合成大麻素JWH-250的高效液相色谱分析方法研究

苗翠英，邱志远，翟晚枫，魏 巍，全雪峰，王兆玉

（1.中国人民公安大学刑事科学技术学院，北京 100038；2.公安部物证鉴定中心， 北京 100038）

合成大麻素JWH-250的高效液相色谱分析方法研究

苗翠英1，邱志远1，翟晚枫2，魏 巍1，全雪峰1，王兆玉1

（1.中国人民公安大学刑事科学技术学院，北京 100038；2.公安部物证鉴定中心， 北京 100038）

目的 建立合成大麻素JWH-250的高效液相色谱分析方法。方法 考查梯度洗脱的有机相初始浓度和梯度洗脱的陡度、流速、柱温、检测波长等参数，初步建立JWH250的高效液相色谱分析方法，并对专属性、线性关系、精密度、稳定性等指标进行方法验证， 进一步优化色谱条件，确定高效液相色谱法检测JWH-250的最佳条件。结果 在紫外检测波长为214 nm，有机相初始浓度为63%，梯度陡度为4.2%/min，流速为0.8 mL/ min，柱温 34℃条件下，JWH-250 在 0.2～10 μg/mL范围内线性良好，相关系数R=0.999 964 9，检出限（S/ N≥3）为 0.1 μg/mL，日内精密度（RSD）为0.64%，日间精密度（RSD）为1.72%。结论 实验表明，该方法测定合成大麻素JWH-250快速、灵敏、准确、可靠。

法医毒物学；高效液相色谱法；合成大麻素；JWH-250

合成大麻素是当今流行的一类新型策划药，是在管制药物分子结构上对一些不重要的地方加以修饰，得到的一系列与原药物结构相异，但效果相似甚至更强的“合法”药物，能够使吸食者高度兴奋，具有较强的致幻作用。若滥用，极易导致药物成瘾、心血管疾病、精神异常。合成大麻素按分子结构可分为苯甲酰基吲哚类、苯乙酰基吲哚类、萘甲酰基吲哚类、非经典结构大麻素等几类［1］，其中萘甲酰基吲哚类和苯乙酰基吲哚类合成大麻素是目前滥用比较严重的合成大麻素。JWH-250属于苯乙酰基吲哚类合成大麻素，是目前世界范围内较为流行的合成大麻素，中文名称1-戊基-3-（2-甲氧基苯乙酰基）吲哚［2］，分子式C22H25NO2，分子量335.1885，JWH-250的结构式见图1。我国2014年1月1日起实施的《精神药品品种目录》已将JWH-250列为一类精神药品进行管制［3］。本文以JWH-250标准品溶液为试样，通过改变梯度洗脱程序的有机相初始浓度和梯度陡度、流速、柱温、检测波长等参数，建立JWH-250的高效液相色谱分析方法，通过验证专属性、线性关系、精密度、稳定性等对色谱条件展开进一步优化和确证，最终确定高效液相色谱法检测JWH-250的最佳条件，以期为预防和打击合成大麻素类新型毒品犯罪活动提供技术支持和服务［4］。

图1 JWH-250的结构式Fig.1 Chemical structure of JWH-250

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Prominence UFLC（日本岛津公司），配有LC-20AD XR型泵、SIL-20AC XR型进样器、SPD-20A型紫外检测器、CTO-20AC 型柱温箱、数据处理软件LC solution；岛津ODS-SP型（150mm×4.6mm，5 μm）色谱柱；EYELA型涡旋混合器；KQ3200型超声振荡器；台式高速冷冻离心机（SIGMA公司，德国）；纯水仪（美国Millipore公司）。

JWH-250（1.0 mg/mL）、四氢大麻酚（Δ9-tetrahydrocannabinol THC， 100 μg/mL）标准品溶液（美国Cerilliant公司），大麻二酚（cannabidiol CBD，1.0 mg/mL）对照品、大麻酚（cannabidnol CBN，1.0 mg/mL）对照品（中国食品药品鉴定研究所）；乙腈色谱纯试剂（美国Fisher Scientific公司）；高纯水（经Millipore simplicity纯水系统制备）。

1.2 标准储备液和标准工作液

取1.0 mg/mL的JWH-250标准品溶液适量，用甲醇稀释，配制成质量浓度为0.1 mg/mL的标准储备液；取0.1 mg/mL的标准储备液适量，配制成质量浓度分别为0.05、0.02、0.01、0.005、0.002 mg/mL的系列标准工作液备用。

1.3 样品溶液的制备

在干燥清洁的实验环境下，对缴获的香料毒品进行充分研磨，精密称取适量，用20 mL甲醇定容，超声脱气20min，5000 r/min离心5 min，再经0.45 μm滤膜过滤，滤液备用。

2 结果与讨论

2.1 有机相初始浓度的选择

有机相初始浓度是指梯度洗脱程序开始时流动相中有机相占全部流动相的体积分数。本实验以乙腈-高纯水为流动相对检测物进行梯度洗脱［5］，在梯度陡度为1%/min、柱温为35℃、流速为1 mL/min的色谱条件下，考察有机相初始浓度（50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%）对各指标的影响。实验结果表明：有机相初始浓度自50%增加到80%的过程中，保留时间随有机相初始浓度增加而减少，从19.5 min降到了4.2 min；峰面积受有机相初始浓度变化的影响不大；峰高随有机相初始浓度增加而升高，从39332增加到81356；理论塔板数随有机相初始浓度增加而降低，从41847下降到7679。根据上述结果，暂定有机相初始浓度为63%。

2.2 梯度陡度的选择

在有机相初始浓度为63%、柱温为35℃、流速为1 mL/min的色谱条件下，将梯度陡度设为0.5%/ min、1.0%/min、1.5%/min、2.0%/min、2.5%/min、3.0%/min、3.5%/min、4.0%/min、4.5%/min进行实验，考察梯度陡度对各指标的影响。实验结果表明：梯度陡度自0.5%/min增加到4.5%/min的过程中，保留时间随梯度陡度增加而减少，从9.7 min降到了7.5 min；峰面积受梯度陡度变化的影响不大；峰高随有机相初始浓度增加而升高，从45808增加到85982；理论塔板数随梯度陡度增加而升高，从13706上升到26319。为保证较高的柱效和响应值，将梯度陡度选定为4.2%/min。

2.3 流速的选择

在有机相初始浓度为63%、梯度陡度为4.2%/ min、柱温为35℃的色谱条件下，将流速设为0.8、0.9、1.0、1.1、1.2 mL/min进行实验，考察流速对各指标的影响。实验结果表明：流速自0.8 mL/min增加到1.2mL/min的过程中，保留时间随流速增加而减少，从9.7 min降到了6.9 min；峰面积随流速的增加而减小，从715302减小到478663；峰高随流速的增加而降低，从82436下降到65134；理论塔板数随梯度陡度增加而降低，从27524降低到19092。据此将流速设定为0.8 mL/min。

2.4 柱温的选择

在有机相初始浓度为63%、梯度陡度为4.2%/ min、流速为0.8 mL/min的色谱条件下，将柱温设为30℃、32℃、34℃、36℃、38℃、40℃进行实验，考察柱温对各指标的影响。实验结果表明：柱温自30℃增加到40℃的过程中，保留时间随柱温增加整体趋势下降，从5.640 min降至5.313 min；但柱温自38℃升至40℃过程中，保留时间从5.302 min略升至5.313 min；峰面积基本保持不变；峰高随柱温的升高而上升，从68593增加到71772；理论塔板数随柱温升高整体趋势下降。据此确定流速为34℃。

2.5 检测波长的选择

为实现对不同波长的考察，本实验采用二极管阵列检测器（DAD）对JWH-250标准品溶液进行分析，光谱图见图2。JWH-250在波长200 nm附近吸收强度达到最大值。对最佳检测波长的选择，考虑以下两方面：（1）优选目标物质的较强吸收波长；（2）尽量避免流动相中本底的干扰。检测波长越低，越容易受到流动相本底干扰，基线随洗脱梯度变化幅度越大，可能对峰形和峰面积都造成不利影响，比如积分的漂移或者偏差等［6］，这些因素都有可能影响最终的定量结果。因此，最终确定最佳检测波长为214 nm。

图2 JWH-250的光谱图Fig.2 Spectrogram of JWH-250

2.6 优化前后对比

记录JWH-250标准溶液在预实验条件（检测波长为220 nm，有机相浓度为70%、梯度陡度为1%/ min，柱温为35℃，流速为1 mL/min）下的色谱行为，并与有机相初始浓度为63%、梯度陡度为4.2%/min、流速为0.8 mL/min、柱温为34℃、检测波长为214 nm的色谱条件下的色谱行为进行对比，考察实验方案的优化效果。

通过对比可知，经优化，JWH-250的保留时间略有滞留，由9.244 min升至9.678 min；但峰面积、峰高、理论塔板数数值都有显著提升，峰面积从574187升至637541，峰高从53190升至84841，理论塔板数从16662.038升至34787.312。因此，本实验的优化方案效果良好、切实可行。

2.7 专属性考察

由于在实际缴获的合成大麻素毒品中可能含有天然大麻素的成份，如大麻二酚（CBD）、大麻酚（CBN）和四氢大麻酚（THC），为了考察这三种天然大麻素成份对JWH-250是否存在干扰，将JWH-250标准品与上述几种天然大麻素的标准品混合制成待测试样，并用优化方法进行分析，色谱图见图3。JWH-250与其他组分之间的分离度均大于2，能够实现完全分离，方法专属性良好。

2.8 线性关系与检出限

精密吸取一定量0.1 mg/mL的JWH-250标准品溶液，用甲醇逐级稀释，配制成质量浓度0.05、0.02、0.01、0.005、0.002 mg/mL的系列标准工作液，分别进样，每份样品在相同条件下进样3次，进样量均为10 μL，在有机相初始浓度为63%、梯度陡度为4.2%/min、流速为0.8mL/min、柱温为34℃的色谱条件下进行分析，以JWH-250的质量浓度为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y）建立线性回归方程：Y=36525020X-4291.956，R2=0.999 929 9，R=0.999 964 9。结果表明，JWH-250在检测浓度2～100 μ g/ ml范围内线性良好，相关系数为0.999 96。本实验以信噪比S/N（p/p）≥3确定检出限，得到JWH-250的检出限为0.1μg/mL。

2.9 精密度

取0.01 mg/mL的JWH-250标准品溶液，在改善后的色谱条件下，1日内分别进样6次，计算日内相对标准偏差。连续6日，每天平行进样2次，取平均值Xn（n=1，2，3，4，5，6），计算X1～X6的日间相对标准偏差。结果表明，JWH-250的日内相对标准偏差为0.64%，日间相对标准偏差为1.72%，精密度良好。

2.10 实际样本分析

采用1.3样品处理方法，在实验确定的优化色谱条件下对案件缴获的香料毒品样品进行检测分析，考察目标检测物与其他组分的分离效果和抗干扰性，评价优化方案的实际操作性。得到某一实际样本的色谱图见图4。经过与标准品比对，色谱图中JWH-250峰，能与其他物质清晰地分离。实际样本所得峰面积代入线性回归方程，计算得实际样本中JWH-250的质量浓度c为0.01512 mg/mL；将c=0.01512 mg/mL代入公式：样品中的目标物含量（纯度）% = 0.01512mg/mL×稀释体积/样品重量×100%，最后可得JWH-250的含量为0.53%。

图3 混标试样色谱图Fig.3 Chromatogram of the mixed standard sample

图4 实际样本色谱图Fig.4 Chromatogram of a seized drug sample

3 结 论

本实验建立了合成大麻素JWH-250的高效液相色谱分析法。实验结果表明：在紫外检测波长214 nm，有机相初始浓度63%，梯度陡度4.2%/min，流速 0.8 mL/ min，柱温 34℃条件下，JWH-250 在2～100 μg/ml范围内线性良好，相关系数大于 0.999 96，检出限（S/ N≥3）为 0.1 μg/ml，精密度良好。在优化条件下，对JWH-250与大麻酚、四氢大麻酚及大麻二酚混合液进行检测，JWH-250能与其他组分很好分离。经对案件中实际样本进行验证实验，该方法操作简便、快速、可靠，分离效果好，是一种可行的分析方法，可用于公安实践中JWH-250的检测分析。

［1］ 钱振华，徐鹏，刘克林，等.当今策划药的流行趋势［J］.刑事技术， 2013（3）:14-18.

［2］ 吴忠平，郑水庆，严松茂，等.气相色谱-质谱结合准确质量测定快速鉴定合成大麻素GC-MS［J］.分析测试技术与仪器，2012（4）:197-203.

［3］ 国家食品药品监督管理总局，中华人民共和国公安部，中华人民共和国国家卫生和计划生育委员.精神药品目［M］.北京:人民卫生出版社，2013.

［4］ 刘密新，罗国安，张新荣.仪器分析［M］.第2版.北京:清华大学出版社， 2002:217-240.

［5］ 朱彭龄.梯度洗脱［J］.分析测试技术与仪器，2010（1）:56-59.

［6］ 翟晚枫，张春水，高利生.高效液相色谱法同时测定新型香料毒品中的10种合成大麻素［J］.分析测试学报，2014，33（8）:1-6.

引用本文格式：苗翠英， 邱志远， 翟晚枫， 等.合成大麻素JWH-250的高效液相色谱分析方法研究 ［J］.刑事技术， 2015，40（ 5）:396-399.

Determination of Synthetic Cannabinoid JWH-250 by HPLC

MIAO Cuiying1，QIU Zhiyuan1，ZHAI Wanfeng2，WEI Wei1，QUAN Xuefeng1，WANG Zhaoyu1
（1.School of Forensic Science and Technology， People’s Public Security University of China， Beijing 100038， China； 2.Institute of Forensic Science，Ministry of Public Security， Beijing 100038， China）

Objective As one kind of the most popular designer drugs， synthetic cannabinoid has been presenting a tough challenge for law enforcement and public security officials.JWH-250， one of the phenacyl-indoles abused all around the world， has recently been included under the latest Psychotropic Drug Directory by Chinese government.In order to improve the accuracy and sensitivity of determining JWH-250 in actual cases and enrich the research means for this drug， high performance liquid chromatography （HPLC） was utilized.Methods Chromatographic parameters were tested and optimized based on the performance of least interference to the results quality and repeatedness， together with the ascertainment of linear relationship， precision and stability.Eventually， the ideal conditions for detection of the synthetic cannabinoid JWH-250 by HPLC were established.Results Under optimized conditions （UV wavelength at 214 nm， initial concentration of the organic phase of 63%， gradient steepness of 4.2%/min， fl ow rate of 0.8 mL/min， and column temperature of 34°C）， a good linearity was achieved over the range of 2～100 μg/ml， with the correlation coeffi cient R=0.9999649 and limit of detection（S/N≥3）as to 0.1 μg/mL.The precision was good with the intra-day and inter-day RSDs less than 0.59% and 1.74%， respectively.JWH-250 can be completely separated from Δ9-tetrahydrocannabinol （THC）， cannabinol （CBN） and cannabidiol （CBD）.Conclusions The method is rapid， sensitive and accurate， applicable to quantitative determination of the synthetic cannabinoid JWH-250 by validation experimen t of a sample from an actual case， a promising choice for providing technical support to prevent and combat the drug-related criminal activities.

forensic toxicology； high performance liquid chromatography； synthetic cannabinoids； JWH-250

DF795.1

A

1008-3650（2015）05-0396-04

10.16467/j.1008-3650.2015.05.012

苗翠英（1962—），女，四川人，教授，本科，研究方向为分析化学、毒物毒品技术。 E-mail: miao_cy@sina.com

2015-06-23