实验室，天津300193）

［目的］对墨旱莲中的化学成分进行分离鉴定。［方法］采用正相硅胶、反相ODS（十八烷基键合硅胶）、凝胶等柱色谱及制备型高效液相色谱（HPLC）法分离纯化，并利用质谱分析（MS）、核磁共振波谱（NMR）等方法对化合物结构进行鉴定。［结果］从墨旱莲体积分数为70%的乙醇提取物中分离鉴定了9个化合物，分别鉴定为2，2′；5′，2″-三联噻酚（1）、5-醛基-2，2′；5′，2″-三联噻酚（2）、5-羟甲基-2，2′；5′，2″-三联噻酚（3）、2，2′；5′，2″-三联噻酚-5-羧酸（4）、5-醛基-5′-（3-丁烯-1-炔基）-2，2′-二联噻酚（5）和5-丁-1′-炔-3′-羟基-4′-氯-（2-戊-1″，3″二炔）-噻酚（6），二氢猕猴桃内酯（7），黑麦草内酯（8），原儿茶酸乙酯（9）。［结论］化合物6～9为首次从鳢肠属植物中分离得到。

墨旱莲；化学成分；结构鉴定

墨旱莲，为菊科植物鳢肠（Eclipta prostrata L.）的干燥全草，具有滋补肝肾、凉血止血之功效［1-2］。现代药理研究表明，墨旱莲具有止血［3］、保肝［4］、抗肿瘤［5］，治疗血小板减少性紫癜［6-7］，抗疲劳［8］，抗失眠［9］等作用。化学成分研究表明其主要含有香豆草醚类、三萜类、黄酮类、噻酚类以及挥发油、有机酸等化学成分［10-11］。笔者对墨旱莲的化学成分进行了分离鉴定，从该植物乙醇提取物的石油醚和乙酸乙酯萃取部分中分离得到9个化合物，经质谱（MS）和核磁共振波谱（MMR）方法对这些化合物进行了结构鉴定，6～9为首次从鳢肠属植物中分离得到。

1　仪器与材料

布鲁克AVANCEⅢ500超导核磁共振波谱仪［四甲基硅烷（TMS）为内标，瑞士Bruker公司］；安捷伦6430系列三重四级杆质谱仪（美国Agilent公司）。分析型高效液相色谱仪［Agilent 1200 series HPLC（美国Agilent公司）］；色谱柱：Agilent zorbax C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），制备型高效液相色谱仪［Agilent 1200 series HPLC（美国Agilent公司），G1361A，G1365D］；制备柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×21.2 mm，7μm）。

柱层析硅胶（青岛海洋化工厂分厂），开放C18柱色谱填料为ODS-A（120 A，50 μm，日本YMC公司），Sephadex LH-20（美国GE公司），可剪裁薄层层析板GF254（天津思利达科技有限公司），展开剂：氯仿-甲醇（系列比例），薄层显色剂：10%的硫酸乙醇溶液；分析纯石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇及色谱纯甲醇等有机溶剂（天津市康科德科技有限公司），分析纯氯仿（天津市江天化工技术有限公司）。

墨旱莲药材购于河北安国，经天津中医药大学张丽娟教授鉴定为菊科植物鳢肠（Eclipta prostrata L.）的干燥全草。

2　提取分离

墨旱莲药材20 kg，用70%乙醇回流提取，减压回收浓缩，真空干燥得干膏2150g。取其中约1000g，先用水悬浮，用不同溶剂萃取，分别得石油醚（255g）、乙酸乙酯（150g）和水（600 g）萃取物。对石油醚萃取物进行硅胶柱层析分离，以石油醚-乙酸乙酯（100∶1→0∶100）进行梯度洗脱，薄层色谱（TLC）检识合并相同流分，得到17个流分（Fr.1-17）。Fr.1经反相高效液相色谱分离得到了化合物1（88mg）；Fr.5经反相ODS柱色谱，乙腈-水（30∶70→100∶0）梯度洗脱，得到9个流分（Fr.5.1-9）。Fr.5.6（328mg）经PHPLC分离得到化合物2（98mg）和5（45mg）。Fr.8经反相ODS柱色谱，乙腈-水（20∶70→100∶0）梯度洗脱，得到7个流分（Fr.8.1-7）。Fr.8.3经反相高效液相色谱分离得到化合物7（23mg）；Fr.8.7经PHPLC分离得到化合物6（43 mg）。Fr.11经Sephadex LH-20柱色谱，甲醇洗脱，得10个流分（Fr.11.1-10）；Fr. 11.10经PHPLC分离得到化合物3（61mg）。对乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析分离，以二氯甲烷-甲醇（1∶0→0∶1）进行梯度洗脱，TLC检识合并相同流分，得到15个流分（Fr.E1-15）。Fr.E5经反相ODS柱色谱，甲醇-水（10∶90→100∶0）梯度洗脱，得到10个流分（Fr.E5.1-10）。Fr.E5.2经Sephadex LH-20柱色谱以及PHPLC等手段，分离得到了化合物8（22mg）和9（114mg）；同理，Fr.E5.7经Sephadex LH-20柱色谱以及PHPLC等手段，分离得到了化合物4（17mg）。化合物1～9的结构见图1。

图1　墨旱莲中分离得到的化合物

3　结构鉴定

化合物1：黄色粉末，易溶于甲醇。在正离子电喷雾电离-质谱（ESI-MS）中，可以看到准分子离子峰m/z（质核比）：248.8［M+H］+，推测其分子量为248。1H-NMR［500 MHz，氘代氯仿（CDCl3）］谱中δ7.08［br s（宽单峰），2H］为3′和4′位质子信号。δ7.02 ［2H，dd（双二重峰），J=3.5，5.0 Hz，H-4、4″］，δ 7.17 （2H，dd，J=1.0，3.5 Hz，H-3、3″）和δ7.22（2H，dd，J= 1.0，5.0 Hz，H-5、5″），提示存在对称结构。具体碳谱数据如下δ：123.7（C-3、3″）、124.3（C-3′、4′）、124.5 （C-5、5″）、127.9（C-4、4″）、136.2（C-2′、5′）、137.1 （C-2、2″）。1H、13C-NMR谱数据与文献［12］对照基本一致，确定化合物1为2，2′；5′，2″-三联噻酚。

化合物2：黄色粉末，易溶于甲醇。在正离子ESI-MS谱中，可以看到准分子离子峰m/z：276.9［M+H］+，推测其分子量为276。1H-NMR（500MHz，CDCl3）谱中δ9.86为5位醛基质子信号；7.67［1H，d（二重峰），J=4.0 Hz］和δ7.24（1H，overlapped）为A环上4和3位氢信号；δ7.28（1H，overlapped）和δ7.27（1H，overlapped）分别为B环上H-4′和3′的信号；δ7.23（1H，overlapped），7.13（1H，d，J=4.0 Hz）和δ7.05（1H，dd，d，J=4.0，5.0 Hz）分别为C环上H-3″，5″和4″的信号。碳谱数据如下δ：124.0（C-3）、124.5 （C-3″）、124.7（C-5″）、125.4（C-4′）、126.9（C-3′）、128.1（C-4″）、134.5（C-2′）、136.4（C-5′）、137.3（C-4）、139.2（C-2″）、141.6（C-5）、146.8（C-2）、182.4（5-CHO）。核磁数据与参考文献［13］对照，基本一致，可确定化合物2为5-醛基-2，2′；5′，2″-三联噻酚。

化合物3：淡黄色粉末，易溶于甲醇。在正离子ESI-MS谱中，可以看到准分子离子峰m/z：278.8［M+H］+，推测其分子量为278。1H-NMR（500MHz，CDCl3）谱的低场区有7个氢。7.22（1H，d，J=5.0Hz），δ7.17（1H，d，J=3.0 Hz）和7.02（1H，overlapped）分别为C环上H-5″，3″和4″位氢信号；δ7.06（1H，d，J= 3.5 Hz）和δ7.05（1H，d，J=3.5 Hz）分别为B环上H-4′和3′的信号；δ7.03（1H，overlapped）和6.92（1H，d，J=3.0 Hz）分别为A环上H-3和4的信号。在中低场区有一个明显的宽单峰：δ4.81（2H，br s，5-CH2OH）。13C-NMR（125 MHz，CDCl3）谱中总共显示有12个碳信号，根据HSQC，推知碳谱中有重叠信号，具体碳谱数据如下δ：60.2（5-CH2OH）、123.3（C-3）、123.8（C-3″）、124.3（C-3′、4′）、124.5（C-5″）、126.3（C-4）、127.9（C-4″）、136.1（C-5′）、136.4（C-2′）、137.1（C-2″）、137.4（C-2）、143.1（C-5）。再结合文献［14］，确证化合物3为5-羟甲基-2，2′；5′，2″-三联噻酚。

化合物4：棕黄色固体。在正离子ESI-MS谱中，可以看到准分子离子峰m/z：292.8［M+H］+，推测其分子量为292。1H-NMR［500 MHz，氘代甲醇（MeOD）］谱中7.68（1H，d，J=4.0 Hz）和δ 7.26（1H，d，J=4.0 Hz）分别为A环上H-4和3位氢信号；δ7.38（1H，dd，J=1.0，5.0 Hz），7.28（1H，dd，J=1.0，4.0Hz）和δ7.06（1H，dd，J=4.0，5.0Hz）分别为C环上H-5″，3″和4″的信号；δ7.30（1H，d，J=4.0 Hz）和7.19 （1H，d，J=4.0 Hz）分别为B环上H-3′和4′的信号。13C-NMR（125MHz，MeOD）谱中总共显示有13个碳信号，根据HSQC和HMBC等二维谱可归属碳谱数据，具体碳谱数据如下：125.2（C-3）、125.4（C-3″）、125.7（C-3′）、126.4（C-5″）、127.2（C-4′）、129.2（C-4″）、134.1（C-5）、135.5（C-4）、136.1（C-2′）、137.7（C-2″）、139.4（C-5′）、144.9（C-2）、167.6（5-COOH）。再结合文献［15］，确证化合物4为2，2′；5′，2″-三联噻酚-5-羧酸。

化合物5：黄色粉末。在正离子ESI-MS谱中，可以看到准分子离子峰m/z：248.9［M+H］+，推测其分子量为248。1H-NMR（500MHz，CDCl3）谱中δ9.86为5位醛基质子信号；7.67（1H，d，J=4.0Hz）和δ7.24（1H，d，J=4.0Hz）为A环上4和3位氢信号；δ7.22（1H，d，J=4.0Hz）和δ7.14（1H，d，J=4.0Hz）分别为B环上H-3′和4′的信号；δ6.02（1H，dd，J=11.5，17.5 Hz，H-8′）；5.76（1H，dd，J=1.0，17.5Hz）和δ5.60（1H，dd，d，J=1.0，11.5Hz）为9′位的烯氢信号。具体碳谱数据如下δ：82.7（C-6′）、94.3（C-7′）、116.6 （C-8′）、124.6（C-3）、124.8（C-5′）、126.0（C-3′）、127.8（C-9′）、133.1（C-4′）、137.2（C-2′）、137.2（C-4）、142.1（C-5）、146.1（C-2）、182.5（5-CHO）。核磁数据与参考文献［16］对照，基本一致，确定化合物5为5-醛基-5′-（3-丁烯-1-炔基）-2，2′-二联噻酚。

化合物6：黄色固体。在正离子ESI-MS谱中，可以看到准分子离子峰m/z：278.8［M+H］+，推测其分子量为278。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）谱的低场区有2个氢。δ7.10（1H，d，J=4.0Hz）和7.06（1H，d，δ=4.0Hz）分别为噻酚环上H-3和4位氢信号；中低场区可以观测到：δ4.82（2H，dd，J=4.5，6.5Hz）为H-3′位氢信号；δ 3.79（1H，dd，J=4.5，11.5Hz）和3.73（1H，dd，J=6.5，11.5 Hz）分别为H-4′位的氢信号；在高场区有一个明显的甲基峰信号：δ2.04（3H，s，H-5″）。13C-NMR（125MHz，CDCl3）谱中总共显示有13个碳信号，具体碳谱数据归属如下δ：4.8（C-5″）、48.7（C-4′）、63.1（C-3′）、64.1（C-3″）、66.3（C-2″）、79.1（C-1′）、79.7（C-1″）、83.6（C-4″）、90.7（C-2′）、123.4（C-5）、124.5（C-2）、132.7（C-4）、133.6 （C-3）。再结合文献［17］，确证化合物6为5-丁-1′-炔-3′-羟基-4′-氯-（2-戊-1″，3″二炔）-噻酚。

化合物7：黄色固体。在正离子ESI-MS谱中，可以看到准分子离子峰m/z：181.1［M+H］+，推测其分子量为180。1H-NMR（500MHz，CDCl3）谱中δ5.65（1H，s）为A环上H-3位的烯氢信号；高场区可观测到δ2.23（1H，br d，J=12.0 Hz，H-7a），1.73（3H，m，H-6a，6b，5a），1.47（1H，ddd，J=4.5，12.0，12.0 Hz H-7b）和δ 1.29（1H，m，H-5b）；此外低场区还可看到3个甲基信号：δ1.56（3H，s，H-8）、1.27（3H，s，H-9）、δ1.22（3H，s，H-10）。13C-NMR（125 MHz，CDCl3）谱中出现对应的11个碳信号，根据HSQC和HMBC等二维谱进一步归属碳谱数据，具体数据如下δ：19.7（C-6）、24.2（C-10）、24.3（C-8）、29.8（C-9）、36.5（C-4）、40.1（C-7）、41.7（C-5）、87.4（C-7a）、112.4（C-3）、172.2（C-2）、182.7（C-3a）。再结合文献［18］，确证化合物7为二氢猕猴桃内酯。

化合物8：黄色油状物。在正离子ESI-MS谱中，可以看到准分子离子峰m/z：197.0［M+H］+，推测其分子量为196。1H-NMR（500MHz，MeOD）谱的低场区有1个烯氢信号：δ5.74（1H，s，H-3）；中低场区δ4.21（1H，m，H-6）为6位的连氧氢信号。高场区几组特征信号，2组ddd峰：δ 2.41（1H，ddd，J=3.5，3.5，13.5 Hz，H-7a）、1.98（1H，ddd，J=3.5，3.5，14.5 Hz，H-5a）；和1组dd峰：δ1.52（1H，dd，J=3.5，14.5 Hz，H-5b）；1.74（1H，overlapped，H-7b）为2个亚甲基上的氢信号。此外，低场区还有3个明显的单峰：δ1.27（3H，s，H-9）、1.40（3H，s，H-10）和1.76（3H，s，H-8），为3个甲基的氢信号。13C-NMR（125 MHz，MeOD）谱中总共显示有11个碳信号。在低场区有3个碳信号：δ185.7和113.4为双键碳信号；δ174.5为酯羰基信号。具体碳谱数据如下δ：27.0（C-10）、27.5 （C-8）、31.1（C-9）、37.2（C-4）、46.5（C-7）、48.0（C-5）、67.3（C-6）、89.0（C-7a）、113.4（C-3）、174.7（C-2）、185.7（C-3a）。核磁数据与参考文献对照［19］，基本一致，确定该化合物8为黑麦草内酯。

化合物9：白色无定形粉末。在正离子ESI-MS谱中，可以看到准分子离子峰m/z：183.0［M+H］+，推测其分子量为182。在1H-NMR（500MHz，MeOD）谱低场区，可以看到一组ABX芳香氢质子信号：δ7.43 （1H，d，J=2.0 Hz，H-2），7.42（1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6），6.80（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），一组乙基氢质子信号：δ4.29（2H，q，J=7.0 Hz，H-8）；δ1.35（3H，t，J= 7.0 Hz，H-9）。在13C-NMR（125MHz，MeOD）谱上出现6个相应的芳香碳信号：δ122.9（C-1），117.4（C-2），146.2（C-3），145.7（C-4），115.9（C-5）和123.6 （C-6），一个羧基碳信号：δ168.5（C-7），一组乙基碳信号δ61.7（C-8），14.7（C-9）。经1H、13C-NMR谱数据推测和文献查阅［20］，确定化合物9为原儿茶酸乙酯。

［1］国家药典委员会.中国药典［M］.北京:化学工业出版社，2010:351-352.

［2］王浩，于增瑞.于增瑞教授“三期五法”治疗尿崩经验［J］.天津中医药，2014，31（6）:325-328.

［3］庄晓燕，杨菁，李华侃，等.热盛胃出血小鼠模型的制作及墨旱莲对其止血作用机制的研究［J］.数理医药学杂志，2010，23（1）:31-32.

［4］Lee ML，Ha NR，Yang H，et al.Antiproliferative activity of triterpenoids from Eclipta prostrate on hepatic stellate cells［J］. Phytomedicine，2008，15:775-780.

［5］景辉，白秀珍，杨学东，等.墨旱莲对小鼠胸腺细胞凋亡的调节作用［J］.数理医药学杂志，2005，18（4）:3181.

［6］王敬杰.中医药治疗特发性血小板减少性紫癜研究进展［J］.天津中医药，2004，21（6）:524-526.

［7］周仲瑛.同病异治、异病同治血小板增多/减少症案例探析［J］.天津中医药，2010，27（6）:441-444.

［8］卞竟芝，陈慧娲，张丽.等.应用补肾安神胶囊治疗慢性疲劳综合征1630例临床观察［J］.天津中医药，2005，22（6）:517.

［9］王达，陈宝贵.陈宝贵教授运用疏肝御神法治疗不寐经验总结［J］.天津中医药，2013，30（9）:515-516.

［10］袁继承，蒋永和，沈志滨.旱莲草化学成分的研究进展［J］.亚太传统医药，2009，5（1）:125-128.

［11］陈献，王艳红.墨旱莲的化学成分与药理作用研究进展［J］.广西中医学院学报，2008，11（1）:76-78.

［12］Omar OH，Babudri F，Farinola GM，et al.Synthesis of D-glucose and L-Phenylalanine substituted Phenylene-Thiophene oligomers［J］.Tetrahedron，2011，67（2）:486-494.

［13］Saravanan C，Liu CL，Chang YM，et al.Fulleropyrrolidines bearing Pi-Conjugated moiety for polymer solar cells: contribution of the chromophoric substituent on C-60 to the photocurrent［J］.Acs Applied Materials&Interfaces，2012，4（11）:6133-6141.

［14］Krishnaswamy NR，Seshadri TR，Sharma BR.The structure of a new polythienyl from Ecliptaalba［J］.Tetrahedron Letters，1966（35）:4227-4230.

［15］Boch R，Mehta B，Connolly T，et al.Singlet Oxygen Photosensitizing properties of Bithiophene and Terthiophene derivatives［J］.Journal of Photochemistry and Photobiology a-Chemistry，1996，93（1）:39-47.

［16］Ahmad VU，Alam N，Qaisar M.Acetylenic thiophenes from blumea obliqua［J］.Phytochemistry，1998，49（1）:259-261.

［17］Quintana N，Weir TL，Du J，et al.Phytotoxic polyacetylenes from roots of Russian Knapweed（Acroptilon Repens（L.）Dc.）［J］.Phytochemistry，2008，69（14）:2572-2578.

［18］Mori K，Khlebnikov V.Carotenoids and degraded carotenoids. 8.Synthesis of（+）-Dihydroactinidiolide，（+）-Actinidiolide and（-）-Actinidiolide，（+）-Loliolide and（-）-Loliolide as Well as（+）-Epiloliolide and（-）-Epiloliolide［J］.Liebigs Annalen Der Chemie，1993（1）:77-82.

［19］Kim MR，Lee SK，Kim CS，et al.Phytochemical constituents of carpesium macrocephalum F-R.Et S-Av［J］.Archives of Pharmacal Research，2004，27（10）:1029-1033.

［20］Wei DD，Wang JS，Kong LY.Reversal Effects of components from the fruits of Illicium Simonsii on human Adriamycinresistant Mcf-7 and 5-Fluorouracil-Resistant Bel7402 cells ［J］.Phytotherapy Research，2012，26（4）:562-567.

Isolation and identification of chemical constituents from Eclipta prostrata L.

MA Di1，HAN Li-feng2，LIU Er-wei2，XIA Ming-hui2，ZHANG Yi2，WANG Tao2
（1．First Teaching Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Key Laboratory of Traditional Chinese Medicinal Chemistry and Analytical Chemistry of Tianjin，Tianjin 300193，China）

［Objective］To isolate the chemical constituents of Eclipta prostrata L.and elucidate their structures. ［Methods］The compounds were isolated by silica gel，ODS，Sephadex LH-20 column chromatography and PHPLC，and their structures identified by MS and NMR.［Results］Nine compounds were isolated from 70%ethanol extract of Eclipta prostrata L.and identified as 2，2'；5'，2''-terthiophene（1），α-formylterthienyl（2），5-hydroxymethyl-2，2'；5'，2''-terthiophene（3），2，2'；5'，2"-terthiophene-5-carboxylic acid（4），5'-carboxaldehyde-5-（3-butene-1-ynyl）-2，2'-bithiophene（5），4'-chloro-1'-（5-penta-1，3-diyn-1-yl-2-thienyl）-but-2'-yn-3'-ol（6），dihydroactinidiolide（7），loliolide （8）and protocatechoic acid ethyl ester（9），respectively.［Conclusion］Compounds 6-9 are obtained from Eclipta prostrata for the first time.

Eclipta prostrata L.；chemical constituents；structure identification

R284

A

1673-9043（2015）03-0169-04

10.11656/j.issn.1673-9043.2015.03.11

天津市高等学校科技发展基金一般资助项目（2012 0203）；高等学校博士学科点专项科研基金（20121210110007）。

马迪（1982-），男，主管药师，主要从事中药药效物质基础研究。

王涛，E-mail:wangt@263.net。

（2015-01-04）