胃癌组织中微小核糖核酸-100的表达及其临床意义*

贺华 王义杰 吕剑平 郑美蓉

胃癌是威胁人类健康最常见的恶性瘤之一，其发病率和病死率均居各种恶性肿瘤前列[1-2]。胃癌的发生是一个集遗传、环境及生活习惯等多因素于一体的复杂过程，但其确切机制仍不清楚[3-4]。微小核糖核酸（miRNA）是近年来新发现的一类非编码单链小分子RNA[5]，它代表了一个新层次上的基因表达调控方式，其为肿瘤发病机制的研究开辟了新的领域和思路[6-7]。荧光原位杂交技术（FISH）有敏感度高、信号强、背景低、快速等优点，因此特别适合于病理学研究[7]。本研究分析miRNA在胃癌组织中的表达及意义，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收取2013年6月-2014年12月本院手术切除的50例胃癌标本。男38例，女12例；年龄43~81岁，平均（63.4±10.2）岁。患者入院时均无其他肿瘤或恶性合并症，且未接受放射、化学、免疫治疗。肿瘤<5 cm 7例，≥5 cm 43例；高中分化14例，低分化36例；临床病理分期Ⅰ~Ⅱ期23例，Ⅲ~Ⅳ期27例；无淋巴结转移13例，有淋巴结转移37例。取材时尽量切取肿块中心的组织作为实验组，同时留取距肿瘤边缘5 cm以上的癌旁正常组织作为对照组。

1.2 方法 主要仪器与试剂：原位杂交仪（S2451 S500-24）和荧光显微镜（BX-51）分别为德国莱卡仪器有限公司和日本OLYM PUS公司产品；miR-100 FISH probe（DIGOXIN Labeld）、U6阳性对照探针、IR型原位杂交检测试剂盒（红色荧光）和4%多聚甲醛均购自广州外显子生物技术有限公司。

按说明书方法进行原位杂交检测，基本过程如下：二甲苯脱蜡，无水乙醇梯度脱水，4%多聚甲醛PBS液孵育，55 ℃预杂交后，加DAPI-抗荧光淬灭剂复染，置于暗处显微镜观察结果，DAPI呈蓝色荧光，探针呈红色荧光。结果判定：miR-100阳性表达信号显示红色颗粒。

1.3 观察指标 胃癌的阳性信号表达部位主要见于癌组织的细胞浆中，miR-100阳性表达信号显示呈红色颗粒。观察两组miR-100的阳性表达率，分析miR-100在性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、临床病理分期、淋巴转移中的表达情况。

1.4 统计学处理 用SPSS 18.0软件包对数据进行处理及分析，计数资料用率（%）表示，比较采用 字2检验和Fishers精确概率法，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 miR-100表达检测的情况 运用FISH技术检测胃癌组织（实验组）和配对癌旁组织（对照组）中miR-100的表达情况，结果显示：50例标本中实验组miR-100的阳性表达32例，阴性18例，阳性表达率64%；对照组miR-100的阳性表达10例，阴性40例，阳性表达率20%，实验组高于对照组，比较差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2 miR-100表达与胃癌病理特征的关系 按照不同的临床病理特征（性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、临床病理分期和淋巴结转移）对50例胃癌患者进行分组，通过组间对比分析，结果表明胃癌组织中miR-100阳性表达率与患者的性别、年龄、肿瘤大小均无明显相关性（P>0.05），而与胃癌患者的肿瘤分化程度、临床病理分期和淋巴结转移均有关，差异具有统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 miR-100表达与胃癌病理特征的关系

3 讨论

miRNA广泛存在于真核生物中，并且具有物种进化上的高度保守性，他们参与动植物组织器官的发育和形成，影响细胞增殖、分化和凋亡，与脂肪代谢和激素分泌等过程有关，并与包括肿瘤在内的多种疾病有着密切的关系[8-9]。

大量的研究发现，肿瘤细胞与正常组织来源细胞间的miRNA表达谱具有明显的差异，多种肿瘤存在miRNA的异常表达或缺失，表明miRNA与多种人类肿瘤的关系密切，且miRNA在肿瘤组织和细胞中表达水平的异常与肿瘤的发生进展、分化分期及转移、预后等特征有着密切的联系[10-11]。近年来的研究表明miRNA在肿瘤的发生发展中起类似于促癌基因或抑癌基因的作用[12]。利用miRNA的表达特征，有助于鉴别良恶性病变和肿瘤预后的判断。

许多不同的癌症疾病都发现与miRNA存在密切的关系，胃癌同样被发现与许多的miRNA有一定程度的相关性。miRNA主要位于染色体的脆性位点上，正常的上皮细胞-间质转化（EMT）时，常导致染色体出现增加、缺失、重排等现象，致使miRNA在胃癌的发病过程中发挥着重要的作用[13]。miR-100位于染色体11q24.1。miR-100是人类发现较早miRNA中的一员，在多种肿瘤组织和细胞中表达异常。Volinia等[14]在对胃癌等6种人类肿瘤的540例组织标本的研究发现，相对于正常胃黏膜组织，miR-100在胃癌组织中表达上调。Ueda等[15]也发现miR-100在胃癌中明显升高，起到促癌基因的作用。但利用FISH技术对其结果的验证少有报道，miR-100表达与胃癌的临床病理特征的关系也不十分清楚。

本实验通过FISH技术检测miR-100在胃癌组织中的表达情况，结果发现与配对癌旁正常组织相比，miR-100在胃癌组织中的表达显著升高。miR-100阳性表达信号显示呈红色颗粒，阳性信号表达部位主要见于癌组织的细胞浆中，提示miR-100可能参与了胃癌的发生、发展等生物学行为，发挥着促癌基因的作用。笔者进一步对50例胃癌患者的临床病理特征与miR-100阳性患者进行卡方检验分析，结果显示与主要判断预后的指标明显相关，这说明miR-100作为判断胃癌恶性程度的指标具有一定的临床价值。

综上所述，miR-100在胃癌组织中表达上调，其在胃癌发生、发展过程中发挥着促癌基因的作用，miR-100阳性表达有望成为胃癌诊断和预后判断的客观指标之一。

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