妊娠期高血压患者外周单个核细胞NF－kB活性与血浆五聚素3表达的相关性

章小东，黄文彩，王彩红，郑穗瑾，罗红英，付文金，尹丽明，彭兰芬，曾见芬，刘亮广东医学院附属厚街医院(东莞，523945)

妊娠期高血压(hypertensive disordercomplicating pregnancy，HDCP)是指患者在妊娠期发生血压升高，同时排除原有高血压合并妊娠患者，简称妊高症，常导致流产，严重者造成产妇及围产儿死亡，同时部分患者遗传给胎儿，造成先天性高血压，给患者生存质量带来重要的影响［1］。相关研究统计，妊高症在我国发病率约为9.4%［2］。随着生活水平的不断提高，生活模式现代化及社会老龄化，妊娠期高血压疾病(HDCP)的发病率逐年增加。但其病因和发病机制尚不完全清楚。妊娠期高血压疾病的病因至今不明，给早期诊断和治疗带来困难，如何寻找一种灵敏、特异、准确的早期诊断妊高症的指标，有利于预防妊高症，降低发病率和死亡率。核因子(NF－KB)是一种重要的转录调节因子，是炎症早期的关键调节因子［2］，其与心血管疾病的关系日益得到重视。血浆五聚素3(PTX3)是由血管内皮细胞和巨噬细胞在白细胞介素－1(IL－1)、肿瘤坏死因子(TNF)作用下分泌的组织原型长链pentraxin分子，有一定的心血管保护作用。本研究旨在探讨妊娠期高血压疾病(HDCP)患者外周血单个核细胞(PBMC)核因子－KB(NF－KB)活性与与炎症因子五聚素3(PTX3)水平的相关性，为早期防治妊娠高血压心脏靶器官损害提供实验室指标。

1 资料与方法

1.1 病例选择

选取我院2012年3月～2014年12月收治的妊娠期高血压疾病患者60例作为观察组，其中妊娠期高血压20例，轻度子痫前期20例，重度子痫前期20例 ，年龄25.8±7.0岁，孕38.5±3.5周;选取同期入院正常晚期妊娠妇女20例作为对照组，年龄25.6±7.3岁，孕38.9 ±3.7 周。观察组研究对象均符合中华医学会妇产科分会制定的诊断标准［1］，同时排除心脏、肝肾功能不全，高血脂症，糖尿病和其他器质性疾病者，除外近三个月内有感染者，排除白细胞计数＞10000/μL或＜4000/μL者及不愿参与研究者。同时选取本院入院正常妊娠妇女健康者20例作为正常对照组，术前相关检查均在正常范围。

1.2 观察指标

1.2.1 PBMC的NF-KB活性测定 妊娠高血压患者入院后12 h、健康对照组晨起空腹采集静脉血10mL，置肝素抗凝管。2 h内采用密度梯度离心法分离人PBMC，提取PBMC的核蛋白。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测核蛋白NF－KB活性，ELISA试剂盒由上海蓝基生物公司提供。

1.2.2 血浆PTX3测定 乙二胺四乙酸抗凝管采集HDCP患者空腹及健康对照组晨起空腹外周静脉血2mL，4℃离心后取血浆，分管置于－80℃ 冰箱中待用，采用酶联免疫吸附法(ELISA)，并严格按照试剂盒操作步骤，检测血清PTX3浓度。试剂盒购自上海沪尚生物科技有限公司，由美国GBD有限公司生产。以ELISA法测定NF－KB活性、PTX3等水平。

1.4 统计学分析

应用SPSS17.0统计学软件分析数据，计量资料以均数±标准差表示，采用方差分析检验、pearson直线相关分析比较，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组NF－KB活性和血浆PTX3水平测定，见表1.重度子痫前期患者NF－KB最高，而PTX3最低，组间差异有统计学意义(P＜0.05)。

表1 NF-KB活性和血浆PTX3水平测定Tab.1 Determination of NF-KB and plasma PTX3 level

2.2 两组 NF－KB活性和血浆PTX3水平的相关性，见表2.重度子痫前期，重度子痫前期和妊娠期高血压患者两种指标相关系数分别为0.521，0.366和－0.397，P均小于0.05，差异有统计学意义。

3 讨论

妊娠期高血压(hypertensive disordercomplicating pregnancy，HDCP)是指患者在妊娠期发生血压升高，同时排除原有高血压合并妊娠患者，简称妊高症，常导致流产，严重者造成产妇及围产儿死亡，同时部分患者遗传给胎儿，造成先天性高血压，给患者生存质量带来重要的影响［1，3］。国内目前对妊娠高血压疾病非传统危险因素的转归及发展因素并无报道，而国外研究也只处于起始阶段。对许多炎症因子如白介素6、白介素1及C反应蛋白与妊娠高血压疾病心血管损害的关系国内外已有一定的研究，但多在联合应用对妊娠高血压疾病检测及意义，而对HDCP患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)NF－κB 活性与 PBMC的关系，并与炎症因子五聚素3(pentraxin3，PTX3)作比较均未见报道［4－5］。妊娠期高血压的发病原因和机制目前尚未阐明，相关研究指出，妊高症的发生和发展主要有以下几种学说，如免疫失衡、血流动力学紊乱、氧化应激反应及遗传学说等，Kkadyrov M等［6］研究发现，妊娠早期滋养细胞可侵蚀子宫螺旋动脉，使动脉栓塞，导致胎盘供血不足、组织缺氧，从而发生妊高症。寻找一种在早孕期(10～14周)预测妊高症的方法，是学界的研究热点之一。近年来，非传统危险因素，如微炎症状态等在妊娠期高血压疾病发病中的作用越来越受到重视。研究表明［7］，许多炎症因子，如白介素6、白介素1及C反应蛋白等对心血管具有损害作用。基于此，我们设计了本研究，旨在探讨炎症因子血浆五聚素3在妊高症中的作用及相关机制。

在本研究中，我们检测了外周单个核细胞核因子(NF－KB)水平及TX3水平，结果发现，妊娠高血压患者NF－KB水平明显高于正常人，且两者呈负相关。采用NF－KB相关抑制剂后，TX3水平下降，说明TX3是NF－KB介导的信号通路的下游效应分子。核因子(NF－KB)是一种重要的转录调节因子，静息状态下与其抑制单位(inhibitor of κB，IκB)相结合形成复合体，以无活性状态存在于胞质中。当细胞受到外界刺激时，NF－KB暴露出核定位信号并进入核内，使其具有生物活性。活化的NF－KB可以在转录水平上激活多种与炎症有关的细胞因子、黏附分子，如细胞间黏附分子－1(intercellular adhesion molecule－1，ICAM－1)、E－选择素、血管细胞黏附分子－1(vascular cell adhesion molecule－1，VCAM－1)、白细胞介素(interleukin，IL)－1、IL－8、IL－6、肿瘤坏死因子－α(tumor necrosis factor－α，TNF－α)和环氧合酶－2(cyclooxygenase－2，COX－2)，是炎症早期的关键调节因子［2］，其与心血管疾病的关系日益得到重视。PTX3是由血管内皮细胞和巨噬细胞在白细胞介素－1(IL－1)、肿瘤坏死因子(TNF)作用下分泌的组织原型长链分子，其由颗粒型白细胞、脂肪细胞、内皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞等合成的［8］。Jenny等［9］发现，PTX3 增高与心血管死亡及全因死亡密切相关，为独立于年龄、高血压、糖尿病、高血脂、吸烟、CRP等的危险因素。Latini等［10］以724例急性ST段抬高患者为研究对象，随访观察3个月，发现PTX3的升高水平可以用来预测心梗后心衰及死亡率，并且优于其他心肌标志物如CRP、N末端脑钠肽前体(NT－proBNP)、肌钙蛋白(TnT)、肌酸激酶(CK)。Norata等［11］利用基因敲除模型研究小鼠发现，缺乏PTX3的小鼠更易出现为血管炎症及动脉粥样硬化，从而推断PTX3在动脉粥样硬化过程的免疫应答中起到一定的积极保护作用。这与本研究结果是一致的。

综上所述，PTX3不仅是一种反映血管炎症的炎性标志物，可作为局部血管炎症和心血管系统损伤的标志物［13］，并对妊娠高血压患者具有一定的保护作用，是临床研究的焦点之一。

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