微柱凝胶法对ABO血型正反定型不符标本的筛选、鉴别和定型

庞卫花，刘永涛，徐 娜，李金巍，杨敬芳

(河北北方学院附属第二医院1.检验科;2.信息科;3.妇科，河北张家口，075100)

ABO血型鉴定是指ABH血型抗原的检测。一般情况下，ABO血型一致的人才可进行输血，特别是大量输血时，应采用同一血型的血液。输血时若血型不合，会造成输入的红细胞(RBC)发生凝集，引起血管阻塞及血管内大量溶血。多数与输血有关死亡患者的死因与输入ABO不相容的血液有直接或者间接关系，其中1/3由ABO血型鉴定有误所致。因此，血型检测与输血反应密切相关，在输血前必须进行血型鉴定。ABO血型正反定型相符是其鉴定关键所在，必须查明引起正反定型不相符的原因，以获得ABO血型的准确定型［1－2］。

微柱凝胶法作为一种新式血型血清学技术，在常规血型鉴定方面具有反应结果可靠且易于标准化、特异性强等特点，已被西方国家广泛用于常规红细胞血型血清学的检测。因其抗原抗体量恒定，且操作标准化，故对ABO亚型、弱抗原的反应强度高于传统试管法，目前国内已逐步应用于临床［3－4］。本研究采用微柱凝胶法对ABO血型正反定型不符标本进行筛选、鉴别和定型，有效解决了ABO血型正反定型不符的问题，为临床ABO血型定型的准确性提供了科学依据，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年4月—2013年4月河北北方学院附属第二医院送检血样及献血员标本3 000例，其中白血病325例，多发性骨髓瘤91例，骨髓纤维化24例，贫血288例，肠癌164例，消化道出血270例，外科手术269例，以及其他相关疾病者。满足ABO血型正反定型不符100例，其中男80例，女20例;年龄5～85岁。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂及仪器:ABO、RhD血型定型试剂卡(长春博讯生物技术有限公司);免疫微柱离心机、台式低速离心机及免疫微柱孵育器。

1.2.2 鉴定方法:ABO正反定型、微柱凝胶卡氏法、吸收放散试验、试管法、唾液中血型物质测定、配血试验、抗体鉴定等均严格按照说明书操作进行。

筛选:采用ABO、RhD血型定型试剂卡将全体血样标本进行ABO血型正反定型，筛选出正反定型不符的标本，继续进一步检测。鉴别:对初次出现正反定型不符的标本重新采集，采用试管法检测红细胞与抗－A1及抗－AB的凝集强度，重复试验进行核实，包括核查标本标签、申请单及标本质量，离心机的转速、离心力及离心时间等相关设置，试剂有无漏加或加错等，以排除人为因素及技术失误。对重新采集的血样，留取唾液进行血型物质鉴定，唾液血型物质检测及红细胞H物质活性检测，以重新制备红细胞悬液。定型:采用微柱凝胶法对ABO血型正反定型。根据血型血清学技术，对上述确定抗原改变引起正反定型不符标本正确定型。对血清反应出现的问题，可分为正定型与反定型不符。正定型不符，即红细胞与抗－A或抗－B出现额外反应和反应减弱以及无反应和混合凝集;反定型不符包括与A1、或B细胞出现额外反应以及反应减弱、无反应等。根据初步分类结果并结合临床资料进行试验，将其中正定型(抗－A和/或抗－B)呈阴性及混合凝集的红细胞标本进行吸收放散试验，以确定受检标本A、B抗原，并结合正定结果来明确抗原改变引起的正反定型不符。

1.3 鉴定标准

一系列鉴定检测均参照《全国临床检验操作规程》和《临床输血诊疗技术》要求进行［5－6］。

2 结果

2.1 鉴定结果

100例ABO血型正反定型不符标本中，28例为操作不规范等人为因素所致，通过重新测试后ABO血型正反定型相符。余72例经进一步复习临床资料及分类试验验证，明确为ABO血型正反定型不符由疾病因素及亚型因素所致。

2.2 典型病例

2.2.1 疾病因素导致假凝集而引起正反定型不符:男，51岁。因严重贫血而入院，血红蛋白48 g/L，急需输血。试管法血型鉴定:正定型A型，反定型出现了额外反应，即A、B细胞出现了串钱状凝集。查阅临床资料发现，患者患有多发性骨髓瘤，无输血史，弱凝集通过加入0.9%氯化钠溶液稀释后散开，明确正反定型不符是由疾病导致的假凝集，其血型应为A型。见表1。

2.2.2 ABO亚型因素引起正反定型不符:男，23岁。因贫血而入院，血红蛋白48 g/L。试管法血型鉴定:正定型为AB型，反定型出现抗－A。查阅临床资料发现，患者无输血史。抗体筛查试验显示阴性，红细胞与抗－A1反应阴性，血清与A2细胞无凝集，但与A1细胞有凝集(2+)，并经吸收放散试验，鉴定患者为A2B亚型。见表1。

表1 ABO正反定型不符典型病例血型特点

3 讨论

血型鉴定必须有规范的标准流程，若发现正反定型不符标本，应先查明原因，排除人为因素，并结合相关临床资料，行进一步血型鉴定试验，以确保检测的准确性［7－9］。微柱凝胶法对ABO血型正反定型不符标本的筛选、鉴别和定型，具有处理能力强、速度较快、人为误差较小等优点，不仅可提高血型鉴定的自动化程度，还可减少因人工操作引起的误差。

微柱凝胶法对血型正反定型不符标本的鉴定需要进行重复测试，且对相关标本与试剂进行核查。本研究通过重复检测发现，100例ABO血型正反定型不符标本中有28例为操作不规范等人为因素所致，提示实验过程中规范化操作很重要。依据血清反应特点，将标本分为正、反定型不符2种，分析影响因素，并对非人为因素导致的正反定型不符进行有效处理［10－12］。本研究对余72例ABO血型正反不符标本进行重新鉴定，明确为ABO血型正反定型不符由疾病因素及亚型因素所致。对疾病因素所致者，通过查阅临床资料，并按照微柱凝胶法进行规范化操作，鉴定患者血型为A型。可见，因疾病因素导致正反定型不符患者，通过查阅临床资料，并按照微柱凝胶法进行规范化操作，有利于患者血型的鉴定;对ABO亚型因素所致者，针对具体因素进行微柱凝胶法鉴定，患者血型为A2B型，进一步提示在查明原因的前提下，采用微柱凝胶法对ABO血型正反定型不符标本进行鉴定，效果理想。检测过程中，采取正反定型原则可确保鉴定结果的准确性。同时，实施二次检测的模式可避免标本在采集过程中发生错误。

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