丹参茎叶质量标准研究

刘 涛，罗小伟，梁 悦，王 鸿，焦 芳，伍月，张 敏，赵 群，徐玉玲

(成都大学 生物工程学院，四川 成都 610106)

0 引 言

丹参为唇形科植物丹参的干燥根及根茎，是中药中应用最早、最广泛的药物之一，首载于《神农本草经》.丹参具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痛之功效［1］，临床常用于心血管疾病、急慢性肝炎、抗菌消炎等［2］.丹参中主要含脂溶性的二萜醌类和水溶性的酚酸类成分，其传统用药部位为根和根茎，弃去茎叶部分，但现代药理试验已证明丹参茎叶的药理作用与根、根茎相似，临床疗效类似［3－4］.丹参地上部分约占全株植物的67%［5］，药源丰富，对其加以开发利用意义重大.

本研究选择采收于四川中江县的丹参茎叶为原药材，参照《中国药典》2010 版一部丹参项下标准，对丹参茎叶质量进行了研究，拟为其质量评价和使用提供依据.

1 仪器与试剂

1.1 仪 器

实验所用仪器包括:P2302II 型高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司)，KQ-100 型超声波清洗器，RE-5205B 型旋转蒸发仪.

1.2 试 剂

实验所用试剂包括:丹酚酸B 对照品(批号，111562－201212)，迷迭香酸对照品(批号，111871－201404)，均购自中国食品药品检定研究所;丹参茎叶(批号，20140703、20140813、20140914)，采自中江石泉乡;乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯，均购自成都市科龙化工试剂厂.

2 方法与结果

2.1 性 状

丹参植株性状:其茎直立呈四棱形，具多级分枝，被长柔毛;叶对生，为奇数羽状复叶，叶片阔卵形或类圆形，边缘有锯齿;小叶3 或5，较小，长3.3 ～6.5 cm，宽3 ～4.5 cm，总叶柄长4.5 ～11 cm;轮伞花序组成顶生或腋生的假总状花序;花萼钟状，紫色;花冠蓝紫色，唇形.

2.2 测 定

2.2.1 总灰分测定.

按照《中国药典》2010 版［6］附录IX K 项下总灰分测定法对丹参茎叶进行测定，结果分别为9.45%、8.63%，故规定其灰分限度不得超过7.22%.

2.2.2 酸不溶性灰分测定.

按照《中国药典》2010 版［6］附录IX K 项下酸不溶性灰分测定法对丹叁茎叶进行测定，结果分别为0.86%、0.82%，故规定其酸不溶性灰分限度不得超过0.67%.

2.2.3 浸出物测定.

按照《中国药典》2010 版［6］附录X A的水溶性浸出物(热浸法)对丹参茎叶进行测定，结果分别为18.24%、18.13%，故规定其浸出物限度不得少于14.54%.

2.3 薄层色谱鉴别

2.3.1 对照品溶液的制备.

取丹酚酸B 对照品适量，加75%甲醇制成每1 mL 含2 mg 的溶液，作为对照品溶液.

2.3.2 供试品溶液的制备.

取丹参茎叶粉末(批号，20140703)0.2 g，加75%甲醇25 mL，加热回流1 h，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液.

2.3.3 鉴别试验.

按照薄层色谱法［6］进行试验.吸取上述2 种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶GF254 薄层板上，以甲苯∶ 三氯甲烷∶ 乙酸乙酯∶ 甲醇∶ 甲酸(2∶ 3∶ 4∶0.5∶ 2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(波长254 nm)下检视.供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，具体见图1.

图1 丹参茎叶TCL 图

2.4 迷迭香酸、丹酚酸B 含量测定

2.4.1 色谱条件.

测定的色谱条件为:P230II(大连伊力特公司)，SinoChrom ODS-BP 色谱柱(4.6 mm × 250 mm，5 μm)，流动相，甲醇∶ 乙腈∶ 甲酸∶ 水(30∶ 10∶ 1∶59)，流速1.0 mL·min－1，检测波长为286 nm，进样量10 μL，柱温为室温.

2.4.2 对照品的制备.

分别取丹酚酸B、迷迭香酸对照品适量，精密称定，置于棕色量瓶中，加75%甲醇分别制成每1 mL含丹酚酸B 0.1237 mg、迷迭香酸0.4792 mg 的对照品溶液;另取丹酚酸B、迷迭香酸对照品适量，精密称定，置于棕色量瓶中，加75%甲醇制成每1 mL 含丹酚酸B 0.0634 mg、迷迭香酸0.0923 mg 的混合对照品溶液.

2.4.3 供试品制备条件的选择.

在供试品制备时，本研究分别采用超声和回流2 种方式进行，发现回流效果较好.同时还考察了以水、50%甲醇、75%甲醇为溶媒，溶媒用量为25、50 mL，回流时间为0.5、1、1.5 h 时对丹参茎叶中迷迭香酸、丹酚酸B 含量的影响.最终确定，当溶媒为75%甲醇，用量为50 mL，回流1 h 时制备出的丹参茎叶供试品中迷迭香酸、丹酚酸B 含量最高，这与《中国药典》2010 版［6］丹参项下含量测定结果一致.

2.4.4 供试品的制备.

取丹参茎叶粉末(过3 号筛)约2.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定，用75%甲醇补足减失的液体，摇匀，滤过，取续滤液，制得供试品溶液.

2.4.5 线性关系考察.

精密吸取迷迭香酸、丹酚酸B 混合对照品溶液2、4、8、10、14、20 μL 分别进样，测定其峰面积，并以峰面积Y 对进样量X 进行线性回归得:

①迷迭香酸线性回归方程，

y=181.44X－10.493，r=0.9999

②丹酚酸B 线性回归方程，

y=59.180X+18.303，r=0.9993.

结果表明，迷迭香酸、丹酚酸B 分别在0.1846～1.18460 μg、0.1268 ～1.2680 μg 范围内与峰面积成良好线性关系.

2.4.6 精密度实验.

精密吸取迷迭香酸、丹酚酸B 混合对照品溶液10 μL，按照“2.4.1”项下色谱条件，重复进样6 次，记录峰面积.结果显示，迷迭香酸、丹酚酸B 峰面积RSD 分别为0.7991%和1.5413%，实验结果表明，本方法精密度较好.

2.4.7 稳定性实验.

精密吸取“2.4.4”项下方法制备好的供试品溶液10 μL，按照“2.4.1”项下色谱条件，分别于0、1、2、4、6、8 h 进样，测定峰面积.结果显示，迷迭香酸、丹 酚 酸 B 峰 面 积 RSD 分 别 为 0.5057% 和1.9486%.实验结果表明，供试品溶液8 h 内稳定.

2.4.8 重复性实验.

按照“2.4.4”项下方法平行制备6 份供试品溶液.按照“2.4.1”项下色谱条件，测定迷迭香酸、丹酚酸B 峰面积RSD 分别为0.7538%和1.9321%.实验结果表明，供试品溶液重复性良好.

2.4.9 回收率实验.

取已知含量的丹参茎叶粉末样品6 份(过3 号筛)，每份约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，在6份样品中平行加入精密移取迷迭香酸对照品4 mL，丹酚酸B 对照品2.3 mL，按照“2.4.4”项下方法制成供试品溶液，按“2.4.1”项下色谱条件测定其含量，计算加样回收率(见表1).实验结果表明，本方法回收率良好.

表1 加样回收率实验结果(n=6)

2.4.10 样品测定.

分别取7、8、9 三个月份的丹参茎叶粉末(过3号筛)每份约2.0 g，按照“2.4.4”项下方法平行制备3 份供试品溶液.按照“2.4.1”项下色谱条件测定其含量，结果如表2、图2 所示.

表2 丹参茎叶中迷迭香酸和丹酚酸B 的含量的测定结果

图2 丹参茎叶HPLC 图谱

3 讨 论

丹参主要分布于四川、陕西、河南等地.丹参植株采收后，茎叶通常被丢弃.研究发现，丹参茎叶中含有大量的迷迭香酸、丹酚酸B 等药用成分［7－10］，恰当地开发利用丹参茎叶，对于合理利用丹参植株以及保护环境和节约资源都有一定的意义.本研究建立了丹参茎叶的质量标准，有利于对其进行系统质量控制，为其合理利用提供质量保证.

在研究的过程中发现，丹参茎叶中含有丹酚酸B，同时迷迭香酸的含量较高，而相关文献对同时测定丹参茎叶中迷迭香酸和丹酚酸B 的含量报道较少，对此，本研究建立了相关测定方法，经实验，色谱条件重复性良好，主要成分峰的分离度良好，专属性强，该检测方法操作简便，符合相关技术要求.需说明的是，在实验过程中发现，不同月份丹参茎叶均含有迷迭香酸和丹酚酸B，但含量具有显著性差异，对此，本研究将做进一步研究.

［1］肖禾，宋民宪，赖娟.国家药品标准中丹参的质量控制情况［J］.中国药事，2006，20(1):57－59.

［2］王新胜，吴艳芳，赵瑞娜.丹参地上部分活性成分TLC 分析［J］.海峡医学，2007，19(12):46－47.

［3］倪学武，苏静.丹参地上部分有效成分的初步研究［J］.中国药学杂志，1995，30(6):336－338.

［4］齐永秀，曹明亮，万建建，等.高效液相色谱法测定白花丹参根、茎、叶中丹参素和原儿茶醛的含量［J］.中国医院药学杂志，2007，27(12):1772.

［5］李香，齐永秀.泰山产的三种丹参有效成分含最的分析比较［J］.药学实践杂志，2008，26(5):362:365.

［6］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［S］.北京:化学工业出版社，2010.

［7］李福荣，史卫锋，夏作理.HPLC-MS 法测定白花丹参叶中丹酚酸B 的含量［J］.中华中医药学刊，2007，25(8):1650－1652.

［8］李正国，石俊英，张中湖.丹参茎、叶中丹酚酸B 的HPLC法比较分析［J］.药学实践杂志，2007，25(5):307－309.

［9］周凤琴，黄尚荣，王婷，等.丹参叶化学成分的初步研究［J］.山东中医药大学学报，2007，31(6):504－507.

［10］高允生，齐永秀，李珂，等.白花丹参茎叶水提物对小鼠缺氧模型的保护作用［J］.中国中医药科技，2006，13(3):171－172.