扶正舒肝颗粒的制备及质量标准研究

饶双超 程丽娟 万富贵

慢性乙型肝炎是严重危害人民健康的一种常见传染病，目前我国约有慢性肝炎患者有2 300 万，尽管采用了各种治疗手段，但很多问题无根本性突破。扶正舒肝颗粒的处方来源于我院肝病科多年应用的协定方，具有扶正祛邪，舒肝解毒，散瘀止痛的功能，主治慢性乙型肝炎属久病正气不足，肝郁血瘀，症见头晕乏力，胁肋胀痛，舌质淡或暗，脉弦。经在我院临床应用观察表明，本品能显著改善患者的临床症状，并且观察到大部分患者HBV-DNA 病毒数量显著下降，其中三例乙肝病毒复制患者病毒转阴。

1 材料与方法

1.1 实验材料 赤芍药300 g、叶下珠300 g、苦参300 g、丹参300 g、炙黄芪300 g、灵芝200 g、甘草100 g共制成颗粒1 000 g。

1.2 方法 利用多功能提取器水煮醇沉的方法提取分离，采用正交试验确定最佳提取工艺参数，薄层色谱法鉴别苦参，HPLC 法测定芍药苷含量。

2 结果

2.1 制备

2.1.1 加水煎煮时提取参数的确定:由于本处方中药材的活性成分水溶性较好，能够用水提醇沉法进行提取分离［1］。经预试验考察水煮时间、次数及加水量三因素，按处方量药材，置多功能提取器内，照正交表安排试验。将煎煮液合并、滤过、滤液浓缩至相对密度约1.1(50 ～60℃)，加入70%量的乙醇，静置过夜，取上清液回收乙醇后浓缩至相对密度约1.3(50 ～60℃)的稠膏，烘干，称重。按药典2010 年版白芍药材中芍药苷的含量测定方法，测定干膏中芍药苷(C23H28O11)的含量，将干膏中芍药苷(C23H28O11)的含量乘以干膏总量得提取芍药苷的总量，再除以计划颗粒量1 000得到每克颗粒中芍药苷的含量，并对此数据进行考核。

2.1.2 水煮因素水平表 见表1。

表1 因素水平表

2.1.3 正交试验:根据因素水平，选择L9(34)表，去掉第3 列安排试验，以干膏重量和芍药苷含量为考核指标。以干膏量为考核指标时，A、B、C 三因素均能影响，其出膏量以A2B3C3 为最佳组合。仔细分析因素B 时，分别发现煮2 次和3 次只隔2.0，平均每次只相差0.67(g)，可知在此条件下，水煮2 次和水煮3 次几差别微小。以芍药苷含量为考核指标时，最佳组合为A3B2C3，同A2 和A3 差别不大，(6.832 －6.577)/3 =0.085(mg)。综合以上三个因素的试验结果，从确保制剂质量和节约资源综合分析，确定最佳工艺条件为A2B2C3，即第1 次1.5 h 第2 次1 h，共煮2 次，每次用水为12 倍量。见表2。

表2 L9(34)正交试验安排及数据表

2.1.4 中试研究:为验证工艺的可行性，以处方量的10 倍中试了三批。见表3。

表3 中试研究

2.1.5 根据以上试验结果确定制备工艺为 按处方称取经检验合格的药材饮片，置多功能提取器内，加水(12 倍药材重量)，第1 次煎煮1.5 h，第2 次煎煮1 h。将煎液合并、滤过、滤液浓缩至相对密度约1.1(50 ～60℃)，加70%量的乙醇，静置过夜，取上清液回收乙醇，浓缩至相对密度1.3(50 ～60℃)的稠膏。将稠膏:糊精:甜菊甙(2∶10∶0.12)混匀，以75%乙醇为湿润剂和粘合剂，制粒，干燥，整粒，包装。

2.2 质量标准

2.2.1 性状:本品为棕黄色或黄褐色的颗粒;气微香，味甜、微苦。

2.2.2 检查:应符合中国药典2010 年版一部附录IC颗粒剂项下各项有关规定。

2.2.3 鉴别:取本品10 g，研细，加氯仿20 ml 与氨水5 ml，超声处理25 min，过滤后将滤液蒸干，用1 ml 氯仿溶解残渣，作为供试液。按供试液的方法，制备无苦参的阴性对照液。另取氧化苦参碱标准品，用乙醇溶解制成0.5 mg/ml 的溶液作为标准对照液。吸取供试液、标准对照、液阴性对照液各2 μl，分别点于同一用2%NaOH 溶液制备的硅胶G 薄层板上，以正丁醇:乙酸乙酯:氨水(4∶5∶1)展开，晾干后喷稀碘化铋钾溶液。供试液色谱中，在与标准对照液相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰［2，3］。见图1。

2.2.4 含量测定［4，5］:照高效液相色谱法(2010 年版中国药典一部附录VI)

2.2.4.1 仪器与试剂:LC-10TvpLC-10T 高效液相色谱仪，Clarify 色谱工作站，FS-1200N 型超声处理器(1200W，20KHZ;上海生析超声仪器有限公司);ZORBAX Eclipse XDB-C18 色谱柱，柱效以芍药苷计均不小于4 000;乙腈试剂为色谱纯，二次重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。芍药苷(中国药品生物制品检定所，批号为130736-201327)。

2.2.4.2 色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈:水(13∶87)为流动相，检测波长为230 nm;理论板数按芍药苷计算应不低于4 000。

图1 苦参薄层色谱鉴别

2.2.4.3 供试液制备:取适量的扶正舒肝颗粒，研细，精密称定0.2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，密塞，称定重量，超声处理(1 200 W，20 kHz)25 min，用稀乙醇补足减失的重量，放冷后，离心，将上清液用微孔滤膜过滤，即得。

2.2.4.4 阴性对照液制备:按供试液制备方法，制备无赤芍药材的阴性对照液。

2.2.4.5 标准对照液制备:精密称取用P2O5减压干燥12 h 后的芍药苷标准品适量，以稀乙醇制成10 μg/ml的溶液。

2.2.4.6 测定法:分别精密吸取供试液、标准对照液、阴性对照液各20 μl，注入液相色谱仪，测定。见图2。

图2 芍药苷标准曲线图

2.2.5 线性关系考察 精密称定芍药苷标准品适量加稀乙醇溶解制成50.150 μg/ml 对照液，并精密吸取1、4、8、13、16、20 μl 分别进样，按色谱条件测定，以峰面积对进样浓度进行线性回归，得回归方程为:Y =741389.9X+369.3(r =0.9997)。结果表明:芍药苷在0.050 ～1.002 μg 的范围内线性关系良好。见表4、图3。

表4 线性关系考察

图3 样品HPLC 图谱

2.2.6 精密度试验:精密吸取对照液16 μl，按色谱条件连续进样5 次，结果表明该方法的精密度良好，相对标准偏差为0.08%。见表5。

表5 精密度试验

2.2.7 稳定性试验:将同一批样品(批号140208)溶液室温避光保存，每隔2 h 测定1 次峰面积。结果表明:样品溶液在24 h 稳定性良好，相对标准偏差为0.24%。见表6。

表6 稳定性试验

2.2.8 重现性试验:取同一批样品(批号140208)5份，进行含量测定。结果表明本方法的重现性较好，相对标准偏差为0.44%。见表7。

表7 重现性试验

2.2.9 加样回收试验:按含量测定法，先测定样品中芍药苷含量，然后在样品中定量加入芍药苷，再测定芍药苷总量，计算回收率，结果平均回收率为98.89%，相对标准偏差为1.36%。见表8。

表8 加样回收试验

3 讨论

在本制剂处方中苦参为臣药，主要含有生物碱类、黄酮类，其他还含有皂苷类、醌类等。在质量标准研究中，采用苦参对照药材作为对照，经过多批样品的试验表明:采用苦参对照药材作为对照来鉴别样品中苦参的方法稳定可靠，且苦参阴性样品无干扰，故在质量标准中采用苦参对照药材作为对照;另外，经过试验表明:采用氯仿提取苦参的效果较好，阴性样品无干扰，重现性考察较好。在开始的研究中，以正丁醇-无水乙醇-氨水(5∶2∶2)为展开剂展开，取出晾干后，喷稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与标准对照品相应的位置上，显相同颜色斑点，但是Rf 值太大，后将展开剂改为正丁醇-乙酸乙酯-氨水(4∶5∶1)，结果比较理想。

1 王芳，郑琰，谈静，等.调肝止痛胶囊提取工艺研究.中药与临床，2013，4:14-17.

2 刘效栓，李喜香，张小华，等.伤科洁肤液质量标准研究.中国实验方剂学杂志，2013，19:104-107.

3 周俊，吴晓敏，付宜和.止痢宁片质量标准研究.中国药师，2013，16:1789-1791.

4 章剑军.HPLC 法测定盆炎净洗剂中芍药苷的含量.海峡药学，2014，26:66-68.

5 陶子甜，刘丰林，杨娜.降糖通络片的质量标准研究.中医研究，2013，26:67-70.