分化型甲状腺癌中雌激素受体、孕激素受体和增殖细胞核抗原的表达及临床意义

黄霞，刘景丽，吴健松，李向荣，陈亮



论著·临床

分化型甲状腺癌中雌激素受体、孕激素受体和增殖细胞核抗原的表达及临床意义

黄霞，刘景丽，吴健松，李向荣，陈亮

目的 研究分化型甲状腺癌中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及临床意义。方法 收集甲状腺相关疾病患者105例，其中甲状腺乳头状癌患者33例，甲状腺滤泡癌患者24例，甲状腺腺瘤24例，结节性甲状腺肿患者24例。使用免疫组化法测定各标本中ER和PR及PCNA的表达情况，分析三者的临床意义。结果 甲状腺乳头状癌中，<45岁者的ER阳性表达率显著高于≥45岁者，有淋巴结转移者的ER阳性表达率亦显著高于无淋巴结转移者(χ2=3.945、3.688，P<0.05)；甲状腺滤泡癌中，有淋巴结转移者的ER阳性表达率显著低于无淋巴结转移者(χ2=4.232，P<0.05)。甲状腺乳头状癌无淋巴结转移者的PR阳性表达显著高于有淋巴结转移者(χ2=3.861，P<0.05)。甲状腺滤泡癌有淋巴结转移者的PCNA阳性表达率显著高于无淋巴结转移者(χ2=4.231，P<0.05)。甲状腺乳头状癌的ER及PCNA阳性表达率均显著高于甲状腺腺瘤及结节性甲状腺肿者(χ2=6.561、8.412、4.520、7.695，P<0.05)。甲状腺乳头状癌的PR阳性表达率显著高于结节性甲状腺肿者(χ2=5.519，P<0.05)。甲状腺乳头状癌者的ER、PR及PCNA染色阳性分级显著高于甲状腺腺瘤及结节性甲状腺肿者(χ2=4.520，5.988，3.256,3.635,3.968,5.509，P均<0.05)。Spearman相关性结果表明，甲状腺乳头状癌及甲状腺滤泡癌中，ER与PR呈正相关(r=0.459、0.618，P<0.05)。甲状腺乳头状癌中，PCNA蛋白表达与ER及PR均呈负相关(r=-0.456、-0.442，P均<0.05)。甲状腺滤泡癌中，PCNA蛋白表达与ER呈负相关(r=-0.635，P<0.05)。结论 分化型甲状腺癌中ER、PR、PCNA表达阳性率高于良性甲状腺肿瘤组织，ER、PR、PCNA在分化型甲状腺癌的发病、进展中起重要作用，且三者存在相关性，因此联合检测ER、PR、PCNA对分化型甲状腺癌的诊治具有重要价值。

分化型甲状腺癌；雌激素受体；孕激素受体；细胞核增殖性抗原；表达；价值

目前，对甲状腺结节进行良恶性诊断在临床上是一个难点，现有的影像学手段及病理检查均存在一定的缺陷，寻找一种简单快速的肿瘤标志物组合对甲状腺结节进行诊断已成为临床急需解决的问题之一[1]。国外有研究显示[2]，雌激素受体(estrogen receptor，ER)、孕激素受体(progesterone receptor，PR)及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)在诊断乳腺癌、肺癌等方面具有较好的诊断价值，但在分化型甲状腺癌中的应用较少。现检测分化型甲状腺癌中ER、PR及PCNA的表达及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2012年3月—2013年3月在我院接受治疗的甲状腺相关疾病患者105例作为研究对象。其中甲状腺乳头状癌患者33例，男16例，女17例；年龄28～72(42.8±1.6)岁；病程6～12(8.9±1.1)个月；合并高血压12例，糖尿病18例，冠心病3例；既往有癌症家族遗传史者17例。甲状腺滤泡癌患者24例，男8例，女16例；年龄28～70(42.5±1.3)岁；病程7～12(8.6±1.3)个月；合并高血压10例，糖尿病13例，冠心病1例；既往有癌症家族遗传史者13例。甲状腺腺瘤24例，男9例，女15例；年龄30～72(42.6±1.7)岁；病程7～12(8.4±1.5)个月；合并高血压11例，糖尿病12例，冠心病1例；既往有甲状腺疾病家族遗传史者12例；结节性甲状腺肿患者24例，男5例，女19例；年龄30～74(42.5±1.3)岁；病程8～12(8.6±1.2)个月；合并高血压13例，糖尿病10例，冠心病1例。既往有甲状腺疾病家族遗传史者10例。纳入标准[3]：(1)所有患者的病理标本均由2位以上有经验的专家进行诊断；(2)手术前无放、化疗及内分泌治疗史；(3)满足WHO关于分化型甲状腺癌的诊断标准。排除标准[4]：(1)有出血和感染，以及组织坏死严重者；(2)癌灶过小亦或是蜡块较小者，因连续切片遗漏病变形成假阴性者；(3)年龄≤20岁者。获取其后期手术切除所得甲状腺组织进行进一步研究。本研究经医院伦理委员会批准，患者及家属同意并签署知情同意书。

1.2 观测方法与判定标准

1.2.1 方法 使用免疫组化法测定各标本中ER、PR及PCNA的表达。将制作好的标本蜡块行4 μm切片，脱蜡至水后置于蒸馏水内漂洗5 min，高压修复后将切片置于蒸馏水内冲洗2次，5 min/次。将切片擦干，滴入1滴3%过氧化氢，放在37℃下温育15 min，再置于蒸馏水内冲洗2次，5 min/次。擦干切片，滴入pH 7.8胃蛋白酶，在37℃下温育30 min。用蒸馏水及PBS液各冲洗5 min。而后滴入封闭液，在37℃下温育15 min。擦干切片，添加一抗，ER与PR稀释度1∶100，而PCNA稀释度1∶200。于4℃下过夜。在蒸馏水及PBS液下各冲洗5 min。擦干切片并滴入二抗，在37℃下温育40 min。用蒸馏水冲洗2次，5 min/次。各切片滴入2滴DAB液，在显微镜(XSP-8型, 上海普丹光学有限公司)下观察10～30 min，检测显色过程，终止反应过程。以自来水冲洗和苏木紫染色2 min，30 s分化液，30 s返蓝。利用酒精和二甲苯依次行脱水处理。利用中性树胶进行封片和晾干，使用PBS替代一抗用作阴性对照。

1.2.2 判定标准[5]： ER及PR蛋白的阳性产物主要存于胞浆及胞核中，而PCNA通常表达在细胞核内，为黄色或者棕黄色颗粒。其中免疫组化判定标准：阳性细胞数<10%记0分，10%～25%记1分，26%～50%记2分，51%～75%记3分，>75%记4分。染色程度评价：淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。统计二者乘积，所得结果<3记为阴性，≥3记为阳性。根据分数对表达程度进行划分，0～2分记为阴性(-)、3～4分记为低表达(+)、5～8分记为中表达(++)、≥9分记为高表达(+++)，将低、中、高表达记为阳性。为Log-rank检验的对数秩值。

2 结 果

2.1 癌组织ER、PR及PCNA表达与相关指标的关系 甲状腺乳头状癌中，ER阳性表达率<45岁高于≥45岁者(χ2=3.945，P=0.033)，有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(χ2=3.688，P=0.042)；甲状腺滤泡癌中，ER阳性表达率有淋巴结转移者低于无淋巴结转移者(χ2=4.232，P=0.000)。甲状腺乳头状癌中，PR阳性表达率无淋巴结转移者高于有淋巴结转移者(χ2=3.861，P=0.035)。甲状腺滤泡癌中，PCNA阳性表达率有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(χ2=4.231，P=0.000)。见表1。

2.2 ER、PR及PCNA在甲状腺组织中的分布 ER、PR及PCNA在甲状腺乳头状癌及甲状腺滤泡癌组织中的分布差异无统计学意义(χ2=0.081、0.081、1.852，P=0.776、0.776、0.174)；甲状腺乳头状癌的ER及PCNA阳性表达率均显著高于甲状腺腺瘤及结节性甲状腺肿者(χ2=6.561、8.412；4.520、7.695,P均=0.010、0.004；0.033、0.006)。甲状腺乳头状癌的PR阳性表达率高于结节性甲状腺肿者(χ2=5.519，P=0.019)。见表2。

表1 甲状腺癌的ER、PR及PNA表达与相关指标的关系 [例(%)]

表2 ER、PR及PCNA在甲状腺组织中的分布比较 [例(%)]

注：与甲状腺乳头状癌相比，aP<0.05

2.3 ER、PR及PCNA的染色分级比较 甲状腺乳头状癌者的ER、PR及PCNA染色阳性分级显著高于甲状腺腺瘤及结节性甲状腺肿者(χ2=4.520、5.988、3.256、3.635、3.968、5.509，P均<0.05)。与甲状腺滤泡癌者无明显差异(χ2=0.140、0.001、2.215，P均>0.05)。见表3。

2.4 相关性分析 在甲状腺乳头状癌及甲状腺滤泡癌中，ER与PR呈正相关(r=0.459、P=0.012；r=0.618，P=0.015)。甲状腺乳头状癌中，PCNA蛋白表达与ER及PR均呈负相关(r=-0.456、-0.442，P=0.012、0.013)。甲状腺滤泡癌中，PCNA蛋白表达与ER呈负相关(r=-0.635，P=0.004)；与PR无明显的相关性(r=-0.389，P=0.092)。

3 讨 论

临床上，甲状腺癌作为人体头颈部最为常见的一类恶性肿瘤，近年来发病率明显呈上升趋势。甲状腺癌具有较为复杂的发病机制，且由多因素及多基因的协同作用，是一种经历多个步骤才可形成的生物学变化过程。有报道称，甲状腺具有一定程度的激素依赖性，ER、PR的检测对乳腺癌及前列腺癌等肿瘤的诊断及治疗具有重要意义，但在甲状腺癌中较少涉及，同时，PCNA为细胞增殖有关核抗原内较为多见的一种，其在细胞核中的阳性表达和细胞增殖的活性紧密相连[6，7]。

表3 不同甲状腺组织中ER、PR及PCNA染色表达程度比较 [例(%)]

注：与甲状腺乳头状癌比较，aP<0.05

本研究发现，甲状腺癌与ER、PR及PCNA等的表达紧密相关，主要原因：(1)ER方面：ER主要是介导雌激素针对甲状腺癌调控性增殖而发挥作用，其主要途径含基因及非基因方面[8]。此外，雌激素还可通过调节TSH的分泌对甲状腺癌形成产生间接影响，这是因为甲状腺各组织增生主要由TSH调控。因此，雌激素能够间接发挥调控组织增生，进而促进肿瘤细胞增殖。由上述结果可知，甲状腺癌中ER阳性表达和年龄有一定联系，提示雌激素结合其受体ER进而刺激了癌症基因表达，对早期癌细胞增殖有影响作用。分化型的甲状腺癌较其他种类的恶性肿瘤有着较好的预后，特别是乳头状癌，若无淋巴结转移的影响，患者寿命甚至无明显影响[9]。国外Shamim等[10]报道，分化型甲状腺癌形成的雌激素受体具有更好的功能，因此预后较其他类型的肿瘤更佳。(2)PR方面：孕激素能够抑制患者甲状腺癌的进一步生长，而淋巴结转移则显示恶性肿瘤程度较高，PR表达降低，孕激素抑制作用将无法较好发挥。本文研究结果显示，PR对癌细胞抑制作用逐渐减弱甚至消失，从而导致癌细胞增殖和转移，年龄较大者甲状腺癌恶性程度亦更高，且预后更差。同时，孕激素结合相关受体，通过二聚体形式与靶基因的反应原件进行结合，进而反映出原癌基因表达，更利于癌细胞增殖。(3)PCNA方面：由于PCNA是一种DNA聚合酶性辅助蛋白，可参与到DNA修复和细胞周期调控，与P21产生作用，形成四聚体，进而抑制了相关蛋白激酶活性，对细胞周期产生一定的阻滞作用而影响其表达[11]。PCNA表达程度和肿瘤的恶性程度有紧密联系，恶性程度越强，即浸润程度越大，淋巴结的转移亦越多，则PCNA表达强度越高。

此外，本结果表明ER、PR及PCNA对于甲状腺癌的发生和发展以及浸润和转移等过程中均发挥着十分重要的作用。3种指标间的相互联系较为紧密，是涉及到多种因素和多类分子，以及多种步骤的复杂进程，对三者进行临床诊断，建立起相应的特异型分子标志物，能够更好地提升手术前的诊断准确程度，从而制定出合理治疗方案，辅助判断预后。与国外报道结果相一致[12～16]。

综上所述，分化型甲状腺癌中ER、PR、PCNA表达阳性率高于良性甲状腺肿瘤组织，ER、PR、PCNA在分化型甲状腺癌的发病、进展中起重要作用，且三者存在相关性，因此联合检测ER、PR、PCNA对分化型甲状腺癌的诊治具有重要价值。

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Expression and clinical significance of ER, PR and PCNA in differentiated thyroid cancer

HUANGXia*,LIUJingli,WUJiansong,LIXiangrong,CHENLiang.*DepartmentofOncology,theCentralHospitalofXiaoganCity,HubeiProvinceXiaogan432000,China

Correspondigauthor:CHENLiang,E-mail:15337126775@163.com

Objective To investgate the expression of estrogen receptor(ER),progesterone recepter(PR) and proliferatiing cell nuclear antigen(PCNA) using immunohistochemistry in every specimen, analyzed the clinical significance of the three indexes.Methods From March 2012 to March 2013 in the hospital for treatment of 105 patients with thyroid related diseases as the research object. 33 patients with papillary carcinoma of thyroid cancer. 24 patients with thyroid follicular carcinoma. 24 cases of thyroid adenoma. 24 patients with nodular goiter. Using immunohistochemical method determination of ER and PR in all specimens, and the expression of PCNA, analysis the three parameter’s clinical significance.Results In papillary thyroid carcinoma, < 45 years old patients’ expression of ER positive rate was significantly higher than that of more than or equal to 45 years old patients(χ2=3.945, χ2=3.688,P<0.05), lymph node metastasis of ER positive expression rate was also significantly higher than those without lymph node metastasis; thyroid follicular carcinoma, lymph node metastasis’ ER positive expression rate were lower than that in the lymph node metastasis (χ2=4.232,P<0.05). The PR positive expression of papillary thyroid carcinoma without lymph node metastasis was significantly higher than that of lymph node metastasis(χ2=3.861,P<0.05). Thyroid follicular carcinoma with lymph node metastasis of PCNA positive expression rate was significantly higher than that without lymph node metastasis (χ2=4.231,P<0.05). Papillary thyroid carcinoma with ER and PCNA positive expression rate was significantly higher than that of nodular goiter and thyroid adenoma(χ2=6.561、8.412、4.520、7.695，P<0.05).The positive expression of PR in papillary thyroid carcinoma was significantly higher than that of nodular goiter patients (χ2=5.519,P<0.05). Papillary thyroid carcinoma of ER, PR and PCNA staining positive classification was significantly higher than that of nodular goiter and thyroid adenoma (χ2=4.520,χ2=5.988,χ2=3.256,χ2=3.635,χ2=3.968,χ2=5.509,P<0.05). Spearman correlation showed that the thyroid papillary carcinoma and follicular thyroid carcinoma, ER and PR were positively correlated (r=0.459,r=0.618,P<0.05). In papillary thyroid carcinoma, PCNA protein expression were negatively correlated with ER and PR (r=-0.456,r=-0.442,P<0.05). In thyroid follicular carcinoma, the expression of PCNA protein was negatively correlated with ER (r=-0.635,P<0.05).Conclusion The differentiated thyroid carcinoma in ER, PR, PCNA expression positive rate was significantly higher than that in benign thyroid tumor tissues, the expressions of ER, PR, PCNA play an important role in differentiated thyroid cancer onset and development, and there were correlation among the three indexes. Therefore, combined detection of ER, PR, PCNA in the diagnosis and treatment of differentiated thyroid cancer has important value.

Differentiated thyroid cancer; Estrogen receptor;Progesterone receptor ; Proliferating cell nuclear antigen; Expression; Value

432000 湖北省孝感市中心医院肿瘤科(黄霞、刘景丽、吴健松、李向荣)； 430064 武警湖北总队医院消化内科(陈亮)

陈亮，E-mail:15337126775@163.com

10.3969 / j.issn.1671-6450.2015.06.011

2014-12-16)