乙醛脱氢酶1、CD133在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

覃宇奇，覃冠平，蓝川，韦爱芳



论著·临床

乙醛脱氢酶1、CD133在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

覃宇奇，覃冠平，蓝川，韦爱芳

目的 观察乙醛脱氢酶1(ALDH 1)、CD133在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义。方法 检测鼻咽癌组织135例(研究组)以及正常组织97例(对照组)标本中的ALDH 1、CD133表达情况，并统计分析其与鼻咽癌患者临床资料的关系。结果 (1)研究组ALDH 1阳性表达率为75.56%(102/135)，高于对照组的42.30%(42/97)(χ2=24.945，P<0.05)。ALDH 1评分在鼻咽癌患者性别、年龄、原发癌/转移癌、未分化癌/分化型以及有无颈淋巴结转移等不同临床资料间无显著性差异(t=0.543、0.034、0.022、0.356、0.382，P均>0.05)。(2)研究组CD133阳性表达率为35.56%(48/135)，高于对照组的12.37%(12/112)(χ2=15.824P<0.05)。CD133的表达在患者原发癌/转移癌、未分化癌/分化型不同资料间比较差异有统计学意义(χ2=15.028、5.186，P均<0.05)，在患者性别、年龄以及有无颈部淋巴结转移等不同临床资料间比较差异无统计学意义(χ2=1.545、0.000、0.036，P>0.05)。结论 ALDH1与CD133在鼻咽癌患者中均有较高的阳性表达率，ALDH1的临床价值需进一步研究，而CD133可能与鼻咽癌转移、病理分型有密切的关系。

乙醛脱氢酶1；细胞表面黏附分子；鼻咽癌；肿瘤干细胞

新近的研究显示肿瘤也存在肿瘤干细胞，其存在与肿瘤的发生、转移以及复发有密切的关系[1]，并且常导致放化疗效果达不到临床期望。肿瘤干细胞的生长、分化与乙醛脱氢酶1(ALDH1)有密切的关系，后者是前者的必需物质[2]。细胞表面黏附分子(CD133)也是近年来研究较多的肿瘤干细胞的分子标志物。越来越多的证据显示二者参与了多种肿瘤的发病、发展，但其与鼻咽癌的关系目前研究甚少，本研究通过检测其在鼻咽癌中的表达，以明确其与鼻咽癌的关系，并尝试分析其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 病理样本来源于2004年6月—2014年5月广西壮族自治区江滨医院病理科和河池市人民医院病理科的活检标本，经病理证实为鼻咽癌者135例纳入本研究(研究组)，其中鼻咽部原发癌112例(未分化癌76例、分化型癌36例，伴有颈部淋巴结转移37例)，颈部淋巴结转移癌23例；135例患者中男96例，女39例，年龄25～82(52.1±13.5)岁。选择同期病理科证实为鼻咽慢性炎性反应黏膜活检标本97份为对照组，男71例，女26例，年龄24～80(51.6±12.7)岁。2组标本来源患者的性别、年龄比较无显著性差异(P<0.05)，具有可比性。

1.2 标本处理 标本送病理科后均经10%甲醛固定，并经常规脱水、石蜡包埋、切片以及脱蜡等处理，切片标准厚度为4 μm，采用Envision免疫学组织化学二步法进行检测。将已完成脱蜡至水的标本先使用0.01 mol/L柠檬酸缓冲液高温、高压修复3 min，之后使用3%H2O2浸泡10 min以阻断细胞内源性过氧化物酶。上述步骤完成后采用PBS洗涤，每次3 min，反复洗涤3次。滴入ALDH1[为ALDH1兔多克隆浓缩型抗体(BA3672)，购自武汉博士德生物工程有限公司]和已经稀释为1∶100的CD133一抗[为CD133兔多克隆浓缩型抗体(BA3992)，购自武汉博士德生物工程有限公司]，阴性对照组使用pH 7.4的0.01 mol/L PBS液代替一抗。滴注完毕后将标本置于37℃暖箱中孵育60 min，使用PBS液洗涤，每次3 min，反复3次之后滴入HRP二抗，后将标本再次置于37℃暖箱中孵育30 min，再次使用PBS液洗涤，每次3 min，反复3次。最后标本使用DAB显色、苏木精复染、脱水、封片等程序。

1.3 检测指标及判断标准

1.3.1 ALDH1： 依据切片中细胞染色的程度评分，评估显色深浅和显色范围2个指标。(1)显色深浅评分标准如下：未见显色 0分；浅黄色 1分；棕黄色 2分；棕褐色 3分。(2)显色范围评分标准如下：显色部分占细胞比例0～10% 0分；11%～30% 1分；31%～60% 2分；61%～100% 3分。显色深浅和显色范围评分之和0～2分为ALDH1阴性(-)，2项之和≥3分为ALDH1阳性(+)。

1.3.2 CD133： 切片染色未见显色为CD133阴性(-)，显色为CD133阳性(+)。

2 结 果

2.1 ALDH1、CD133表达 研究组ALDH1阳性表达率为75.56%(102/135)，高于对照组的42.30%(42/97)(χ2=24.945，P<0.05)。研究组CD133阳性表达率为35.56%(48/135)，高于对照组的12.37%(12/97)(χ2=15.824，P<0.05)。

2.2 ALDH1、CD133表达的临床特征 ALDH 1的表达在患者性别、年龄、原发癌/转移癌、未分化癌/分化型以及有无颈淋巴结转移等不同临床资料间比较无显著性差异(P>0.05)。CD133的表达在患者原发癌/转移癌、未分化癌/分化型不同资料间比较有显著性差异(P<0.05)，而在患者性别、年龄以及有无颈部淋巴结转移等不同临床资料间比较无显著性差异(P>0.05)。见表1。

3 讨 论

近年来鼻咽癌的发病率呈逐年增高的趋势[3]，但对其治疗目前并不十分乐观，即使是放化疗技术明显进步的情况下，晚期鼻咽癌的5年生存率仍很低，最乐观的数据也不足40%[4]，远不能满足医患双方的期望。近年来对恶性肿瘤的研究发现癌细胞对放化疗不敏感可能与肿瘤组织中存在肿瘤干细胞(TSC)有关[5]。

表1 ALDH1、CD133在鼻咽癌患者中表达的临床特征分析

TSC具备干细胞的某些特性，表现在存在自我分化多重潜能、自我修复更新等能力，其与肿瘤的增长、复发，甚至是转移存在密切关系的观点已被较为广泛的认可[6]。由此可见，抑制TSC的活性甚至将其杀死后恶性肿瘤的远期生存率有望得到改善，这就需要深入研究TSC的特异性肿瘤标记物，了解其生长特点。本研究所检测的ALDH1和CD133就是目前研究较多的肿瘤标记物，但它们与鼻咽癌的关系目前研究甚少，本研究尝试在这一领域做出努力。

ALDH1是将细胞内乙醛氧化为乙酸的溶质酶，是维持细胞生物活性不可或缺的物质，这一点在TSC中也同样成立[7]。近几年的研究发现，ALDH1可作为肺癌、乳腺癌、胃癌、白血病等的功能性肿瘤标记物[5]，并且研究显示ALDH 1阳性癌细胞具有更高的生长、增殖、分化、转移能力[8]。本研究中，135例鼻咽癌组织标本中检出阳性102例，检出率高达75.56%，远高于正常组织，提示其与鼻咽癌的发病存在密切的关系，检测该标记物有助于临床诊断。分析ALDH 1与患者临床资料的关系，显示在2组性别、年龄、原发癌/转移癌、未分化癌/分化型以及有无颈淋巴结转移等资料间均未显示出显著的差异性，这一结果提示ALDH 1作为鼻咽癌肿瘤干细胞标志物的特征性并不显著，本研究不能肯定其鼻咽癌特异性肿瘤标志物的地位。关于ALDH1在鼻咽癌检测中的意义目前争论颇多，差异也较为明显，需进一步研究[5，9]。

CD133也是被广泛研究的肿瘤标志物，其最早于1997年在小鼠神经上皮干细胞中发现而被认识，目前的研究显示CD133在脑癌、喉癌、结肠癌、肺癌等中也是特异性的肿瘤干细胞标志物[10]，在鼻咽癌领域的研究[11]显示CD133阳性癌细胞具有很强的致瘤能力，且自我修复、分化能力较强。多项研究发现CD133与性别、年龄、肿瘤大小关系不大，但与病理分级、淋巴转移、浸润深度等关系密切[12]，CD133 阳性细胞的检出往往意味着肿瘤恶性程度较高，存在转移，预后不容乐观[13]。本研究中，135例鼻咽癌组织标本中检出阳性48例，阳性检出率35.56%，虽然不及ALDH1的阳性检出率高，但其在转移癌CD133检出率为73.9%，而在原发癌中检出率为27.7%，提示CD133阳性时多意味着肿瘤有更强的侵袭性，这与国外的研究一致[13]。CD133在未分化癌中阳性检出率为21.1%，在分化型中检出率为41.7%，虽然结果显示这种差异具有显著性，但均非高度表达，分化型中阳性检出也不足50%，以此为据将其作为反映肿瘤分化程度的特异性指标仍然十分牵强。有文献显示，CD133能否作为反映肿瘤分化程度的特异性指标物仍未见明确定论[14～16]，但考虑到未分化型/分化型中CD133表达存在显著性差异，笔者考虑CD133有作为反映鼻咽癌病理分化程度特异性指标的潜力，但仍需继续研究。需要反思的是有报道显示CD133在分化型鼻咽癌中阳性表达率超过65%，这比本研究中的41.7%高出甚多，分析这种差异可能与本研究样本量较小有关，同时需重视标本采集的科学性。总之，CD133可能与鼻咽癌转移、病理分型有密切的关系，有待进一步研究证实。

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2 易俊林,高黎,黄晓东,等.416例鼻咽癌调强放疗远期生存与影响因素分析[J].中华放射肿瘤学杂志,2012,21(3):196-200.

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4 杨柯柯,申聪香,文忠,等.人鼻咽癌CD133+干细胞对肿瘤多药耐药作用的研究[J].中华肿瘤防治杂志,2013,20(18):1385-1390.

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8 冀天星,张鑫,李祥勇,等.鼻咽癌肿瘤干细胞样细胞亚群的分离及初步鉴定[J].中国肿瘤临床,2013,(13):754-757.

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10 Kemper K,Sprick MR,Debree M,et al.The AC133 epitope,but not the CD133 protein,is lost upon cancerstem cell differentiation[J].Cancer Res,2010,70(2):719-729.11 龙金华,宝莹娜,金风,等.肿瘤干细胞标记物CD133在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义[J].现代肿瘤医学,2012,20(8):1585-1588.12 Wei P,Niu M,Pan S,et al.Cancer stem-like cell:a novel target for nasopharyngeal carcinoma therapy[J].Stem Cell Res Ther,2014,5(2):44.

13 Kim YH,Kim G,Kwon CI,et al.TWIST1 and SNAI1 as markers of poor prognosis in human colorectal cancer are associated with the expression of ALDH1 and TGF- similar to 1[J].Oncol Rep,2014,31(3):1380-1388.14 Thanan R,Oikawa S,Hiraku Y,et al.Oxidative stress and its significant roles in neurodegenerative diseases and cancer[J].Int J Mol Sci,2015,16(1):193-217.

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Expression of aldehyde dehydrogenase 1, CD133 in nasopharyngeal carcinoma and its clinical significance

QINYuqi*,QINGuanping,LANChuan,WEIAifang.*DepartmentofPathology,JiangbinHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Guangxi,Nanning530021,China

Objective To observe the expression of aldehyde dehydrogenase 1 (ALDH-1), CD133 in nasopharyngeal carcinoma and its clinical significance.Methods Nasopharyngeal carcinoma (NPC) of 135 cases (study group) and normal tissue of 97 cases (control group) were detected with the ALDH-1 and CD133 expression, and statistical analyzed its relationship with clinical data for the patients with NPC.Results (1) Study group’s ALDH-1 positive expression rate was 75.56% (102/135), which was higher than the control group’s 42.30%(42/97) (χ2=24.945,P<0.05). ALDH-1 score in nasopharyngeal carcinoma patients’ gender, age, primary carcinoma / metastatic carcinoma, undifferentiated/ differentiation carcinoma and cervical lymph node metastasis did not show significant difference (t=0.543,t=0.034,t=0.022,t=0.356,t=0.382,P>0.05). (2) Study group’s CD133 expression rate was 35.56%(48/135),which was higher than in the control group 12.37%(12/112) (χ2=15.824,P<0.05). The expressions of CD133 in patients with primary cancer / metastatic carcinoma, undifferentiated / differentiated carcinoma have significant difference (χ2=15.028,χ2=5.186,P<0.05). Gender, age, and with or without cervical lymph node metastasis showed no significant difference (χ2=1.545,χ2=0.000,χ2=0.036,P>0.05).Conclusion ALDH-1 and CD133 in patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC) had higher positive expression rate, ALDH-1’s clinical value needs to be further studied, and CD133 may have close relationship with nasopharyngeal carcinoma metastasis, pathological type.

Aldehyde dehydrogenase 1; Cell adhesion molecules; Nasopharyngeal carcinoma; Tumor stem cell

530021 南宁，广西壮族自治区江滨医院病理科(覃宇奇)； 547000 广西河池市人民医院病理科(覃冠平)， 肿瘤科(蓝川，韦爱芳)

10.3969 / j.issn.1671-6450.2015.06.012

2015-02-05)