PEDV、PRV和PCV—2混合感染引起新生仔猪腹泻的诊治与分析

2015-07-21陶长城等

湖北畜牧兽医 2015年5期

陶长城等

摘要：对一例猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪伪狂犬病毒（PRV）和猪圆环病毒2型（PCV-2）混合感染病例的病理变化和病原检测情况进行了介绍，并提出了相关防控措施。

关键词：猪流行性腹泻病毒（PEDV）；猪伪狂犬病毒（PRV）；猪圆环病毒2型（PCV-2）；混合感染

中图分类号：S858.28 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2015）05-0015-02

2014年6月份，河南省信阳市某200头母猪规模场的1～3日龄新生仔猪发生以呕吐、腹泻为主要症状的疫病，发病率90%，死亡率85%。经过临床诊断、病理剖检及实验室诊断确诊为猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪伪狂犬病毒（PRV）和猪圆环病毒2型（PCV-2）混合感染，采取针对措施后，获得较好防治效果，现将其报道如下。

1 发病情况

2014年6月中旬，河南省信阳市某存栏200头母猪规模猪场里，出生几个小时至3 d的仔猪突然呕吐，紧接着水样腹泻，脱水衰竭死亡，个别仔猪出现划水、角弓反张等神经症状。对病仔猪使用止泻药、庆大霉素、喹诺酮类等药物但治疗无效。怀疑为传染性胃肠炎和流行性腹泻感染，给母猪进行疫苗紧急预防注射未能控制新生仔猪发病。发病率90%，死亡率85%。选取2头症状典型病仔猪送至信阳市动物疫病检测实验室进行诊断。

2 病理变化

解剖发病仔猪可见其肺局部水肿；肝、脾有散在灰白色坏死点、黄染；胃黏膜充血；肠壁变薄呈半透明状，肠系膜充血；淋巴结肿胀、出血、坏死；肾散在针尖大小出血点；脑脊液增多似胶冻样。其他器官未发现明显病变。

3 实验室诊断

3.1 主要病原体PCR检测

仔猪剖检后，收集其脾脏、脑、淋巴结和肺脏，经组织研磨器研磨后，离心取上清液，利用PCR方法检测猪瘟病毒（CSFV）、PRV、PCV-2、TGEV和PEDV，相关检测引物序列见表1，由上海生工生物工程有限公司合成。

3.1.1 CSFV、PEDV和TGEV的检测 RNA的提取按照RNA提取试剂盒（购自上海捷瑞生物工程有限公司）操作说明进行，利用反转录试剂盒（由Thermo公司生产）进行反转录，反应体系为：RNA模板4 μL、5×buffer 4 μL、dNTP 2 μL、下游引物（CSFV-A，10 μmol/L）1 μL、反转录酶 1 μL、RNA酶抑制剂1 μL，DEPC水7 μL。反应条件：42 ℃ 45 min，70 ℃ 5 min，4 ℃冷却。PCR反应体系：PCR反应液12.5 μL，模板3 μL，上下游引物各0.75 μL，加水至25 μL。PCR反应程序：95 ℃ 5 min，95 ℃30 s、55 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s、共35个循环，72 ℃ 7 min。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳后，紫外灯下观察结果。

3.1.2 PRV和PCV-2的检测 DNA的提取按照DNA提取试剂盒（购自上海捷瑞生物工程有限公司）说明书进行操作，PCR反应体系和反应程序均同3.1.1。

3.2 检测结果

PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳后，具体结果见图1。由图1可见，检测样品泳道1、2和5分别检测有PRV（279 bp）、PCV-2（189 bp）和PEDV（457 bp）的DNA存在；TGEV和CSFV检测未见有目的片段DNA出现，结果为阴性。

3.3 细菌性病原检测

选取解剖仔猪的小肠内容物接种伊红美兰琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基，选择肺脏和淋巴结组织接种普通营养琼脂培养基，37 ℃培养24 h。结果均未见有细菌生长。

综合以上实验室检测结果，确定该养殖场为PEDV、PRV和PCV-2混合感染引起的仔猪腹泻。

4 防控措施

4.1 母猪群

全群采用猪伪狂犬弱毒疫苗连续免疫2次，间隔2～3周，选取典型未用药治疗的仔猪，采集肠道、肺脏和脾脏等组织制作组织灭活疫苗，所有母猪普免2次，间隔2～3周，产前45 d和20 d各进行1次免疫。

4.2 育肥猪

仔猪出生后立即使用猪伪狂犬弱毒疫苗喷鼻免疫，每个鼻孔0.5头份。

4.3 消毒和灭鼠