MK在胰腺癌中的表达及其与临床病理及预后的关系

马勤英，姚 俊



MK在胰腺癌中的表达及其与临床病理及预后的关系

马勤英1，姚 俊2

目的 检测Midkine(MK)蛋白在胰腺癌中的表达情况，探讨MK蛋白与胰腺癌临床病理特征及预后之间的关系。方法 收集河南科技大学第三附属医院病理科2007年7月至2012年6月经外科手术切除且病理确诊的胰腺癌及癌旁组织各42例及10例正常胰腺组织，应用免疫组化法检测MK蛋白的表达，并分析其临床意义。结果 在胰腺癌、癌旁组织和正常胰腺中MK蛋白的阳性表达率分别为76.2%(32/42)、11.9%(5/42)、10%(1/10)，各组间表达具有统计学差异(P<0.05)。MK蛋白表达与淋巴结转移(χ2=4.748，P<0.05)及TNM分期(χ2=2.231，P<0.05)之间差异有统计学意义。Kaplan-Meier生存分析显示MK阳性表达组的3 a生存率及中位生存时间均低于阴性表达组，两组生存曲线比较有统计学差异 (P<0.05)。结论 在胰腺癌中MK蛋白的表达增高，且与有无淋巴结转移、临床病理分期及患者的预后相关，而与患者的年龄、性别、肿瘤大小、组织分化程度无关，提示它有可能成为胰腺癌发生的促进因素之一。

胰腺癌；中期因子；生存分析

胰腺癌是胰外分泌部的恶性肿瘤[1]，在消化系统恶性肿瘤中发病率相对少见，但恶性程度高、发展快、预后差。中期因子(midkine，MK)是一种分泌型肝素结合性生长因子[2]，主要在胃癌、神经母细胞瘤等恶性肿瘤中高频率、高强度表达，其在胰腺癌中的表达及其与临床病理特征及预后之间的关系尚不明确，本研究采用免疫组织化学(immunohistochemistray，IHC)方法，对胰腺癌中MK蛋白表达进行检测和分析，并讨论MK与临床病理分期及预后的关系，为胰腺癌的早期诊断、治疗及判断预后提供客观依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集河南科技大学第三附属医院在 2007年7月至2012年6月行手术切除，经病理科诊断明确的病例临床资料与胰腺癌组织、距离肿瘤边缘2 cm的癌旁组织蜡块42例，且手术前未行放疗及化疗。取同时期10例正常胰腺组织作为对照。

1.2 主要试剂 兔抗人Midkine蛋白多克隆抗体购自武汉三鹰生物工程公司(浓缩型，工作浓度1∶100)；兔抗人 MK抗体购自武汉三鹰生物工程公司；免疫组化超敏(streptavidin-perosidase, S-P)试剂盒(产品编号：KIT-9706)，购自武汉三鹰生物科学技术开发公司。

1.3 实验步骤 按照免疫组化超敏(S-P法)试剂盒操作步骤检测42例胰腺癌组织、癌旁组织与10例正常胰腺组织中MK的表达情况。

1.4 生存分析 随访采用门诊、电话及家访等方式进行，截止日期到2014年10月。生存时间以月为计算单位，自手术后第1日至末次随访日或死亡时间。所有患者均接受随访，随访时间2～46个月，中位时间23个月。

1.5 统计学处理 用SPSS 17.0软件包进行统计学分析，组间比较采用χ2检验及Fisher精确概率法检验，相关性分析用Spearman法。生存曲线按Kaplan-Meier分析。以P<0.05作为有显著性差异的统计学标准。

2 结果

2.1 MK在胰腺癌组织中的表达 MK以肿瘤细胞质出现清晰棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞，否则为阴性细胞。MK在胰腺癌组织中阳性表达率明显高于癌旁组织及正常胰腺组织，其差异有统计学意义χ2=15.261，P<0.001)，而MK在癌旁组织及正常胰腺组织中阳性表达率差异无统计学意义(χ2=0.27，P>0.05)，详见表1、图1。

表1 MK蛋白在胰腺组织中的表达 例(%)

图1 MK在胰腺癌组织胞浆表达，箭头所示(SP,×200)

2.2 MK蛋白在胰腺癌中的表达及其与临床病理的关系 MK蛋白的表达与淋巴结的转移情况(χ2=4.748，P<0.029)及TNM分期(χ2=2.231，P<0.05)差异有统计学意义；而与患者的年龄、性别、肿块大小、组织分化程度均差异无统计学意义(P>0.05)。胰腺癌组织中MK蛋白表达与肿瘤的恶性程度有关，见表2。

表2 MK的表达与胰腺癌临床病理之间的关系 例(%)

临床特点n阳性数阴性数χ2P性别2.6700.102 男2622(84.62)4(15.38) 女1610(62.50)6(37.50)年龄0.3650.546 >602619(73.10)7(26.90) ≤601613(81.30)3(19.70)分化程度0.1220.941 高54(80.00)1(20.00) 中2217(77.20)5(22.80) 低1511(73.30)4(26.70)肿块大小0.0080.930 T≤5cm3426(76.50)8(23.50) T>5cm86(75.00)2(25.00)淋巴结转移4.7480.029 有2522(88.00)3(12.00) 无1710(58.80)7(41.20)TNM分级4.7250.030 I+II2111(52.40)10(47.60) III+Ⅳ2119(90.48)2(9.54)

2.3 MK在胰腺癌中的表达与预后 截止2014年10月，随访时间2～46个月，中位时间23个月。42例胰腺癌患者中，随访到40人，失访2人，随访率95.2%，全组共死亡27人。40例胰腺癌患者3 a总生存率为32.5%，Kaplan-Meier生存分析法显示，胰腺癌MK阳性与阴性组患者3 a生存率分别为25.8%、55.6%，MK阴性表达组的3 a生存率及中位生存时间均高于MK阳性表达组，Logrank法对生存曲线进行假设检验显示两组生存曲线比较差异具有统计学意义(P=0.033)。提示MK蛋白可能与胰腺癌的发生呈正相关，见图2。

图2 胰腺癌组织中MK表达生存曲线

3 讨论

1988年Muramatsa等，采用差异杂交法利用视黄酸诱导小鼠胚胎肿瘤细胞系HMl细胞，从cDNA蛋白库中筛选出的MK蛋白，它仅表达于肾脏组织中，这种蛋白被命名为Midkine(MK)。它既是一种血管生成诱导因子，又是一种肝素结合生长因子，MK蛋白含有大量的半胱氨酸和碱性氨基酸，其可以显著地影响和调控肿瘤新生血管的形成。它与PTN(多效营养因子，又称为肝素结合相关因子)的基因组成结构十分相似[3-5]。特别是MK蛋白在多种实体肿瘤如乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌和肺癌以及所有消化系统肿瘤中均呈现出阳性表达或者高表达[6-9]。目前有60%左右胰腺癌患者被确诊时已经出现了远处转移，25%左右的胰腺癌患者为局部晚期，且不能行根治性手术切除术，中位生存期仅为6～9个月[10-11]；可以行手术切除的仅占15%左右，其中位生存期为15个月，5 a生存率为5%左右。研究和探索胰腺癌的早期诊断方法和胰腺癌发生、发展的机制，找到一种与胰腺癌发生、发展密切相关的分子生物学标志物，并使相关的分子生物学标志物能够被运用于胰腺癌的筛查、早期诊断或使其成为治疗靶标是肿瘤研究工作人员最紧迫的任务之一。

本研究免疫组化染色显示在胰腺组织和胰腺癌旁组织中，Midkine多呈阴性表达，少部分为弱阳性， 而MK蛋白在胰腺癌组织中阳性表达率为76.2%(32/42)，明显高于癌旁组织及正常胰腺组织。这与国内外相关报道MK蛋白高表达于各种恶性肿瘤，阳性表达率45%～90%，而在正常组织中不表达或呈现低表达的结果相一致[12-13]。本组生存分析显示胰腺癌MK阳性与阴性组患者3 a生存率分别为25.8%、55.6%，MK阴性表达组的3 a生存率及中位生存时间均高于MK阳性表达组，MK蛋白可能与胰腺癌的发生呈正相关。结果提示MK蛋白可能是胰腺癌蛋白诊断标记物之一，并可能是判断胰腺癌患者预后的风险因子，这需要在以后进一步去验证MK蛋白在胰腺癌的发生发展过程中起作用。因此，MK 在肿瘤演化过程中可能具有直接的作用，检测MK 蛋白表达水平能够对肿瘤的早期诊断、预后、评价疗效和检测复发提供客观依据，故MK 很有可能成为一种新的有价值的肿瘤标记物应用于临床和科研。

[1] Ferlay J,Shin HR,Bray F,et al.Estimates of worldwide burden of cancer in 2008: Globocan 2008[J]. Int J cancer,2010,127(12):2893-2917.

[2] 尚培中,李晓武,蔡大伟,等.Midkine在胰腺癌组织中的表达及其临床意义[J].解放军医药杂志,2013, 25(9):21-24.

[3] Milner PG,Li YS,Hoffman RM,et al.A novel 17 kD heparin-binding growth factor (HBGF-8) in bovine uterus: purification and N-terminal amino acid sequence[J]. Biochem Biophys Res Commun,1989,165(3): 1096-1103.

[4] Rauvala H.An 18-kd heparin-binding protein of developing brain that is distinct from fibroblast growth factors[J].Embo J,1989,8(10): 2933-2941.

[5] Tomomura M,Kadomatsu K,Matsubara S,et al.A retinoic acid-responsive gene,MK,found in the teratocarcinoma system. Heterogeneity of the transcript and the nature of the translation product[J].J Biol Chem,1990,265(18): 10765-10770.

[6] Siegel R,Naishadham D,Jemal A.Cancer statistics,2013[J].CA Cancer J Clin,2013,63(1):11-30.

[7] Li D,Xie K,Wolff R,et al.Pancreatic cancer[J].Lancet,2004,363(9414):1049-1057.

[8]Andrén-Sandberg A,Neoptolemos JP.Resection for pancreatic cancer in the new millennium[J]. Pancreatology, 2002, 2(5):431-439.

[9] Michaud DS.Epidemiolopy of pancreatic cancer[J].Minerva Chir,2004,59(2):99-111.

[10]Jemal A,Bray F,Center MM,et al.Global cancer statistics[J].CA Cancer J Clin,2011,61(2):69-90.

[11]Witkowski ER,Smith JK,Tseng JF.Outcomes following resection of pancreatic cancer[J].J Surg Oncol,2013,107(1):97-103.

[12]Xu Y,Qu X,Zhang X.Midkine positively regulates the proliferation of human gastric cancer cells[J].Cancer Lett,2009,279(2):137-144.

[13]Konishi N,Nakamura M,Nakaoka S,et al.Immunohistochemical analysis of midkine expression in human prostate carcinoma[J].Oncol,1999,57(3):253-257.

Expression of MK in Pancreatic Carcinoma and its Relationship Between Clinical Pathology and Prognosis

MA Qin-ying,YAO Jun

(Third Affiliated Hospital, Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China)

ObjectiveTo detect of Midkine (MK) protein expression in cancer tissues,to investigate the relationship between MK protein and pancreatic cancer patients with clinical pathological characteristics and prognosis.MethodsThe Pathological Department of the Third Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology from July,2007 to June,2012 collected menstrual surgical operation excision and pathological diagnosis of pancreatic cancer tissues. and paracancerous tissues of all 42 cases and 10 cases of normal pancreatic tissue. Immunohistochemistry was used to detect MK protein expression in the comparison. The relationship between the clinical and pathological features with the statistical analysis was performed with pancreatic cancer.ResultsThe positive expressions of MK protein in pancreatic cancer, paracancerous and normal pancreas in rates were 76.2% (32/42) 11.9% (5/42), 10% (1/10), and each group was statistically different (P<0.05).The expression of MK protein was statistically significant difference between lymph node metastasis(χ2=4.748,P<0.05)and TNM stage(χ2=2.231,P<0.05). Kaplan-Meier survival analysis showed the 3 year survival rate of MK positive expression group, and median survival time were lower than the negative expression group. Survival curves of two groups were statistically significant difference (P<0.05).ConclusionIn pancreatic cancer, the expression of MK protein is increased, and the prognosis is relative to lymph node metastasis, clinical pathological stage, regardless of patient age, gender, tumor size, histological differentiation. It shows that MK may be a promoting factor of pancreatic cancer.

pancreatic cancer；midkine protein；survival analysis

2015-04-03

1.河南科技大学第三附属医院肿瘤内科，河南洛阳 471003 2.河南科技大学第一附属医院肿瘤内科，河南洛阳 471003

马勤英(1980-)，女，河南洛阳人，主治医师，从事肿瘤内科临床工作。

姚俊，博士，副主任医师，硕士生导师，E-mail：yaojun74@163.com

R735.9

A

1672-688X(2015)02-0087-03