急性脑梗死患者血浆Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF的变化及意义

张琦，牛文彦，李晓亮，苏桂新，孙续国

(1天津医科大学，天津300070；2天津中医药大学第一附属医院)

急性脑梗死患者血浆Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF的变化及意义

张琦1,2，牛文彦1，李晓亮1，苏桂新1，孙续国1

(1天津医科大学，天津300070；2天津中医药大学第一附属医院)

目的 探讨血浆生物标志物检查诊断急性脑梗死患者的特异性和敏感度，以辅助临床诊断和病情随访。方法 分别测定150例急性脑梗死患者(观察组)和50例健康查体者(对照组)的血浆同型半胱氨酸(Hcy)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、可溶性血栓调节蛋白(sTM)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及血管性假血友病因子(vWF)水平。结果 观察组血浆Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF水平均显著高于对照组(P均<0.05)。根据ROC曲线得出当Hcy临界值为9.11 μmol/L时诊断急性脑梗死的敏感性为95.2%、特异性为76%，eNOS临界值为437.30 μmol/L时诊断的敏感性为79%、特异性为96%，sTM临界值为7.43 μmol/L时诊断的敏感性为75.2%、特异性为96%，hs-CRP临界值为3.38 mg/L时诊断的敏感性为81.9%、特异性为90%，vWF临界值为194.85 ng/mL时诊断的敏感性为75.2%、特异性为80%。结论 血浆Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF水平可作为急性脑梗死诊断的辅助指标。

脑梗死，急性；同型半胱氨酸；一氧化氮合酶；C反应蛋白质；血栓调节蛋白；血管性假血友病因子

研究显示，血浆同型半胱氨酸(Hcy)浓度升高是心脑血管疾病的独立危险因素[2]，高水平Hcy可激活炎症细胞表达炎症因子促进血栓形成，导致脑梗死的发生[3，4]；内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性可反映血浆NO水平，可间接作为内皮细胞损伤程度评价指标，提示血栓形成或辅助诊断心脑血管梗死[5]；血栓调节蛋白(TM)是血管内皮细胞合成并位于细胞表面的凝血酶受体，血浆可溶性TM(sTM)可作为反映血管内皮损伤的敏感指标[6]；血清超敏C反应蛋白(CRP)是急性炎症标志物，与动脉粥样硬化发生和演变相关[7]；血管性假血友病因子(vWF)是血管内皮细胞下层黏附的糖蛋白，内皮细胞损伤后释放vWF，参与血小板黏附和聚集过程，是反映血管内皮功能异常的特异性标志物。上述生物标志物对系统分析急性脑梗死具有重要临床意义。本研究通过检测急性脑梗死患者血浆Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP及vWF水平，绘制ROC曲线分析上述指标用于诊断急性脑梗死的特异性和敏感性，为临床诊断及随访病情提供依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2013年4月～2014年4月天津中医药大学第一附属医院收治的急性脑梗死患者150例(观察组)，男71例、女79例，年龄48～82(67.39±8.25)岁。均符合1995年中华医学会第四次全国脑血管病学术会议修订的《各类脑血管疾病诊断要点》[8]，并经头颅CT和(或)MRI检查确诊。患者于发病72 h内入院，神经功能缺损程度评分16～30分。另择健康查体者50例作为对照组，男25例、女25例，年龄45～76(63.21±11.45)岁。两组性别、年龄具有可比性。

1.2 检测方法 采集受试者静脉血2 mL，枸橼酸钠抗凝，离心分离血浆。Hcy测定采用循环酶法，使用日本HITACHI7180全自动生化分析仪检测，试剂由台塑公司提供。sTM和eNOS测定采用酶联免疫双抗体夹心(ELISA)法，使用芬兰雷勃公司Multiskan MK3酶标仪、Wellwash4 MK2洗板机检测，试剂由深圳晶美生物工程有限公司提供。hs-CRP测定采用免疫比浊法，使用美国贝克曼库尔特公司的IMMAGE 800双光径免疫浊度分析仪检测，试剂由美国贝克曼公司提供。vWF检测采用酶标法，使用法国STAGO公司STA-compact全自动血凝仪检测，试剂由STAGO公司提供。

2 结果

2.1 两组血浆生物标志物水平比较 见表1。

表1 两组血浆生物标志物水平比较±s)

注：与对照组比较，*P<0.05。

2.2 ROC曲线分析 将两组血浆Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP、vWF水平录入SPSS软件，进行正态分布检验后，以指标的敏感度为纵轴、1-特异度为横轴绘制ROC曲线，见图1。血浆Hcy、eNDS、GTM、hs-CRP、vWF的ROC曲线下面积分别为0.938、0.873、0.879、0.922、0.786。其中Hcy与hs-CRP的曲线下面积大于0.9，与0.5相比差异有统计学意义,提示用于诊断急性脑梗死的准确性较高。sTM、eNOS和vWF的曲线下面积分别为0.879、0.873和0.786，在0.7到0.9之间，提示用于诊断急性脑梗死的准确性中等。

图1 血浆Hcy、eNOS、s-TM、hs-CRP、vWF 诊断急性脑梗死的ROC曲线

2.3 各血浆生物标志物评价指标分析 见表2。

表2 各血浆生物标志物的评价指标分析

3 讨论

血管内皮损伤标志物在急性脑梗死早期诊断中具有重要意义。本研究显示，急性脑梗死患者血浆Hcy、eNOS、sTM、hs-CRP及vWF水平明显高于健康对照者，提示这五个标志物可用于辅助检查急性脑梗死。进一步绘制这五项生物标志物的ROC曲线，结果显示，Hcy的ROC曲线最接近于理想诊断指标曲线，其ROC曲线下面积为0.938。据报道，血浆Hcy水平每增加5 μmol/L，血管疾病发生的危险增加50%，是脑卒中的独立危险因素[9]。目前缺少确定临界值，本实验临界值为9.11 μmol/L时，灵敏度为95.2%、特异度为76%。hs-CRP的ROC曲线下面积为0.922，大于0.9，认为其诊断的准确性较高。最近报道，hs-CRP能够更早期、灵敏地反映炎症水平，可用于临床辅助检查急性脑梗死。本研究显示，急性脑梗死患者血浆eNOS水平显著高于健康对照组，在临界值为437.30 μmol/L时其灵敏度为79%、特异度为96%。ROC曲线下面积为0.873，在0.7到0.9之间，认为其准确性中等，临床上尚未有报道eNOS诊断急性脑梗死检测参考范围，本文提出高于437.30μmol/L为诊断临界值。vWF在急性脑梗死发病早期参与脑梗死的病理生理过程，可反映血管内皮损伤程度，有早期诊断及判断预后的潜能[10]。急性脑梗死患者vWF水平显著高于健康对照组，在临界值为194.85 ng/mL时其灵敏度为75.2%、特异度为80%，阳性似然比88.8%，阴性似然比为60.6%，ROC曲线下面积为0.786，认为其诊断的准确性中等。血浆sTM水平能够反映血管内皮细胞损伤，可用于早期辅助检查急性脑梗死[11]。本研究中急性脑梗死患者血浆sTM水平显著高于健康对照组，在临界值7.43 μmol/L时灵敏度为75.2%、特异度为96%。ROC曲线下面积为0.879，在0.7到0.9之间，其准确性中等，目前临床上尚未确定sTM辅助诊断急性脑梗死参考范围，本研究提出高于7.43 μmol/L为检查临界值。

综上所述，五项生物标志物中Hcy作为急性脑梗死的辅助检查指标准确性最高，hs-CRP准确性仅次于Hcy，eNOS、s-TM及vWF辅助检查准确性中等。

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ROC curve analysis of plasma biomarkers as Hcy, eNOS, sTM, hs-CRP and vWF for patients with acute cerebral infarction

ZHANGQi1,NIUWen-yan,LIXiao-liang,SUGui-xin,SUNXu-guo

(1TianjinMedicalUniversity,Tianjin300070,China)

Objective To explore the specificity and sensitivity of plasma biomarkers in patients with acute cerebral infarction for clinical auxiliary diagnosis and a follow-up. Methods A total of 150 cases of acute cerebral infarction patients (observed group), 50 cases of healthy controls (control group) were included. Circular enzymatic and ELISA method and immune turbidimetric method were respectively used o determine the plasma homocysteine (Hcy), endothelial nitric oxide synthase (eNOS), soluble thrombus regulatory proteins (sTM), hypersensitive c-reactive protein (hs-CRP) and von willebrand factor (vWF) level. Results The plasma levels of those biomarkers as Hcy, eNOS. sTM, hs-CRP and vWF were significantly higher in observed group than those in healthy control group(P<0.05). Aarea under the ROC curve were respectively 0.938, 0.873, 0.879, 0.922 and 0.786. According to the ROC curve, when the Hcy critical value was 9.11 μmol/L, the diagnostic sensitivity was 95.2%, the specificity was 76%. When the eNOS critical value was 437.30 μmol/L, the diagnostic sensitivity was 79%, the specificity was 96%.When the sTM critical value was 7.43 μmol/L, the diagnostic sensitivity was 75.2%, the specificity was 96%. When the hs-CRP threshold was 3.38 mg/L, the diagnostic sensitivity was 81.9%, the specificity was 90%; when the vWF critical value was 194.85 ng/mL, the diagnostic sensitivity was 75.2%, the specificity was 80%. Conclusion The levels of Hcy, eNOS, sTM, hs-CRP and vWF in plasma may be auxiliary biomarkers for the diagnosis of acute cerebral infarction.

cerebral infarction, acute; Hcy; NOS; CRP; TM; vWF

张琦(1985-)，女，技师，研究方向为临床医学检验。E-mail：102.8@163.com

牛文彦(1965-)，女，教授，研究方向为临床医学检验及免疫学。现主持4项国家自然基金，1项教育部博士点专项基金，3项科委重点项目。E-mail：wniu@tijmu.edu.cn

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.01.006

R743.33

A

1002-266X(2015)01-0017-03

2014-07-30)