分析液相色谱仪检定方法和注意事项

尹亮

(安徽省计量科学研究院 安徽合肥 230000)

在我国各个行业应用到液相色谱仪时,其在检测过程中展现了优点。这种优点是符合现在社会发展所需的。在不影响正常分析质量的情况下,能够提高分析速度,增加分析效率。同时还可以把检测样板中的各种物质分析的更加分析到位。但是在检测过程中,由于减少了一些麻烦的步骤,就更加需要在使用仪器中注意规定的检定方法,这样才能保证检测的准确性。同时有关的注意事项也要仔细观看,并注意按照其步骤进行,减少损失。

1 液相色谱仪的原理

高压泵利用高压把流动相压进系统中,然后样品溶液从进入到流动相中,并跟随流动相运动,最终进入色谱柱中,由于样品溶液的各个组成物质具有不同的性质,在色谱柱中运动时会有一定的差异,经过一段时间的运动以后,运动速度差异会变得越来越大,这样就被分成多个部分分别从色谱柱中流出,这样在检测器中就记录下了这些样品组分的浓度,然后以图谱的形式呈现出来。

2 液相色谱仪的组成

液相色谱仪主要由加入样品系统、输送样品系统、分离样品系统、检测结果系统和结果分析处理系统组成。

2.1 样品加入系统

一般是用安装有隔膜的注射器或者是利用高压来加进样品,为了提高所分析样品的重复性,要在加样时注意使每次加入的样品量保持相同。

2.2 样品输送系统

高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分组成了输送样品系统。高压泵高的压强可以使待分析样品液体以相当大的速度通过层析柱,较大速度可降低样品在层析柱中向四周扩散。贮存器和密度梯度仪的作用是使样品流动相随着所用固定相和样品的变化而变化,具体包括改变洗脱液的吸水性、阴阳离子浓度、PH值,这样就可使各种样品成分最终都可以实现有效的分离,增强分离的效果。

2.3 样品分离系统

首先,长度一般为1dm～5dm,内径为0.2cm～0.5cm的色谱柱、有时候需要有连接管和保持温度恒定的仪器等组成了样品分离系统。色谱柱的材料是不锈钢,厚壁玻璃管、钛合金等。色谱柱内是半径为2.5μm～5μm的固定相,固定相中的基质材料是树脂或硅胶。

其次,固定相中所装的物质粒度小,柱床特别容易达到均匀、致密的状态,这样就可以极大地降低扩散效应。

最后,恒温器可以使仪器内的温度使从25℃升高到60℃左右,温度越高,样品在层析柱中传输的速度也就越大,分析时间也就减少,从而提高液相色谱仪的分析分离效率。

3 液相色谱仪各部分的检定方法和注意事项

由于我国在应用液相色谱仪的领域越来越多,所以对其在检测方面的要求也越来越多,并且为了保证检测结果准确无误,更需要对它在使用过程中的注意事项加以详细的阐述,来保证液相色谱仪使用的正确性,和延长使用寿命。

3.1 泵流量设定量误差Ss和流量稳定性误差SR

3.1.1 检定方法

泵流量的检测是根据液相色谱仪上标定的流量标准来设定好标准流量,然后打开仪器,按照正确的操作步骤进行操作,等到压力趋于稳定以后在规定的时间内收集流动相于处理过可以直接使用的容量瓶中,同时由同一个人计时,在规定的时间内收集好流动相,然后在分析天平上称量所收集的流动相的质量。

3.1.2 注意事项

在收集数据的同时要注意把相关的实验材料保管好。由于相关的实验材料是易挥发液体,所以要掌握好实验的速度和时间。并且在实验过程还要有条不紊的进行每一个步骤的安排,以便减少实验过程的失误和一定的经济损失。并且要把详细的实验记录进行整理,确保实验记录的可靠性。

3.2 色谱柱温箱温度的检定

3.2.1 检定方法

在色谱柱温箱内固定一个温度计,使温度计的探头能够测量色谱柱的温度。分别选择35℃和45℃作为检测温度进行检定。按照液相色谱仪的操作规程操作,等到温度稳定在一定值时,记录下温度计的读数,与此同时开始用秒表计时,每隔10min记一次读数,总共记录7组数据,然后求出算术平均数,算数平均数与所设定的35℃或45℃的差值就是柱温箱温度设定值误差ΔTs,而读数中最高温度与最低温度的差值是控温稳定性Tc。

3.2.2 注意事项

温度的升高在通常情况下会加大理论塔板数,峰和峰之间的距离变小,但是要保证每个峰的面积不变,所以在峰距变小的情况下,峰的高度就会增高,所以温度升高会使保留的时间变短,而温度降低正好相反。

3.3 基线噪声与基线漂移的检定

3.3.1 检定方法

在进行这个项目的检定时,用C18作为色谱柱的材料,用无水甲醇作为液相色谱仪中的流动相,设定适当的高压使流速为1.0dm3/min,并且使仪器处于最灵敏的状态,记录纸的移动速度设定为0.5～1cm/min。按照正确的操作步骤操作,待稳定运行半小时后,根据检测器的衰减倍数和对应的标度来算基线噪声。所用的公式是Nd=KB。基线漂移的值是在一个小时内检测器基线偏离坐标原点的距离。

3.3.2 注意事项

在进行此项目鉴定时,仪器中不能有无水甲醇以外的其他物质作为流动相;如果基线处于非正常状态,那么需要排除故障使仪器处于正常工作状态,这样测定的值才具有真实性;在测得基本的数据以后,要注意在计算过程中换算各个数据的单位,否则所得结果将是不正确的。

4 结语

我国由于快速的发展,使用液相色谱仪的领域越来越广泛。但是液相色谱仪在使用过程中的检定方法是需要十分重视的,因为不按照规定的使用方法,是会导致液相色谱仪在使用过程中产生检测误差,影响检测结果。并且在使用过程中,还需要对注意事项加以查看,以免在使用过程中由于不注意而导致结果不同。所以要详细分析鉴定方法。

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