苦参素注射液有关物质检查方法建立

2015-07-17邢晶晶

科学中国人 2015年12期

关键词：本品杂质供试

邢晶晶

哈药集团生物工程有限公司

苦参素注射液有关物质检查方法建立

邢晶晶

哈药集团生物工程有限公司

目的：通过对有关物质检查方法比较，建立本品有关物质检查方法。方法：采用高效液相色谱，色谱柱选用氨基色谱柱,以0.1mol/L磷酸二氢钠-甲醇-乙腈-高氯酸钠(900∶30∶40∶30)为流动相,流速1.0ml/min,220nm为本品的检测波长，氧化槐果碱与苦参素分离度符合规定，氧化槐果碱线性为3.0～18.0ug/ml,专属性试验表明供试品与降解产物可有效分离，峰纯度符合规定，物料平衡，苦参素检测限为3.1ng，氧化槐果碱检测限为1.9ng，溶液稳定性试验结果表明供试品溶液在8小时内稳定。结论：所建立含量测定方法可行，可用于测定本品有关物质。

苦参素；有关物质；氧化苦参碱

苦参素胶囊主要成分为氧化苦参碱，是从中药苦豆子中提取的一种生物碱，具有直接抗乙型肝炎病毒作用，对肝细胞异常凋亡有抑制作用，治疗慢性肝炎取得了良好疗效。其原料药苦参素为氧化苦参碱和极少量氧化槐果碱的混合物。目前检查苦参素有关物质方法较多，本文通过对相关检查方法进行比较[1-2]，筛选出适合本品有关物质检查方法。

1.试验材料

苦参素原料、氧化槐果碱对照品（批号：111652-200301，来源：中国药品生物制品检定研究院）、苦参素注射液为自制样品，色谱柱为，迪马Diamonsil柱(4.6*250mm，5um)；检测波长为210 nm；，Agilent 1260型高效液相色谱仪（DAD检测器）。

2.方法与结果

2.1 色谱条件

参照上述相关文献，检查苦参素有关物质的检查的色谱条件主要有相为磷酸盐缓冲液-甲醇(85：15)，乙腈：无水乙醇：磷酸水溶液（pH值2.0）（80：8：12），甲醇：0.2%庚烷磺酸钠及0.1%冰醋酸水溶液：四氢呋喃（30：70：0.6），0.1mol/L磷酸二氢钠-乙腈-甲醇-高氯酸钠(910∶50∶10∶30)为流动相，通过对上述流动上筛选，确定本品的色谱条件为色谱柱选用氨基色谱柱,以0.1mol/L磷酸二氢钠-甲醇-乙腈-高氯酸钠(900∶30∶40∶30)为流动相,流速1.0ml/min,检测波长为220nm。

2.2 杂质分离情况考察

取苦参素粗品，加流动性制成含苦参素粗品1.0mg/ml的溶液，按照上述色谱条件进样，结果各杂质峰与主峰有效分离，主峰峰纯度符合规定，苦参素粗品单一杂质小于0.5%，另取苦参素注射液处方中辅料、氧化槐果碱杂质对照，按照所确定色谱条件进样，结果辅料不干扰有关物质测定，氧化槐果碱与主峰有效分离，对主峰峰纯度进行监测，结果峰纯度符合规定。

2.3 样品溶液制备

精密量取取苦参素供试品，用流动相制成浓度为1.0mg/ml的溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1.0ml于100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照品溶液。

2.4 相对相应因子测定

苦参素中主要杂质为氧化槐果碱，该杂质为生产过程中带入杂质，也为制剂主要降解产物。为有效并方便控制该杂质量，对该杂质与苦参素相对响应因子进行研究。取苦参素对照品及氧化槐果碱各适量，制成系列浓度溶液，根据标准曲线斜率之比，计算二者相对响应因子，氧化槐果碱与苦参素的相对相应因子0.92，可按照相对对照品色谱峰计算该杂质含量。

2.5 方法验证

通过二极管阵列检测器监测有关物质检出情况，结果220nm为最佳检测波长。

检测限：取苦参素对照品，制成系列浓度溶液，进样，当信噪比为4.5：1时，苦参素检测限为3.1ng，说明供试品溶液浓度可行，可有效检出相关杂质。另取氧化槐果碱对照品，测定氧化槐果碱的检测限为1.9ng。另取苦参素及氧化槐果碱对照品，制成线性溶液浓度，进样，结果苦参素溶液在5ug～1.5mg/ml浓度范围内线性关系良好，氧化槐果碱溶液在3.0～18.0ug/ml的浓度范围内线性关系良好。

溶液稳定性试验：取供苦参素试品溶液及对照溶液，分别于0、1、2、4、6、8小时进样，评价供试品溶液及对照品溶液的稳定性，供试品溶液在8小时无新杂质峰产生，各杂质峰无明显变化，对照品溶液峰面积无变化，说明溶液在8小时内稳定。

耐用性试验：改变本品检测波长（±5nm）、更换相同品牌不同批号的色谱柱、改变流速（0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min）及流动相比例（±5%），考察杂质检出情况，结果在各色谱条件下有微小变化时，杂质检出基本一致，说明方法的耐用性好。

专属性：取苦参素注射液样品，对样品进行酸、碱、氧化、高温及强光破坏试验，使用DAD检测器，全波长监测，考察各种破坏条件下杂质检出情况。结果220nm为本品最佳检测波长，确定供试品检测波长为220nm，供试品在各条件下降解产物约为10%，杂质与主峰可有效分离，峰纯度符合规定，各破坏条件下物料平衡（95%～105%）。在主峰3倍保留时间之后未见杂质峰，确定本品相对保留时间为主峰的3倍。

2.6.样品检查

取苦参素注射液供试品，按照确定方法进行有关物质检查，供试品杂质检出基本一致，单一杂质约为0.3%，总杂质约为0.9%，杂质与主峰分离度良好。