不同乙肝血清模式下前S1抗原以及HBV-DNA检测的结果分析

朱海洋 韩仙芝

不同乙肝血清模式下前S1抗原以及HBV-DNA检测的结果分析

朱海洋 韩仙芝

目的检测不同乙肝血清模式下前S1抗原(PreS1)以及乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBVDNA)的结果, 并探讨三者的关系及临床意义。方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对500例乙肝患者血清进行乙肝血清标志物(HBV-M)和PreS1检测, 用荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)方法检测HBV-DNA。结果 PreS1总阳性率为73.8%, HBV-DNA总阳性率为65.8%, 差异无统计学意义(P＞0.05)；大三阳组中PreS1阳性率为93.1%, HBV-DNA阳性率为100.0%, 两者阳性率接近, 差异无统计学意义(P＞0.05)；小三阳组中PreS1阳性率为69.9%, HBV-DNA阳性率为45.8%, PreS1阳性率明显高于HBVDNA, 差异有统计学意义(P＜0.01)；乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性组的PreS1和HBV-DNA阳性率均明显高于HBeAg阴性组, 差异有统计学意义(P＜0.01)；在HBeAg阳性组中, PreS1和HBV-DNA阳性率相近, 差异无统计学意义(P＞0.05), 在HBeAg阴性组中, PreS1阳性率高于HBV-DNA, 差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 HBeAg和PreS1与HBV-DNA检测率高度相关, PreS1与HBV-DNA既有一致性, 又有互补性。对检测HBeAg阴性的乙肝患者, PreS1有独特的优势。乙肝血清

前S1抗原；乙肝病毒脱氧核糖核酸；乙肝血清标志物；乙型肝炎e抗原

HBV感染是引起慢性乙肝、乙肝肝硬化和肝癌的一个重要原因, 中国是HBV高流行区［1］, 乙型肝炎患者的诊断主要依据是HBV-M、HBV-DNA、PreS1以及乙肝大蛋白。乙肝血清标志物已作为常规检查广泛应用于临床, PreS1是HBV外膜蛋白(含S、前S1和前S2蛋白)的重要成分, 是反映病毒的活动性复制和肝脏损害的指标［2］, HBV-DNA称为乙肝病毒脱氧核糖核酸, 是判断乙肝病毒有无复制的金指标。本文通过ELISA检测乙肝患者的HBV-M、PreS1, 用荧光定量PCR法检测HBV-DNA, 对其结果进行分析比对, 现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集本院2012年11月～2013年11月行HBV-M、HBV-DNA及PreS1检测的HBV感染患者共500例,其中乙肝血清学模式：①HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+) (即乙肝大三阳)174例；②HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+) (即乙肝小三阳)236例；③HBsAg(+)、HBcAb(+)52例；④HBsAg(+)、HBeAb(+)18例；⑤HBeAb(+)、HBcAb(+)11例；⑥HBsAg(+)9例。

1.2 方法与试剂

1.2.1 HBV-M检测 采用郑州安图生物工程股份有限公司生产的乙肝五项试剂盒, 用ELISA法进行HBV-M检测并依据检测结果进行分组。

1.2.2 PreS1检测 采用双抗体夹心ELISA法, 以固相化的HBsAb单抗捕获待检标本中的乙肝病毒表面抗原, 用辣根过氧化物酶标记的抗PreS1单抗作为检测抗体, 根据酶-底物反应后的呈色吸光值, 测定血清中乙肝病毒PreS1。试剂由上海阿尔法生物技术有限公司提供, 试剂批号：200405l00。

1.2.3 HBV-DNA检测 对于HBV-DNA的检测采用PE-7500型荧光定量检测仪, 试剂选购于中山大学达安基因股份有限公司, 实验设施及操作规程严格按照卫计委颁发的《临床基因扩增PCR诊断实验室工作规范》要求进行。结果判断：HBV-DNA值＞5×102 IU/ml为阳性。

1.3 统计学方法 采用SPPS16.0统计学软件处理数据。 各组数值比较均采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同乙肝血清学模式下HBV-DNA与PreS1检测结果见表1。在受检的500例标本中, PreS1总阳性率为73.8%, HBV-DNA总阳性率为65.8%, 二者阳性率接近, 差异无统计学意义(P＞0.05), 而在各组中, 两者的阳性率又有所不同：第1组(即大三阳组)中PreS1阳性率为93.1%, HBV-DNA阳性率为100.0%, 两者阳性率接近, 差异无统计学意义(P＞0.05),表明该组存在病毒高复制;第2组(即小三阳组)中PreS1阳性率为69.9%, HBV-DNA阳性率为45.8%, PreS1阳性率明显高于HBV-DNA, 差异有统计学意义(P＜0.01), 由此可知部分HBeAg转阴的患者仍有乙肝病毒高复制;第4组, PreS1和HBV-DNA阳性率分别为94.4%和100.0%, 差异无统计学意义(P＞0.05), 该组患者也有病毒高复制和高传染性。

2.2 HBeAg阳性组的PreS1和HBV-DNA阳性率均明显高于HBeAg阴性组, 差异有统计学意义(P＜0.01)；在HBeAg阳性组中, PreS1和HBV-DNA阳性率相近, 差异无统计学意义(P＞0.05), 在HBeAg阴性组中, PreS1阳性率高于HBVDNA, 差异有统计学意义(P＜0.01), 见表2。在HBV-DNA阳性的329例标本中, PreS1和HBeAg阳性率分别为85.1%和52.9%, 差异有统计学意义(P＜0.01), 二者与HBV-DNA的总符合率分别为72.4%和69.0%, 表明三者之间有一定相关性。PreS1和HBV-DNA有交叉阳性与交叉阴性结果, 说明二者同时检测有很好的互补作用。见表3。

表1 HBV-M与PreS1、HBV-DNA联合检测结果［n(%)］

表2 HBeAg阳性组和阴性组中PreS1和HBV-DNA检测结果［n(%)］

表3 HBV-DNA和PreS1、HBeAg的关系［n(%)］

3 讨论

Dane颗粒(HBV)属嗜肝DNA病毒科, 为部分双链环状DNA。HBeAg是HBV核心抗原裂解的产物, 前S1抗原是乙肝病毒外壳蛋白的一部分, HBV-DNA为乙肝病毒基因。乙肝血清标志物为HBV复制和传染性的检测指标［3］。HBeAg由C基因区编码, 当 HBV-DNA第1896位核苷酸G被A置换从而导致前C区基因出现终止密码子ATG, 导致HBeAg低表达或不表达, 产生HBeAg变异株［4］, 表现为HBeAg阴性,而HBV仍持续复制［5］。有研究证实亚洲平均50% HBeAg阴性的慢性乙肝患者存在前C区突变, 部分患者体内仍有乙肝病毒的复制, 其发生慢性肝炎恶化和重型肝炎的几率较大,因此单以HBeAg是否转阴作为乙肝病毒复制活跃与否的指标是不够的。研究发现, 前S1抗原与HBV-DNA检测率高度相关, 是一项非常重要的病毒复制指标［5］, 因此作为一种新的血清学指标, 在临床上显示出其独特的优势。HBVDNA阳性代表有完整的乙肝病毒颗粒的复制, 在HBeAg阳性患者的检测阳性率达100%, 是衡量乙肝病毒复制有无高低的金标准。

本研究表1的结果与相关文献报道的较相符［3］。在HBeAg阳性的两组乙肝模式(第1、4组)中, PreS1阳性率分别为93.1%和94.4%, HBV-DNA阳性率均为100.0%, PreS1稍低于HBV-DNA, 差异无统计学意义(P＞0.05)。HBeAg总阳性模式组与总阴性模式组的PreS1阳性率分别为93.2%和63.5%,差异有统计学意义(P＜0.01), HBeAg与PreS1和HBV-DNA的总符合率分别为56.2%和69.0%。而HBV-DNA阳性组中, PreS1和HBeAg与其的总符合率分别为72.4%和69.0%。这些结果说明, PreS1和代表乙肝病毒复制指标的HBeAg和HBVDNA有着显著的相关性, PreS1和HBV-DNA在反映乙肝病毒复制方面也有很高的一致性。因此, PreS1是十分重要的乙肝病毒复制指标, 这与资料报道基本相符。

在HBV-DNA阳性组中, HBeAg阳性率为52.9%, 明显低于PreS1的阳性率, 与HBV-DNA的差异更是显著。在HBeAg阴性的第2、5组中, PreS1的阳性检出率分别为69.9%和36.4%, 均高于HBV-DNA的检出率(45.8%和0), 差异有统计学意义(P＜0.01), 而在HBeAg总阴性模式中, HBVDNA的检出率为47.5%, 低于PreS1。HBV-DNA阴性组中PreS1阳性率为52.0%。因此认为PreS1较HBeAg更敏感的反映了乙肝病毒复制的情况。且与HBV-DNA有显著互补性,其可能原因是病毒管状颗粒上存在前S蛋白而不含HBVDNA。因此, 在检测HBeAg阴性的乙肝患者中, PreS1有着特别重要的作用。

乙肝血清标志物具有价格低、简便、快速等特点, 对于了解临床不同类型肝炎患者病毒复制和传染性有一定的意义。HBV-DNA检测可直接反映乙肝病毒复制有无高低, 是判断乙肝患者是否有传染性的金指标, 临床上已广泛开展。其对实验室条件要求苛刻, 而PreS1操作简单, 价格低廉, 在没有条件的时候, 可以选用PreS1作为替代, 在判断乙肝患者感染状态和评价抗病毒疗效上有一定的价值。

综上所述, 乙肝血清标志物联合HBV-DNA以及PreS1检测是乙型肝炎早期诊断和评价疗效的可靠指标。

［1］ 张小宁, 郝晓柯, 余妍, 等.不同血清学标志物与HBV-DNA含量及Pre-S1在诊断乙肝病毒复制中的价值.现代检验医学杂志, 2006, 21(6):48-51.

［2］ 周细国.乙型肝炎病毒感染者血清腺苷脱氨酶的应用价值探讨.中南大学, 2006.

［3］ 刘灿, 翁义锐, 陈永东.乙肝患者HBsAg定量与HBV-DNA及乙肝标志物模式的比较分析.福建医药杂志, 2006, 28(4):124-125.

［4］ 张玉琦, 周秀梅, 丁明权, 等.乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与临床特征的关系.医学临床研究, 2003, 20(9):676-678.

［5］ 吴瑶, 沈云峰, 张玲, 等.腺苷脱氨酶的检测及在肝病中的意义.江汉大学学报(自然科学版), 2003, 31(2):76-77.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.13.023

2014-12-02］

450052 郑州大学第五附属医院肝病科

标志物联合HBV-DNA以及PreS1可作为乙型肝炎早期诊断和评价疗效的可靠指标, 尤其在隐匿性乙型肝炎的诊断方面起到非常重要的作用。