住院患者分离的纹带棒状杆菌耐药性及同源性研究

邓洪均(重庆市渝北区中医院检验科 401147)



·论 著·

住院患者分离的纹带棒状杆菌耐药性及同源性研究

邓洪均(重庆市渝北区中医院检验科 401147)

目的 分析研究住院患者分离的纹带棒状杆菌耐药性及同源性。方法 选取于2013年10月至2014年4月在该院住院患者58例，对患者不同部位分离的纹带棒状杆菌58株，采用肉汤微量稀释法对患者进行体外药敏试验，对纹带棒状杆菌阳性患者的周边环境采用盐水棉拭子法进行采样，对分离的纹带棒状杆菌进行体外药敏试验；对58株纹带棒状杆菌采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)进行分子分型。结果 纹带棒状杆菌聚集分布于2013年12月至2014年3月。药敏试验结果显示，四环素、红霉素、克林霉素、环丙沙星和青霉素这5种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC)≥64 μg/mL；万古霉素、利福平和庆大霉素的MIC均为0.5 μg/mL；只有1株分离的纹带棒状杆菌对除克林霉素之外的所用抗菌药物全部敏感。PFGE分型结果显示，50株纹带棒状杆菌共分为7个不同基因型，其中0002型和0006型这两种基因型为优势型。从同期住院的同一病房患者身上分离出的纹带棒状杆菌同源性高。环境采样结果显示，纹带棒状杆菌分离阳性率达43.48%(10/23)。结论 住院患者分离纹带棒状杆菌呈多重耐药性，且从不同患者身上分离出的菌株同源性极高。

棒状杆菌属； 耐药性； 同源性； 分子分型

棒状杆菌属是因为其菌体一端或者两端膨大，类似棒状而得名，它属于无芽孢的革兰阳性杆菌[1]。棒状杆菌大多数是致病菌，容易在机体抵抗力低下时引发机体感染。近年来，抗菌药物大量运用于临床，甚至出现滥用抗菌类药物状况，导致细菌出现耐药性或多重耐药性，大大增加了临床治疗的困难度[2]。据相关研究报道，纹带棒状杆菌能够在医院传播，尤其对于长期住院患者，该病菌滋生速度极快。本文旨在研究住院患者分离的纹带棒状杆菌耐药性及同源性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取于2013年10月至2014年4月在本院住院的患者58例，其中男30例，女28例，年龄18～85岁、平均年龄(54.3±2.5)岁，住院5～35 d、平均住院(9.1±2.1)d。

1.2 仪器与试剂 采用VITEK2全自动微生物鉴定系统进行细菌鉴定，鉴定卡选用厌氧菌-棒状杆菌鉴定卡；采用天津金章有限公司的氧化发酵管进行氧化发酵试验；选用ATCC经黄色葡萄球菌进行协同溶血试验；血琼脂平板以及药敏试验板均选自天津金章有限公司；选用美国bio-rad公司的脉冲场凝胶电泳(PFGE)系统；添加2.5%～5.0%溶解的马血进肉汤，根据Plassmeier等[3]研究选择如下8种抗菌药物：四环素、红霉素、克林霉素、环丙沙星、青霉素、万古霉素、利福平和庆大霉素，对纹带棒状杆菌阳性患者的周边环境采用盐水棉拭子法进行采样。

1.3 体外药敏试验 在血琼脂平板上对分离出来的纹带棒状杆菌进行传代培养。采用肉汤微量稀释法对所有菌株的最小抑菌浓度(MIC)值进行测定。按梯度将8种抗菌药物分布于96孔板中[4]，对四环素、红霉素、环丙沙星、青霉素、万古霉素、利福平和庆大霉素设置8个梯度浓度；对克林霉素设置7个梯度浓度。最高浓度均为64 μg/mL，最低浓度为0.5 μg/mL。另外设置一个不含任何抗菌药物的空白生长孔。以肺炎链球菌ATCC49619为质控菌株。药敏平板温度控制在35 ℃，培养24～48 h。观察试验结果。

1.4 分子分型 制备好菌悬液和胶块，进行细胞裂解，做好胶块内DNA的酶切，再进行电泳，电泳时长为19 h，完毕后，用0.1 μg/mL EB液染色30 min，纯水脱色20 min。用凝胶成像仪成像，每块胶块上的DNA均用ATCC33591菌株以及相对分子质量标准进行标准化，方便对比。

1.5 聚类分析 采用第5版BioNumerics软件处理胶块间图像的对比。采用1.5%的条带差异容许度。菌株间相似性系数大于90%则归为一类。

1.6 统计学处理 本次研究采用SPSS17.0统计学软件处理，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 菌株分布情况 对患者不同部位分离的纹带棒状杆菌58株，其中12株从重症病房患者身上分离，15株从精神外科患者身上分离，5株从精神内科患者身上分离，14株从呼吸内科患者身上分离，7株从普通外科病房患者身上分离，3株从泌尿内科患者身上分离，2株从口腔科患者身上分离。58株分离的纹带棒状杆菌标本中有41株下呼吸道标本，5株脓液标本，7株尿液标本和5株脑脊液标本。58例患者在分离纹带棒状杆菌前正在使用不少于1种抗菌药物，使用频率最高的是β-内酰胺类抗菌药物，其次是喹诺酮类抗菌药物。2013年10月纹带棒状杆菌有2株，2013年11月有3株，2013年12月有15株，2014年1月有12株，2014年2月有11株，2014年3月有13株，2014年4月有2株。纹带棒状杆菌主要集中分布于2013年12月至2014年3月。

2.2 细菌鉴定结果 氧发酵试验检验纹带棒状杆菌的氧化型为100%。本组58株菌中有57株CAMP为阳性，占98.27%。VITEK-2鉴定率达到94%，Bionumber为7323120600001，与其他棒状杆菌无重码。

2.3 体外药敏试验结果 四环素、红霉素、克林霉素、环丙沙星和青霉素这5种抗菌药物的MIC≥64 μg/mL；万古霉素、利福平和庆大霉素的MIC均为0.5 μg/mL；只有1株分离的纹带棒状杆菌对除克林霉素之外的所用抗菌药物全部敏感。详见表1。

2.4 耐药性分析 根据脉冲场凝胶电泳分型结果，按90%相似度进行划分，58株菌共有7个不同基因型，每种不同的基因型菌株都具有一定的耐药性。其中0002型(除C13和C14之外)为优势耐药型，耐药型与0001型、0003型和0004型以及除C9和C8之外的0006型、0007型耐药型相同。在0002型中，优势耐药型C4和C13、C14的主要区别为青霉素敏感以及庆大霉素敏感。在0006型中，C9 和C1菌株的差异为红霉素、青霉素、环丙沙星以及四环素敏感。C18和C1菌株的差异在于庆大霉素耐药。详见表2。

2.5 环境采样结果 菌株集中出现在呼吸内科病房、神经外科病房以及重症监护病房。根据23份有效环境标本检测结果，纹带棒状杆菌分离率达43.48%(10/23)。对2个疑似纹带棒状杆菌菌落进行进一步鉴定，并进行体外药敏试验，发现20株环境标本分离出的纹带棒状杆菌中有17株(85%)和从相应的患者身上分离出的菌株耐药型相同。

表1 58株纹带棒状杆菌药敏试验结果(μg/mL)

表2 不同PFGE型纹带棒状杆菌MIC值分析(ng/mL)

3 讨 论

纹带棒状杆菌能够在医院内通过异体传播，引发患者伤口、呼吸道等部位感染。但由于棒状杆菌生长较缓慢，临床中往往忽视其危害性。然而不断有研究表明纹带棒状杆菌在医院传播能力强，而且具有多重耐药性[5]。临床上正确对待并重视纹带棒状杆菌的特征，有利于更好地防止其滋生，降低其耐药性[6]。

本组研究中，纹带棒状杆菌在一定的时间段集中分布，且分布地点也较集中。根据PFGE分型显示，同期住院的同一病房患者身上分离出的纹带棒状杆菌同源性高，存在交叉感染的可能。而且，根据环境采样结果显示，环境标本中纹带棒状杆菌阳性率为43.48%，其耐药型和从相应的患者身上分离出的菌株耐药型相同。这表明纹带棒状杆菌在医院的传播能力较强，然而，临床上对其传播机制尚不清楚[7]。

这需要临床上对其进行进一步研究。

综上所述，住院患者分离纹带棒状杆菌呈多重耐药性，且从不同患者身上分离出的菌株同源性极高，临床上应对纹带棒状杆菌高度重视，分析其对临床用药的影响。

[1]王俊瑞,杜小莉,崔晶花，等.住院患者分离纹带棒状杆菌耐药性及同源性分析[J].中华医学杂志,2014,100(32):2501-2505.

[2]李玮,张正.66株棒状杆菌临床分离株的鉴定及其药物敏感性分析[J].中国实验诊断学,2007,11(7):932-936.

[3]Plassmeier JK,Busche T,Molck S，et al.A propionate-inducible expression system based on the Corynebacterium glutamicum prpD2 promoter and PrpR activator and its application for the redirection of amino acid biosynthesis pathways[J].J Biol,2013,163(2):225-232.

[4]陈东科,许宏涛,胡付品，等.纹带棒杆菌医院内感染状况分析[J].中华流行病学杂志,2013,34(9):947-948.

[5]苏瑞蕊.棒状杆菌细胞壁中的主要成分的合成过程[J].国际检验医学杂志,2013,34(7):853-855.

[6]Brune I,Goetker S,Schneider J，et al.Negative transcriptional control of biotin metabolism genes by the TetR-type regulator BioQ in biotin-auxotrophic Corynebacterium glutamicum ATCC 13032[J].J Biol,2012,159(3):225-234.

[7]谢爱香.棒状杆菌临床分离株药物敏感性及同源性分析[J].国际检验医学杂志,2012,33(7):782-783.

Study on drug resistance and homology of Corynebacterium striatum isolated from inpatients

DENGHong-jun

(DepartmentofClinicalLaboratory,YubeiDistrictHospitalofTraditionalChineseMedicine,Chongqing401147,China)

Objective To analyze the drug resistance and homology of Corynebacterium striatum isolated from inpatients.Methods 58 inpatients in our hospital from 2013 October to 2014 April were selected.58 strains Corynebacterium striatum were isolated from different parts.The in vitro drug susceptibility test was performed by using the broth microdilution method.The surround environment in the patients with Corynebacterium striatum positive were sampled by saline cotton swab.The isolated Corynebacterium striatum was performed the in vitro drug susceptibility test;58 strains of Corynebacterium striatum were performed the molecular typing by using the pulsed field gel electrophoresis (PFGE).Results Corynebacterium striatum aggregation was distributed in December 2013,January,February and March 2014.The results of drug susceptibility test showed that the minimal inhibitory concentrations(MIC) of the 5 kinds of antibacterial drugs,tetracycline,erythromycin,clindamycin,ciprofloxacin and penicillin,were more than or equal to 64 μg/mL;MIC of vancomycin,rifampicin and gentamicin all were 0.5 μg/mL;only 1 isolated strain of Corynebacterium striatum was sensitive to all antibacterial drugs except for clindamycin.The pulsed field gel electrophoresis typing results showed that 50 strains of Corynebacterium striatum were divided into 7 different genotypes,in which 0002 genotype and 0006 genotype were predominant type.Corynebacterium striatum isolated from the patients in the same ward during the corresponding period had high homology.The environmental sampling results showed that the isolation positive rate of Corynebacterium striatum reached 43.48%(10/23).Conclusion Corynebacterium striatum isolated from inpatients presents multi-drug resistance,and which isolated from different in patients has extremely high homology.

Corynebacterium; drug resistance; homology; molecular typing

邓洪均，女，专科，主管检验师，主要从事临床微生物研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.18.037

A

1672-9455(2015)18-2741-02

2015-03-17

2015-04-19)