CA125、HE4和ATM蛋白联合检测对卵巢癌的诊断价值

樊 卫，祁金友，韩 笑

（淮安市肿瘤医院，江苏223200）

CA125、HE4和ATM蛋白联合检测对卵巢癌的诊断价值

樊 卫，祁金友，韩 笑

（淮安市肿瘤医院，江苏223200）

目的 探讨人癌抗原125（CA125）、人类附睾蛋白4（HE4）和ATM蛋白联合检测对卵巢癌的诊断价值。方法 选取该院2013年6月至2015年1月病理确诊的卵巢癌患者20例（卵巢癌患者组）及健康体检者20例（健康对照组），比较CA125、HE4和ATM蛋白阳性率、灵敏度、特异性和受试者工作特征曲线下面积（AUC）。结果 卵巢癌患者组血清CA125、HE4水平明显高于健康对照组，但卵巢癌患者组CA125检测阳性率[75.00%（15/20）]与HE4检测阳性率[80.0%（16/20）]比较，差异无统计学意义（P=0.356）；卵巢癌患者癌变组织ATM蛋白表达阳性率[60.00%（12/20）]低于癌旁正常卵巢组织[95.0%（19/20）]，差异有统计学意义（χ2=7.025，P=0.020）。3项指标联合检测的AUC为0.925、灵敏度为90.0%。结论 ATM蛋白检测在一定程度上可提高卵巢癌的诊断效能和灵敏度。

CA-125抗原； 卵巢肿瘤； ROC曲线； 人附睾蛋白4； ATM蛋白

根据《2012年中国肿瘤登记年报》报道，女性癌症分布较分散，子宫癌、宫颈癌、卵巢癌等发病率较高。卵巢癌早期症状不明显，不易被患者和医生发现，因此，寻找筛查早期卵巢癌的有效方法意义重大。癌抗原125（cancer antigen 125，CA125）在卵巢癌检测中应用普遍且较早，但其升高在早期卵巢癌患者中仅占50.0%，检测特异性低于12.0%，且CA125在其他恶性肿瘤，甚至非恶性疾病患者中也可见升高，因此，仅以CA125作为初筛指标容易造成漏、误诊。近年来，人类附睾蛋白4（hu man epididymis protein 4，HE4）作为一种新的肿瘤标志物，在卵巢癌组织中特异性高而被普遍应用。ATM蛋白由共济失调毛细血管扩张征突变基因（ataxia-telangiectasia mutated gene，ATM gene）编码，属于一种自动磷酸化蛋白激酶，在DNA损伤修复、细胞周期阻滞和细胞凋亡过程中发挥关键的调控作用[1]。本研究对20例卵巢癌患者和20例健康体检者进行CA125、HE4、ATM蛋白检测，旨在探讨三者联合检测对卵巢癌的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 资料

1.1.1 一般资料 选取本院2013年6月至2015年1月病理确诊的卵巢癌患者20例（卵巢癌患者组），年龄45～65岁，均为绝经患者。另选取同期健康体检者20例（健康对照组），年龄49～75岁，也均为绝经者，且均无肝、肾等重要器官功能异常。标本采集前研究对象均签署临床科研知情同意书，且本研究经过了医院伦理委员会批准。

1.1.2 试剂与仪器 ATM蛋白试剂购于上海生工有限公司，CA125、HE4检测采用ARCHITECT i2000SR仪及其配套试剂。

1.2 方法

1.2.1 标本采集

1.2.1.1 CA125和HE4 采集研究对象清晨空腹静脉血，置于肝素钠或分离胶真空采血管中，室温静置30min，3 000 r/min离心3 min，取上清液。CA125、HE4检测采用化学发光微粒子免疫分析法。

1.2.1.2 ATM蛋白 收集卵巢癌患者手术切除标本，取相应患者术后切除标本的癌旁正常卵巢组织作为正常对照。收集标本前均未给予化疗和（或）放疗。ATM蛋白检测采用经典免疫组织化学SP法。阴性对照用磷酸盐缓冲液代替一抗，其余实验条件、步骤均与样品操作相同；采用上海申工公司提供的已知阳性切片作为阳性对照，严格按照试剂盒说明书操作。

1.2.2 检测结果判定

1.2.2.1 CA125和HE4 CA125＞35 U/mL、HE4＞76 pmol/L为阳性。

1.2.2.2 ATM蛋白 ATM蛋白主要表达于细胞核，部分表达于细胞质，呈棕黄色颗粒，根据着色程度分别记0、1、2、3分。阳性细胞百分数：＜10.0%记0分，10.0%～＜25.0%记1分，25.0%～50.0%记2分，＞50.0%记3分。综合判定取着色强度和阳性细胞百分数分值之积：0分为阴性，记为（-）；1分以上为阳性，其中1～2分记为（1+），3～4分记为（2+），5～9分记为（3+）。临床分期根据国际抗癌联盟TNM分期标准。由本院2名病理科医生在相同条件下对结果进行判定。

1.3 统计学处理 应用SPSS17.0统计软件进行数据分析。计数资料以率或构成比表示，采用χ2检验；计量资料采用中位数及四分位数描述，采用受试者工作特征曲线下面积（area under the cerve，AUC）分析CA125、HE4、ATM蛋白阳性率对卵巢癌的诊断价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组研究对象血清CA125、HE4检测结果比较 卵巢癌患者组血清CA125、HE4水平明显高于健康对照组，见表1。但卵巢癌患者组CA125检测阳性率[75.0%（15/20）]与HE4检测阳性率[80.0%（16/20）]比较，差异无统计学意义（P=0.356）。

表1 两组研究对象血清CA125、HE4检测结果比较[中位数（四分位数）]

2.2 ATM蛋白在卵巢癌患者癌变组织和癌旁正常卵巢组织表达阳性率比较 卵巢癌患者癌变组织ATM蛋白表达阳性率[60.0%（12/20）]低于癌旁正常卵巢组织[95.0%（19/20）]，差异有统计学意义（χ2=7.025，P=0.020）。

2.3 CA125、HE4、ATM蛋白检测的AUC、灵敏度和特异性比较 CA125、HE4检测的AUC分别为0.948、0.983，诊断效率较高；ATM蛋白检测的AUC仅为0.650。单项检测中HE4灵敏度最高（80.0%），ATM蛋白最低（40.0%）；3项指标联合检测的AUC为0.925、灵敏度为90.0%，见表2。

表2 CA125、HE4、ATM蛋白检测的AUC、灵敏度和特异性比较

3 讨 论

ATM蛋白是一种自动磷酸化蛋白，含3 056个氨基酸，分布于细胞核和细胞质中，以细胞核为主，广泛分布于人体组织中[1]。当DNA受损伤ATM被激活，通过磷酸化P53及其下游靶蛋白，参与细胞周期检测点的监管，使细胞周期阻滞于G1/S期、S期和G2/M期3个检测点，从而完成受损DNA的修复[2]。但当ATM发生突变而功能受损时细胞内缺乏正常ATM蛋白，不能对受损DNA进行修复，受损DNA随分裂传入子细胞中，细胞就容易发生癌变。作者已经对ATM蛋白在食管癌组织中的表达进行了研究，结果显示，食管鳞癌患者癌变组织ATM蛋白表达阳性率与癌旁正常组织比较，差异有统计学意义（P＜0.05）[3-4]。本研究结果显示，卵巢癌患者癌变组织ATM蛋白表达阳性率[60.0%（12/20）]低于癌旁正常卵巢组织[95.0%（19/20）]，差异有统计学意义（χ2= 7.025，P=0.02）。ATM蛋白在灵敏度方面虽然不如CA125、HE4，但3项指标联合检测的AUC、灵敏度均较理想，ATM蛋白检测在一定程度上可提高诊断效能和灵敏度。

大量研究发现，许多肿瘤的发生和治疗过程涉及ATM蛋白表达或活性改变，且ATM蛋白表达或活性改变影响肿瘤的治疗及预后[5-7]，提示ATM基因或许能成为肿瘤治疗中一个新的潜在作用靶点[8]。

本研究未对卵巢癌进行病理分期和统计处理，主要是因为标本例数较少。贾晓娟等[9]分期研究结果显示，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌患者CA125检测阳性率分别为0、62.5%、84.6%、100.0%；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌患者HE4检测阳性率分别为0、25.0%、61.5%、100.0%，不同分期卵巢癌患者血清CA125、HE4水平有差异。

本研究结果显示，卵巢癌患者CA125、HE4检测阳性率、AUC、灵敏度和特异性比较，差异均无统计学意义（P＜0.05）。不过黎明鸾等[10]和尚陈宇等[11]研究证实，卵巢癌患者手术前后血清CA125、HE4水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。

[1]Shiloh Y.ATM and related protein kinases：safeguarding genome integrity[J]. Nat Rev Cancer，2003，3（3）：155-168.

[2]Vodicka P，Stetina R，Polakova V，et al.Association of DNA repair polymorphisms with DNA repair functional outcomes inhealthy human subjects[J].Carcinogenesis，2007，28（3）：657-664.

[3]樊卫，韩笑，祁金友.ATM蛋白在早期食管鳞癌组织中的表达及意义[J].国际检验医学杂志，2014，35（18）：2430-2431.

[4]韩笑，樊卫.ATM蛋白在淋巴结阴性的进展型食管癌中的表达及临床意义[J].现代肿瘤医学，2014，22（12）：2873-2874.

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[8]刘小群，乔田奎.ATM与肿瘤的关系研究进展[J].中国癌症杂志，2011，21（12）：973-977.

[9]贾晓娟，韩军，文倩，等.血清CA125和HE4在不同分期的卵巢癌中的表达[J].中国卫生检验杂志，2012，22（12）：2931-2932.

[10]黎明鸾，陈蔚，林叶飞，等.CA125及HE4蛋白在卵巢癌组织及血清中的表达及其临床意义[J].中国妇幼保健，2013，28（24）：4023-4026.

[11]尚陈宇，刘冬冬，徐建华，等.HE4和CA125联合检测在卵巢癌诊断及预后评估中的价值研究[J].中国妇幼保健，2014，29（33）：5492-5494.

Diagnostic value of serum CA125，HE4 and ATM protein joint detection in ovarian cancer

Fan Wei，Qi Jinyou，Han Xiao
（Department of Clinical Laboratory，Huai′an Municipal Tumor Hospital，Huai′an，Jiangsu 223200，China）

ObjectiveTo investigate the diagnostic value of the joint detection of serum human carcinoma antigen 125（CA125），epididymis protein 4（HE4）and ATMprotein in ovarian cancer.MethodsA total of 20 patients with pathologically diagnosed ovarian cancer in our hospital from June 2013 to January 2015 were selected as the ovarian cancer group and 20 women undergoing the physical examination were selected as the control group.The levels of CA125，HE4 and ATM in the 2 groups were detected and their positive rate，sensitivity，specificity and the area under the curve（AUC）were compared between the two groups.ResultsThe levels of serum HE4 and CA125 in the ovarian cancer group were significantly higher than those in the control group，but the positive rate of CA125 detection and HE4 detection had no statistical difference[75.00%（15/20）vs.80.00%（16/20），P=0.356]；the ATM protein expression positive rate of cancerous tissues in the ovarian cancer group was 60.00%（12/20），which was lower than 95.00%（19/20）of paracancerous normal tissues，the difference was statistically significant（χ2=7.025，P=0.020）. AUC of 3-indicator combined detection was 0.925 and the sensitivity was 90.0%.ConclusionThe ATM protein detection can improve the diagnostic efficiency and sensitivity of ovarian cancer in a certain extent.

CA-125 antigen； Ovarian neoplasms； ROC curve； Human epididymis protein 4； ATM protein

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.24.011

A

1009-5519（2015）24-3717-02

2015-10-09）

樊卫（1983-），女，湖南长沙人，硕士研究生，主管检验师，主要从事肿瘤分子生物学的研究；E-mail：fch141@163.com。