黑龙江省西瓜细菌性果斑病防治药剂的筛选

贾云鹤　王喜庆　付永凯　尤海波　刘思宇　赵会娟

摘要：为了丰富黑龙江省露地西瓜果斑病的防治药剂和方法，通过平板抑菌试验和种子消毒处理等方法对硫酸链霉素等17种药剂进行筛选。结果表明，在平板抑菌试验中，有噻霉酮等7种药剂的抑菌圈i>20mm，抑菌效果较好；在种子处理试验中筛选出3%双氧水浸种30min和2000mg·L^-1噻霉酮浸种30min抑菌效果较好；双氧水处理种子的发芽率和发芽势为95.6%和12.7mm，噻霉酮处理种子的发芽率和发芽势为97.8%和14mm；噻霉酮和双氧水处理种子的发芽率分别比对照提高22.6%和20.4%，发芽势分别比对照提高47.4%和33.7%。试验筛选出一种新型药剂噻霉酮，对黑龙江省露地西瓜果斑病菌的抑菌效果较好。

关键词：西瓜；黑龙江省；果斑病；病原菌；防治药剂

西瓜细菌性果实腐斑病，又称西瓜果斑病、果腐病（Baeterial Fmit Blotch，简称BFB），百姓俗称阴皮病、尿炕病，是种传细菌性病害，近年来由国外传人中国。该病害发病、传播迅速，危害严重，目前国内外尚没有免疫品种，也缺乏特效的防治药剂。

近年来，黑龙江省西瓜主产区果斑病爆发严重。以黑龙江省西瓜主产区双城市为例，根据作者所在的国家西甜瓜产业技术体系哈尔滨综合试验站（黑龙江省农科院园艺分院西瓜研究室）的调查，双城市2010-2014年果斑病的自然发病率分别为70%、60%、30%、15%、20%。

本试验针对以上情况，对黑龙江地区露地西瓜的果斑病病原菌进行分离、纯化，以分离得到的果斑病病原菌和当地主栽的露地西瓜品种为试材，期待筛选出适合防治黑龙江省西瓜果斑病的有效药剂。

1.材料与方法

1.1黑龙江省露地西瓜果斑病病原菌的分离、纯化

从黑龙江省露地西瓜主产区哈尔滨、双城等地进行病样采集。取样部位为病瓜内表皮（西瓜皮白色的部分）。病原菌的分离纯化方法为平板划线法。

1.2黑龙江省露地西瓜果斑病的防治药剂筛选

1.2.1多种药剂的平板抑菌试验本试验应用的病原菌为双城地区采集、分离的病原菌。应用的药剂包括，1、抗生素5种：72%农用硫酸链霉素粉剂（华北制药）、100万单位兽用硫酸链霉素注射用粉剂（哈尔滨兽药二厂）、90%新植霉素可湿性粉剂（德瑞丰）、2%春雷霉素水剂（华北制药）、6%春雷霉素可湿性粉剂粉剂（山东立邦农化）；2、铜制剂4种：47%加瑞农可湿性粉剂（先正达），33.5%喹啉铜悬浮剂（浙江海正化工）、20%噻菌铜悬浮剂（浙江龙湾化工），53.8%氢氧化铜水分散颗粒（美国杜邦）；3、消毒剂3种：40%福尔马林（广州万从化工）、30%双氧水（山东盛通）、10%次氯酸钠（青岛兴发）；4、酸剂2种：盐酸（新光化工）、乙酸（烟台三和化工）；5、新型药剂3种：噻·硫（中国农科院植保所赵廷昌研究员提供）、溴硝醇（中国农科院蔬菜花卉所王怀松副研究员提供）、噻霉酮（西大华特产品）。共计17种药剂。每种药剂设3个浓度，每个浓度3次重复，清水为对照，进行平板抑菌试验。纸碟为10mm，所以设定抑菌圈直径（从纸碟的圆心开始测量）>20mm为抑菌效果较好的药剂。药剂浓度见表1，每个纸碟上用1000μL移液枪滴加药液1滴（约200μL），数据取3次重复的平均值。

1.2.2种子处理药剂筛选应用的西瓜种子品种为双城当地主栽品种‘帝王花冠（无菌种子：种子浸提液平板培养48h无菌落生长确定为无菌种子），应用的病原菌为双城地区采集、分离的病原菌。l0⁸cfu·mL^-1的菌液浸泡种子1h制备带菌种子，沥水后充分晾干。每个处理30粒种子，每种药剂浸种设3个时间，每个处理3次重复。应用的药剂及其浓度、剂型为：3%双氧水、2000mg·L^-1硫酸链霉素粉剂、2000mg·L^-1噻霉酮粉剂、0.4%福尔马林、2000mg·L^-1氢氧化铜水分散颗粒、2000mg·L^-1春雷霉素粉剂、2000mg·L^-1新植霉素可湿性粉剂。处理后漂洗3次，每次30min，每处理90粒种子加人100mL锥形瓶内加无菌水25mL，重复震荡，离心，沉淀，再加3mL无菌水悬浮，吸取100μL涂板，28℃培养48h观察带菌量，>10个菌落为++++，6-10个菌落为+++，3—5个菌落为++，l～2个为+，0个为一。然后把90粒种子分成3份30粒，浸泡8h，29℃催芽48h，观察48h发芽率和48h发芽势（发芽长度，mm）。数据取3次重复的平均值。

2.结果与分析

2.1黑龙江省露地西瓜果斑病病原菌的分离、纯化

从黑龙江省农科院园艺分院的露地西瓜试验地和黑龙江省高效现代化大农业示范园区（双城）的西瓜地块采集病样，采集部位都为西瓜内果皮。分离出西瓜果斑病病原菌4份，分别为H-hrb-1、H-hrb-2、H-so-1、H-se-2。经过致病性测定，H-hrb-1、H-sc-2对西瓜具有致病性（致病性测定的西瓜材料为园艺分院自育品种‘龙盛喜悦，2个菌株接种后7d西瓜的发病率分别为77%和69%，致病力较强）。以下皆采用H-se-2为试验菌株。

2.2黑龙江省露地西瓜果斑病的防治药剂筛选

2.21多种药剂的平板抑菌试验由图l可以看出，和对照相比，除了噻菌铜和喹啉铜，其他药剂都对果腐病菌有一定的抑制作用，抑菌效果随着药剂浓度的加大而增强。平板抑菌试验筛选出7种抑菌圈直径>20mm的有效药剂及其浓度、剂型为：3%（浓度3）双氧水（抑菌直径26.7mm）、2000mg，L^-1（浓度3）硫酸链霉素粉剂（抑菌直径26.0mm）、2000mg·L^-1（浓度3）噻霉酮（抑菌直径25.7mm）、0.4%（浓度2）福尔马林（抑菌直径25.0m）、2000mg·L^-1（浓度3）氢氧化铜水分散颗粒（抑菌直径24.0mm）、2000mg·L^-1（浓度3）春雷霉素粉剂（抑菌直径23.3mm）、2000mg·L^-1（浓度3）新植霉素可湿性粉剂（抑菌直径22.0mm）。

同一种药剂我们应用了不同的剂型，从上述试验可以看出，硫酸链霉素和春雷霉素粉剂的抑菌效果比注射剂和水剂好。上述7种药剂及其浓度将被应用于后续的种子处理试验。

将上述试验筛选出的各种药剂最佳浓度的抑菌效果进行比较，发现17种药剂和清水对照相比，对果斑病菌的抑菌效果都达到极显著差异。其中3%双氧水、2000mg·L^-1硫酸链霉素粉剂、2000mg·L^-1噻霉酮、0.4%福尔马林、2000 mg·L^-1氢氧化铜水分散颗粒、2000 mg·L^-1春雷霉素粉剂、2000mg·L^-1新植霉素可湿性粉剂这7种药剂及其浓度与其他10种药剂相比，抑菌效果差异达到极显著水平，见图2。

2.2.2种子处理药剂筛选由表2可以看出，和对照相比，7种药剂对果斑病菌都有明显的抑制作用，并且抑菌作用随着处理时间的增加而增强。

从图3和图4可以看出，除了新植霉素、氢氧化铜，其他5种药剂在较高浓度、较长时间下对种子的发芽率和发芽势都没有明显的影响。和对照相比，7种药剂对西瓜种子的发芽率和发芽势都有不同程度的促进作用，双氧水、硫酸链霉素、噻霉酮、福尔马林、春雷霉素5种药剂处理西瓜种子的发芽率提高17.5%～27.6%，发芽势提高9，7%～35.9%。7种药剂中，2000 mg·L^-1噻霉酮处理种子30min、3%双氧水处理种子30min，处理种子的表面和种仁的带菌量都为一；处理种子的发芽率分别为97.8%和95.6%，对照发芽率为75.2%，噻霉酮和双氧水处理种子的发芽率分别比对照提高22.6%和20.4%；处理种子的发芽势分别为14mm和12.7mm，对照发芽势为9.5mm，噻霉酮和双氧水处理种子的发芽势分别比对照提高47.4%和33.7%。可以认为这两种药剂适用于被黑龙江省露地西瓜细菌性果斑病病原菌侵染的西瓜种子处理。

3.结论与讨论

1）分离出黑龙江省露地西瓜果斑病病原菌4份，经过致病性测定，2份对西瓜具有致病性，分别是H-hrb-1、H-sc-2。为了确保平板抑菌试验等后续试验的真实性和准确性，必须对分离的病原菌进行致病性测定。

2）平板抑菌试验及种子处理试验的结果表明：双氧水等7种药剂都对双城地区采集、分离的果斑病病原菌有较好的抑制作用（抑菌圈>20mm）。赵廷昌等研究表明1 000倍的72%农用链霉素和0.4%的福尔马林对果斑病的抑菌效果较好；牛庆伟等研究表明0.4%的福尔马林浸种lh对西瓜果斑病幼苗的果斑病防效达到100%，且无不良影响；何毅等研究表明2%春雷霉素400倍或以2%春雷霉素400倍搭配其他杀菌剂使用防治西瓜嫁接苗果斑病效果好。本研究结果与前人研究结果大体相似，但需要进一步在幼苗期果斑病的发病率上验证。此外，筛选出了新型药剂噻霉酮，噻霉酮不但抑菌效果较好，还对种子的发芽率和发芽势有促进作用，与对照药剂相比较发芽率和发芽势分别提高了22.6%和47.4%。

3）带菌种子经过药剂处理后，播种长出幼苗的发病情况如何还有待进一步研究，噻霉酮对西瓜幼苗果斑病及成株期果斑病的防治效果还有待进一步验证。