HPLC测定清洁验证中残留物硝酸益康唑的含量

2015-05-09蔡亚兰洪丽萍黄加秀宗艳艳朱佳丽段鹏

中国实用医药 2015年1期

蔡亚兰洪丽萍黄加秀宗艳艳朱佳丽段鹏

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目的建立清洁验证中硝酸益康唑含量测定的高效液相色谱法(HPLC)。方法检测波长：235 nm；柱温：30℃；流动相：乙酸铵溶液(2%)-乙腈-甲醇(38：30：32)；擦拭溶剂：乙醇。结果硝酸益康唑在5.80～232.07 µg/ml范围内线性关系良好, r=1.0000。平均回收率为99%, RSD为0.3%(n=6)。结论本方法简便、快速、准确, 可以用于硝酸益康唑清洁验证中残留物硝酸益康唑的定量分析。

高效液相色谱法；清洁验证；残留物；硝酸益康唑

硝酸益康唑适用于皮肤念珠菌病的治疗, 亦可用于治疗体癣、股癣、足癣、花斑癣等, 其制剂硝酸益康唑乳膏是本公司生产的畅销品种, 由于其皮肤念珠菌病治疗中的显著疗效而受到患者的一致好评。本文参考药典方法［1］和HPLC对主活性成分硝酸益康唑的定量分析进行了研究和验证, 结果表明HPLC法简便快速, 准确, 可以用于硝酸益康唑的定量分析。

根据擦拭取样的残留量=设备中的总残留限度/设备总内表面积计算得出硝酸益康唑的残留量LD值为2.248 µg/cm2,试验中模拟设备材质的平板面积为100 cm2, 取样回收率为100%, 换算为理论取样量为224.8 µg, 于10 ml量瓶中以流动相溶解并稀释至刻度, 得到浓度约为22.48 µg/ml的溶液, 作者以此浓度开展相关研究和验证。

1 仪器与试药

美国Agilent1200高效液相色谱仪, 瑞士Mettler Toledo XS205电子天平, 昆山KQ-500DE超声波仪等。

硝酸益康唑对照品(批号为：100214-200903)购于中国药品生物制品检定所, 试剂均为分析纯, 水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填充柱；流速：2.0 ml/min；检测波长：235 nm；柱温：30℃；进样体积：20 µl；流动相：乙酸铵溶液(2%)-乙腈-甲醇(38：30：32)；擦拭溶剂：乙醇。

2.2 对照品溶液的配制精密称取硝酸益康唑对照品适量,加流动相溶解制成每1 ml含224.90 µg的对照品贮备液。

2.3 线性关系试验分别精密吸取上述对照品贮备液适量,用流动相稀释制成浓度分别为：5.62、11.24、22.49 、56.22、112.45、224.90 µg/ml的溶液, 分别以0.45 µm×25 mm内径过滤器过滤至2 ml HPLC小瓶内, 取上述溶液各20 µl, 分别注入液相色谱仪, 记录色谱图, 建立校正曲线, 硝酸益康唑浓度和其峰面积的相关系数r=1.0000。

结果表明, 硝酸益康唑在5.80～232.07 µg/ml范围内, 硝酸益康唑对照品溶液浓度和其峰面积具有良好的线性关系。

2.4 检测限(LOD)和定量限(LOQ) 检测限对应的信噪比为3：1；定量限对应的信噪比为10：1, HPLC法测定硝酸益康唑的LOD为6.96 ng, LOQ为23.21 ng。

2.5 重复性试验取浓度为225.8 µg /ml的硝酸益康唑对照品溶液, 以0.45 µm×25 mm内径过滤器过滤至2 ml HPLC小瓶内, 取此溶液20 µl, 重复5次注入液相色谱仪, 记录色谱图,计算5次所得硝酸益康唑峰面积的RSD值为0.8%, 表明该方法重复性良好。

2. 6 稳定性试验取浓度为225.8 µg /ml的硝酸益康唑对照品溶液, 以0.45 µm×25 mm内径过滤器过滤至2 ml HPLC小瓶内, 将此溶液置于室温下放置0、2、4、6、8、12、16、24、32、40、48、56、64、72 h后分别精密量取20 µl注入色谱仪, 记录色谱图, 测定14次峰面积的RSD值为0.6%, 表明供试品溶液在72 h内稳定。

2. 7 重复性试验取批号为13070111的样品, 按照“2.9”项下方法制备6份供试液, 结果硝酸益康唑含量均值为100.40%, RSD为0.3%。

2. 8 加样回收率试验采用加样回收法。计算得平均回收率为99.11%, RSD为0.3%, 结果见表1。