不同产地大黄对高脂血症大鼠血脂及抗氧化作用的影响*

王志旺， 郭 玫， 马 丹， 王瑞琼

(甘肃中医学院， 兰州 730000)



不同产地大黄对高脂血症大鼠血脂及抗氧化作用的影响*

王志旺△， 郭 玫△， 马 丹， 王瑞琼

(甘肃中医学院， 兰州 730000)

目的：对比研究不同产地栽培大黄对高脂血症大鼠血脂及抗氧化作用的影响。方法：72只雄性Wistar大鼠随机分9组(n=8)，除正常对照组外，其余大鼠给予高脂饲料的同时灌胃大黄(3.0 g/kg、1.0 g/kg)，每天1次，连续28 d，对比观测不同产地大黄对高脂血症大鼠血脂、血液流变学及抗氧化指标变化。结果：1.0～3.0 g/kg剂量范围内的甘南栽培唐古特大黄、西宁栽培唐古特大黄及礼县栽培掌叶大黄可降低血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)与低密度脂蛋白(LDL)，提高高密度脂蛋白(HDL)水平，改善血脂代谢，降低血液粘稠度，提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性，降低丙二醛(MDA)含量，其中对LDL、MDA及血液粘稠度的作用有明显的量效关系(P<0.05,P<0.01)。同时唐古特大黄对LDL、MDA及血液粘稠度(低切、中切)的改善作用明显优于掌叶大黄(P<0.05)，而甘南栽培唐古特大黄与西宁栽培唐古特大黄的上述作用未见明显差异。结论：唐古特大黄降血脂作用的部分指标优于掌叶大黄，而甘南栽培唐古特大黄与西宁栽培唐古特大黄的降血脂作用无明显差异。

不同产地大黄；降血脂；血液粘度；抗氧化；大鼠

唐古特大黄(Rheum. tanguticum Maxim. ex Balf., RT)为2010版《中国药典》收载的三种供药用大黄品种之一[1]，主要产于青海南部、甘肃南部与西藏偏东部[2, 3]。近年来，RT的需求量稳步增加，但RT产道地区的生产基地建设发展滞后，RT的来源仍以野生为主[4, 5]。为了发挥我国RT药材资源的优势，地处地道产区的甘南州建设了一批RT生产基地。本研究组在大黄“逐瘀、利湿等”功效的指导下，对比考察甘南栽培RT、西宁栽培RT及礼县栽培掌叶大黄(Rheum plmatum planted in Lixian, RP-LX)对高脂血症动物模型血脂、血液流变学及抗氧化系统的影响，为甘南栽培RT的应用与出口提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 药物与试剂

甘南栽培唐古特大黄(Rheum tanguticum planted in Gannan, GN-RT)、西宁栽培唐古特大黄(Rheum tanguticum planted in Xinin, XN-RT)与礼县栽培掌叶大黄(Rheum plmatum planted in Lixian, LX-RPL)，人工栽培至第4年10月份采挖，整形后纵切成厚片，阴干；吉非罗齐(Gemfibrozil)，批准文号：国药准字H43020296，康普药业股份有限公司生产，产品批号：130701。丙硫氧嘧啶片，批准文号：国药准字H31021082，上海朝晖药业有限公司，产品批号：1401F11；总胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)与丙二醛(malonaldehyde, MDA)试剂盒，南京建成生物工程研究所生产，生产批号：20140301、20140205、20140325、201404024、20140403、20140302、20140311。

1.2 动物

SPF级Wistar大鼠，体重(150±10)g，雄性，由甘肃中医学院实验动物中心提供，实验动物质量合格证号SCXK(甘)2011-0001。SPF级实验室，许可证号为SYXK(甘)2011-0001。

1.3 仪器

高速冷冻离心机(TGL-16G)，上海安亭科学仪器厂生产；分光光度计(722型)，上海第三分析仪器厂生产；sartorius电子天平(BS1103)，北京赛多里斯有限公司；恒温水浴锅(HH-S型)，金坛市正基仪器有限公司生产。

1.4 受试药的制备

取甘南栽培唐古特大黄(GN-RT)、西宁栽培唐古特大黄(XN-RT)与礼县栽培掌叶大黄(LX-RPL)适量，用黄酒(每100 kg大黄用黄酒30 kg)拌匀，密封浸泡2 h至酒被吸尽，置笼屉内，隔水蒸24 h，取出，干燥，粉碎即得熟大黄粗粉[6, 7]。称取熟大黄粗粉适量，用蒸馏水煎煮两次(分别加水10倍与8倍量、煎煮60 min与40 min)，过滤，滤液适当浓缩至生药浓度为0.3 g/ml，冷藏备用。

1.5 高脂饲料的配制

参考相关文献[8-10]，按比例取胆固醇2%、胆酸钠0.5%、蛋黄粉5%、蔗糖5%、丙硫氧嘧啶0.5%混合；取77%基饲饲料粉碎，将上述两种混合物充分混匀。按比例取猪油10%，熔化后加入上述混合物，混均、成形、干燥即得高脂饲料。

1.6 分组、造模及给药

取雄性大鼠72只，按体重分层随机分为9组(n=8)，正常对照组给普通饲料；其余8组给予高脂饲料饲养；同时各组分别灌胃[11, 12]GN-RT(3.0 g/kg、1.0 g/kg)、XN-RT(3.0 g/kg、1.0 g/kg)、LX-RPL(3.0 g/kg、1.0 g/kg)、吉非罗齐(0.1 g/kg)，正常对照组和模型对照组蒸馏水10 ml/kg灌胃，每天1次，连续28 d。

1.7 指标观测

末次给药24 h、禁食不禁水12 h后，2%戊巴比妥钠ip麻醉，股静脉取血，部分血液肝素抗凝，测定粘度，其余血液自然凝固后离心(3 000 r/min×10 min)，取血清按试剂盒说明书测定血脂(TC、TG、LD与HDL)与氧化产物(MDA)及过氧化酶(SOD与GSH-Px)的含量。

1.8 统计学方法

2 结果

2.1 不同产地大黄对高脂血症大鼠血脂影响的比较

大鼠食用高脂饲料(含0.5%丙硫氧嘧啶)28 d后，TC、TG与LDL升高，HDL降低，模型对照组与正常对照组比较有统计学意义(P<0.05,P<0.01)；经1.0～3.0 g/kg大黄干预后，上述异常变化得到不同程度的改善，即TC、TG与LDL降低，HDL升高，与模型对照组好比较有统计学意义(P<0.05,P<0.01)；对LDL的降低作用有一定的量效关系(P<0.05)。同时，实验结果显示，3.0 g/kg的唐古特大黄对LDL的降低作用明显优于掌叶大黄(P<0.05)，而甘南栽培唐古特大黄与西宁栽培唐古特大黄对血脂的影响未见明显差异(表1)。

2.2 不同产地大黄对高脂血症大鼠血液流变学影响的对比

食用高脂饲料28 d后，大鼠血液粘度明显增加，与正常对照组比较有统计学意义(P<0.01)；在进食高脂饲料的同时灌胃大黄干预后，血液粘度普遍下降，与模型对照组比较有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。同时实验数据显示，在1.0～3.0 g/kg剂量范围内，三种大黄的降血脂作用有明显的量效关系(P<0.05)；对低切与中切下的血液粘度，唐古特大黄的降低作用明显优于掌叶大黄(P<0.05，表2)。

2.3 不同产地大黄对高脂血症大鼠血清抗氧化作用影响的对比

高脂饲料饲养的大鼠血清抗氧化酶的活性降低，MDA的含量上升，模型对照组与正常对照组比较有统计学意义(P<0.01)；服用大黄治疗后，上述变化得到明显缓解，即血清SOD与GSH-Px的活性升高，MDA的含量下降，与模型对照组比较有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。在降低MDA方面，相同来源的大黄在1.0～3.0 g/kg剂量范围内呈现一定的量效关系，而唐古特大黄的作用明显优于相同剂量的掌叶大黄(P<0.05，表3)。

Tab. 1 Comparative study of Rhubarbs from different regions on blood lipids in hyperlipidemia rats ±s, n=8)

RT-GN: Rhenum tanguticum planted in Gannan; RT-XN: Rheum tanguticum planted in Xinin; RP-LX: Rheum plmatum planted in Lixian; TC: Total cholesterol; TG: Triglyceride; LDL: Low density lipoprotein; HDL-C: High density lipoprotein

*P<0.05,**P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group;△P<0.05vslow dose group of the same origin;▲P<0.05vsthe same dose of the RP group

GroupDose(g/kg)Bloodviscosity(mPa·s)Lowshear(1/10)Middleshear(1/60)Highshear(1/150)Control⁃7．34±0．834．52±0．613．87±0．30Model⁃10．02±1．16∗∗5．68±0．58∗∗4．58±0．44∗∗Gemfibrozil0．16．94±0．99##4．12±0．52##3．84±0．37##RP⁃LXLow1．08．55±1．05#5．10±0．534．11±0．40#RP⁃LXHigh3．07．50±0．89##△4．32±0．48##△3．76±0．37##RT⁃GNLow1．07．56±0．90##4．31±0．44##▲3．99±0．41#RT⁃GNHigh3．06．53±0．89##△▲3．84±0．33##△3．49±0．30##△RT⁃XNLow1．07．60±0．85##4．35±0．42##▲4．04±0．43#RT⁃XNHigh3．06．62±0．72##△▲3．86±0．39##△3．45±0．38##△

RT-GN: Rhenum tanguticum planted in Gannan; RT-XN: Rheum tanguticum planted in Xinin; RP-LX: Rheum plmatum planted in Lixian

**P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group;△P<0.05vslow dose group of the same origin;▲P<0.05vsthe same dose of the RP-LX group

3 讨论

唐古特大黄作为大黄的品种之一，国内使用与出口国外的需求量很大。为了规范化生产，大黄原产地的各省区相继建立了一批大黄生产基地，如四川的南川、甘肃的礼县与宕县等地[13, 14]，但从现有的基地布局来看，公认的优质唐古特大黄的产区-青海南部、甘肃南部与西藏偏东部一带的生产基地发展缓慢，商品生产仍是以野生来源为主。为保证我国唐古特大黄药材资源的优势，加快优质大黄产区的基地建设，甘南州建设了一批唐古特大黄生产基地。为了考察GMP种植基地所产唐古特大黄的品质，本研究组就甘南所产唐古特大黄与西宁所产唐古特大黄、甘肃礼县所产掌叶大黄的主要药理作用展开研究。

GroupDose(g/kg)SOD(U/ml)GSH⁃Px(U/ml)MDA(nmol/ml)Control⁃155．66±19．87424．30±40．214．23±0．73Model⁃125．50±14．88∗∗353．80±22．78∗∗9．05±1．31∗∗Gemfibrozil0．1165．47±22．04##401．35±30．44##4．27±0．94##RP⁃LXLow1．0132．18±13．93365．18±19．717．33±1．08#RP⁃LXHigh3．0152．24±16．42##384．14±21．70#5．94±1．06##△RT⁃GNLow1．0144．31±16．75#373．21±21．906．11±1．04##▲RT⁃GNHigh3．0160．04±19．01##396．66±24．47##4．54±0．99##△△▲RT⁃XNLow1．0145．33±19．32#374．18±24．686．18±1．01##▲RT⁃XNHigh3．0162．97±19．76##397．04±24．51##4．59±0．96##△△▲

RT-GN: Rhenum tanguticum planted in Gannan; RT-XN: Rheum tanguticum planted in Xinin; RP-LX: Rheum plmatum planted in Lixian; SOD: Superoxide dismutase; GSH-Px: Glutathione peroxidase; MDA: Malonaldehyde

**P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group;△P<0.05vslow dose group of the same origin;▲P<0.05vsthe same dose of the RP-LX group

本次研究在大黄“逐瘀凉血、利湿退黄、主治血热吐衄、瘀血经闭、产后瘀阻、跌打损伤及湿热痢疾等症”的中医药理论指导下，通过饲以含丙硫氧嘧啶的高脂饲料来复制高脂血症动物模型，对比观测不同产地大黄的降血脂、改善血液流变学及抗氧化作用。实验结果显示，甘南栽培唐古特大黄、西宁栽培唐古特大黄及礼县栽培掌叶大黄可改善血脂代谢、降低血液粘稠度、提高抗氧化酶活性且在1.0～3.0 g/kg范围内有一定的量效关系。在降血脂与降低血液粘稠度等方面，唐古特大黄的作用明显优于掌叶大黄，而甘南栽培唐古特大黄与西宁栽培唐古特大黄的上述作用未见明显差异。

综上所述，甘南栽培唐古特大黄有明显的降血脂、改善血液流变学及抗氧化作用，其上述作用与西宁栽培唐古特大黄无明显差异；而唐古特大黄的部分降血脂指标优于礼县栽培掌叶大黄。

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(2010版一部)[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2010: 22.

[2] 焦东海. 大黄研究[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 2000: 115.

[3] 薛国菊, 何 兰, 潘 宣. 中药大黄的资源与开发利用研究[J]. 中国野生植物资源, 1995, 14(2): 1-5.

[4] 王 岩, 宋良科, 王小宁, 等. 大黄种质考证与资源分布[J]. 中国药房, 2013, 24(11): 1043-1046.

[5] 沈世林, 李志刚, 张俊英. 甘肃大黄属(RHEUM)药用植物资源分布和开发利用研究[J]. 甘肃科学学报, 1996, 8(4): 20-26.

[6] 龚千峰. 中药炮制学[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2012: 201.

[7] 罗仁书. 大黄不同炮制方法对其有效成分及临床疗效的影响[J]. 临床合理用药, 2013, 6(5): 108-109.

[8] 黄国钧. 医药实验动物模型—制作与应用[M]. 北京: 化学工业出版社, 2008: 514.

[9] 胡昌江, 马 烈, 何学梅, 等. 九制大黄蒽醌衍生物对动物高血脂及血液流变学的影响[J]. 中成药, 2001, 23(1): 31-33.

[10]郭福川, 李 颖, 孙长颢, 等. 高脂饲料诱导对大鼠血脂的影响[J]. 卫生研究, 2011, 40(1): 40-42.

[11]凌一揆. 中药学[M]. 上海: 上海科学科技出版社, 1984: 70.

[12]王 梅, 陈俊荣, 宋翠荣, 等. 酒大黄的镇痛抗炎作用[J]. 中国实验方剂学杂志, 2013, 19(5): 225-227.

[13]索风梅, 宋经元, 陈士林, 等. AFLP分析唐古特大黄、掌叶大黄和药用大黄的亲缘关系研究[J]. 中草药, 2010, 41(2): 292-296.

[14]黄 蕾. 影响大黄疗效的多种因素探讨[J]. 成都军医, 2001, 3(3): 35-36.

Effects of Rhubarbs from different regions on blood lipid and antioxidation of hyperlipidemia rats

WANG Zhi-wang△, GUO Mei△, MA Dan, WANG Rui-qiong

(Gansu College of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China)

Objective: To comparatively study the effects of Rhubarbs from different regions on blood lipid and antioxi dation of hyperlipidemia rats. Methods: Male rats were randomly divided into 9 groups (n=8) and fed with high-fat diet to replicate the hyperlipidemia model. Meanwhile, Rheum tanguticum was administrated intragastrically at two doses (3.0 g/kg and 1.0 g/kg), once a day for continuous 28 days. The effects of Rheum tanguticum planted in Gannan(RT-GN), Rheum tanguticum planted in Xinin(RT-XN) and Rheum plmatum planted in Lixian(RP-LX) were evaluated through detecting the parameters of blood lipids, blood viscosity and antioxidant system. Results: T-GN, RT-XN and RP-LX in the range of 1.0～3.0 g/kg could decrease the blood levels of total cholesterol (TC), triglyceride (TG), low density lipoprotein (LDL) and malonaldehyde (MDA) in blood. Besides, they could reduce blood viscosity, increase high density lipoprotein (HDL) level and upregulate the activity of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px). Interestingly, their effects on blood viscosity was obviously in a dose dependent manner. In addition, the effects of RT-GN on LDL, MDA and blood viscosity were not significantly different from those of RT-XN and better than those of RP-LX. Conclusion: The RT has better hypolipidemic effects than the RP, but RT-GN and RT-XN are not different from the above effects.

Rhubarbs from different regions; hypolipidemic effects; blood viscosity; antioxidant; rats

甘南州科技开发交流中心基金项目(BH2012-H01)

2014-09-28

2015-02-25

R285.5

A

1000-6834(2015)03-278-04

10.13459/j.cnki.cjap.2015.03.023

△【通讯作者】Tel: 0931-8765395, 0931-8765394; E-mail: wzw0933@126.com, guomeig@sina.com