3种分光光度法对天然抗氧化物质抗自由基性能的分析检测

高兰玲

摘 要：该文在分析检测天然抗氧化物质抗自由基的性能，借助于3种分光光度法来比较研究。在3种分光度法对自由基进行分析检测，包括对抗氧化剂的抗自由基性能进行检测的方法上，可适应相关研究工作或者常规实验室检测自由基的需要。

关键词：分光光度法 天然抗氧化物质 抗自由基性能

中图分类号：0657 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2015）04（c）-0247-01

1 DPPH自由基捕获分光光度法分析

1.1 实验部分

（1）仪器及试剂。选取型号752的分光光度计，DPPH溶液的浓度为0.1777nmol/L。混合磷酸盐缓冲溶液pH值为6.88。抗氧化剂样品溶液的浓度是10.5g/L。没食子酸丙酯和葡萄籽提取物，天然抗氧化剂，最后是分离制备的灯盏花素。（2）实验方法。选取pH6.88混合磷酸盐缓冲溶液添加10mL比色管，再加入DPPH溶液4mL，混合均匀后并适当添加抗氧化剂溶液，用蒸馏水来补充体积，10min之后于520nm区域对吸光度进行测算。在抗氧化剂清除DPPH自由基的比率上，按照K/（%）=[1—（Ai—Aj）/Ac] ×100来计算。

1.2 结果与讨论

在实验中，选取不同体积的抗氧化剂进行添加，通过测定Ai、Aj、Ac的值，从而得到Ai—Aj的数值，并计算出K，也即自由基清除率，如图1所示。

在图1中，1、2、3分别表示没食子丙酸脂、葡萄籽提取物、灯盏花素。所以就以上物质捕获DPPH自由基的能力，一般和抗氧化剂使用量形成量效关系，而且增加抗氧化剂使用量的话，就会捕获到更多的自由基。

2 亚硝基R盐-Co3+褪色法分析

2.1 实验部分

（1）仪器及试剂。选用型号为752的分光光度计，亚硝酸R盐溶液浓度为0.00156mol/L。CoSO4溶液浓度为0.00050mol/L。H2O2的体积分数为1.8%。pH值为7.4的KH2PO4缓冲液，pH值为9.2的Na2CO3溶液。（2）实验方法。依次把pH9.2缓冲液2mL，CoSO4溶液1mL，亚硝酸R盐1mL，H2O2溶液1mL加入到10mL的比色管中，并用蒸餾水稀释。放置在37℃水浴内，保持45min恒温。在494nm区域对吸光度Ab进行测量，同时对没有添加的H2O2吸光度Ao进行测量。其中用△A=Ao—Ab来表示自由基产生量。

2.2 结果与讨论

该实验说明，不断增加反应时间后，△A的增长速度反而下降，而褪色速度则更快地进行下降。在反应到达40min之后，体系没有再发生变化。在分析抗羟自由基氧化性能上，选取了三种抗氧物质样品，具体结果如图2所示。1、2、3分别表示没食子丙酸脂、葡萄籽提取物和灯盏花素。表明当对抗氧剂浓度再次增加时，表观抗羟自由基几乎不会增加氧化率。同时抗羟自由基的氧化能力，从高到低分别是没食子酸丙酯、葡萄籽提取物、灯盏花素。

3 连苯三酚红褪色光度法分析

3.1 实验部分

（1）仪器及试剂。选用型号为752的分光光度计。H2O2的体积分数为1.8%。连苯三酚红溶液的浓度为0.0001mol/L。EDTA-Fe2+溶液的浓度为0.0038mol/L。Na2CO3缓冲液的浓度为0.1mol/L，pH值为9.1。（2）实验方法。依次把pH9.2的Na2CO3缓冲溶液2ml，EDTA-Fe2+溶液0.7mL，连苯三酚红溶液3.5mL，体积分数为0.6的H2O2液体0.7mL加入到10mL的比色管中，并且利用蒸馏水来稀释到刻度位置。在对吸光度AS的测定上，抗羟自由基氧化率S=（As—Ab）/（Ao—Ab）×100。

3.2 结果与讨论

该实验说明，体系褪色速度随着反应温度的提高而增加。根据实验方法，选取3种抗氧化物，并进行抗羟自由基氧化性能上的研究。在各个抗氧化试剂不同使用量的情况下，羟自由基氧化剂抑制率。

综上所述，相对于灯盏花素提取物，没食子酸丙酯以及葡萄籽提取物具有更优的抗氧化性。不仅可以清除40%～80%左右的自由基，而且抗氧化能力和清除氧自由基的作用相对理想。

参考文献

[1] 孙存普.由基生自物学导论[M].合肥：中国科学技术大学出版社，2010.

[2] 裘祖文.电子共旋共振波谱[M].北京：科学出版社，2010.