甜罗勒提取物的抗氧化作用以及心血管疾病治疗研究

晨曦等

【摘要】目的 探讨甜罗勒提取物的抗氧化作用活性和临床心血管疾病治疗方向。方法 通过甜罗勒乙醇提取物对DPPH和ABTS自由基清除能力的测定研究其抗氧化活性根据其抗氧化活性检测其治疗心血管疾病的有效性和临床应用方案。结果 平行测定三次，结果表明甜罗勒70%乙醇提取物具有很好的清除DPPH自由基的作用，IC50为0.047 mg/mL，有很好的清除ABTS自由基的作用，IC50为0.043 mg/mL。结论 甜罗勒提取物具有良好的抗氧化作用和心血管疾病治疗的研究价值。

【关键词】甜罗勒；DPPH和ABTS；抗氧化；心血管

【中图分类号】R54 【文献标识码】A

甜罗勒学名（Sweet Basil），原产自埃及，系一年生草本，甜罗勒是一种从国外引进的另类洋野菜，含有蛋白质、纤维素，碳水化合物、维生素A、C和钙，因其高营养、无公害而倍受消费者瞩目。甜罗勒不仅口味独特，而且还具有药用养生价值。可治胃痉挛、肾脏病及跌打损伤诸症，又具有消食、去恶气、消水气、明目的功效，久食健身、益智、滋颜、延缓机体衰老。但是，目前尚未见甜罗勒提取物在抗氧化活性和心血管疾病治疗方面的实验报道。本文通过甜罗勒乙醇提取物对DPPH和ABTS自由基清除能力的测定，研究其抗氧化活性；为甜罗勒临床应用的研究提供科学根据。

1 资料与方法

1.1 一般材料

甜罗勒购自厦门燕来福制药有限公司（国药准字20090165）。DPPH（1，1-d-ipheny-l 2- picryhydrazyl）及ABTS（2，2.-azinobis-3-ethy -lbenzothiazolin-6-sulfonic acid）购自美国Sigma公司，旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；SHB-ⅢA循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；水浴锅（上海爱朗仪器有限公司）；电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；多功能酶标仪 SpectraMax M2（Molecular Devices）；多功能粉碎机（永康市小宝电器有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 提取方法

甜罗勒晾干后，取30 g加入480 mL 70%乙醇浸泡40 min，85℃水浴回流提取2 h，过滤，将滤液置于旋转蒸发仪中减压回收乙醇后得到粗浸膏，将粗浸膏置于-80℃结冰后用冷冻干燥机进行干燥，备用。

1.2.2 甜罗勒提取物清除DPPH自由基能力的测定

将甜罗勒提取物用70%乙醇配成不同浓度的溶液备用，DPPH用70%乙醇配成0.04 mg/mL的溶液，吸取提取物溶液75 μL于96孔板中，加入DPPH溶液225 μL作为样品组；以70%乙醇代替DPPH溶液作为样品背景组，以70%乙醇代替提取物溶液作为阴性对照组，置于30°培养箱中反应30 min， 混匀后于室温避光静置30 min，在517 nm处测定吸光度值，其中样品孔为B，样品背景孔为C，阴性对照孔为A[1]。

1.2.3 甜罗勒提取物清除ABTS自由基能力的测定

将甜罗勒提取物用70%乙醇配成不同浓度的溶液备用。

1.2.3.1 配置ABTS工作液

5 mL 7mmol/L ABTS和88μL 140 mmol/L过硫酸钾混合，室温，静置过夜，使用前用无水乙醇稀释至734 nm波长下吸光度为（0.70±0.02）。

1.2.3.2 加样

称取一定质量样品，溶于70%乙醇，然后稀释到所需浓度

A1：0.1 mL样品+4 mLABTS

A2：0.1 mL样品+4 mL无水乙醇

A3：0.1 mL70%乙醇+4 mL ABTS

A0：0.1 mL70%乙醇+无水乙醇

混匀，混匀后开始计时，于734 nm测定每分钟吸光度[2]。

2 实验结果

2.1 采用DPPH法测定甜罗勒乙醇提取物抗氧化活性

按DPPH清除率（%）=[1-（B-C）/A]×100%公式计算甜罗勒乙醇提取物对DPPH自由基的抑制率的IC50值，平行测定三次。结果表明甜罗勒70%乙醇提取物具有很好的清除DPPH自由基的作用，IC50为0.047 mg/mL，实验结果见表1，图1。

2.2 采用ABTS法测定甜罗勒乙醇提取物抗氧化活性

按ABTS清除率（%）=[1-（B-C）/A]×100%公式计算提取物对ABTS自由基的抑制率，平行测定三次。计算甜罗勒乙醇提取物对不同提取物对ABTS自由基清除的IC50值。结果表明甜罗勒70%乙醇提取物具有很好的清除ABTS自由基的作用，IC50为0.043 mg/mL，实验结果见表2，图2。

3 讨 论

氧化和抗氧化的失衡是很多心血管疾病发病机制中的重要环节，是导致心血管系统结构功能异常的重要原因之一。一系列对抗自由基、防止损伤的洗脱在机体进化过程中形成，其中包括酶性清除剂（如VitE，VitA，VitC，谷胱苷肽等）。如果氧自由基生成异常增多或肾抗氧化能力下降，超过体内自由基清除系统地清除能力，造成体内氧自由基（ROS）大量堆积[4]。氧自由基作用于人体细胞，引起核酸（DNA）、蛋白质和脂质等的氧化或再氧化损害，破坏细胞结构的完整性和功能，造成细胞氧化应激损伤。大量研究证实机体抗氧化能力的下降，氧化与抗氧化的失衡，导致活性氧产生过多，在高血压、糖尿病和冠心病的发生发展过程中有重要意义。机体内氧自由基可产生大量导致病理损害因素，此时就必须有外来提供的物质才能消除其链式反应， 这就是自由基清除剂[5]。已知维生素C、维生素E、辅酶Q等是存在于机体的正性分子物质， 亦是抗氧化剂。DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其醇溶液呈紫色，且需低温避光储藏，具有单一电子，故能接受一个电子或氢离子，在波长为517nm下具有最大吸收[6]，从而以评价试验样品的抗氧化的能力。ABTS在适当的氧化剂作用下被氧化呈绿色，而当有抗氧化物存在的情况下ABTS的产生就会受到抑制 [7]。因此，增加内源性抗氧化酶的活性，减轻人体细胞的氧化应激损伤，已成为目前延缓脏器疾病的有效方法。

抗氧化剂可以帮助捕获并中和自由基， 防止自由基对人体的损害。临床治疗动脉粥样硬化、糖尿病、肾病等各个领域都应用到抗氧化剂。常见维生素，维生素C和维生素E的抗氧化强度嫌贵较弱，并不是人体内有效的抗氧化剂，但是目前合成的抗氧化剂普罗布考的有效性虽然已得到证实，但因为合成抗氧化剂通常具有一定的毒副作用，不适合长期使用。因此，寻找天然、高效、低毒的抗氧化剂成为一种必然的趋势。植物类中药是天然抗氧化剂的重要来源，其所含的天然抗氧化剂不但有抑制体内脂质过氧化和清除自由基的作用，同时可促进体内抗氧化酶与内源性抗氧化剂的合成，具有比合成抗氧化剂更多的优越性，在心血管药物治疗领域的抗氧化作用和调节氧化平衡等方面有重大的研究价值，而甜罗勒提取物有良好的抗氧化作用，能有效减轻机体的氧化应激损伤，进一步细化后可作为复方单体应用于临床心血管治疗也可作为临床心血管药物开发的一个研究方向。

参考文献

[1] 巩红岩，秦元旭，王更富，等.葛根素对大鼠体外循环后心肌缺血再灌注损伤的保护作用及抗氧化应激机制的探讨[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（1）：165-168.

[2] 陈玉霞，刘建华，林 峰，等.DPPH和FRAP法测定41种中草药抗氧化活性[J].实验室研究与探索，2011，30（6）：11-14.

[3] 王 勇，陈 英，曾 军，等.不同补光条件对冬季栽培甜罗勒生物学性状及精油成分的影响[J].安徽农业科学，2011， （11）：5647-5648.

[4] 曹 燕，庞市宾，徐 磊，等.金鸡菊提取物体外抗氧化活性[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（12）：144-147.

[5] Thaipong K， Boonprakob U，Crosby K，et al.Comparison of ABTS，DPPH，FRAP，andORAC assays for estimating antioxidant activity from guava fruit extracts[J].Journal of food composition and analysis，2013，19（6）：669-675.

[6] 戴喜末，熊子文，罗丽萍.响应面法优化野艾蒿多糖的超声波提取及其抗氧化性研究[J].食品科学，2011， 32（8）：93-97.