放养与笼养的太行鸡新城疫与禽流感免疫抗体监测

王学静，陈立功，魏忠华，梁变金，臧素敏，刘聚祥

（1.河北省畜牧兽医研究所，河北保定071000；2.河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站，河北保定071001；3.河北省赞皇天然农产品开发有限公司，河北赞皇051230；4.河北农业大学动物科技学院，河北保定071001）

放养与笼养的太行鸡新城疫与禽流感免疫抗体监测

王学静1，陈立功2，魏忠华1，梁变金3，臧素敏4，刘聚祥2

（1.河北省畜牧兽医研究所，河北保定071000；2.河北农业大学动物医学院/农业部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站，河北保定071001；3.河北省赞皇天然农产品开发有限公司，河北赞皇051230；4.河北农业大学动物科技学院，河北保定071001）

新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒 (Newcastle disease virus，NDV)引起的一种急性、高度接触性传染病，被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病，曾屡次形成世界范围的大流行，给养禽业造成巨大损失。禽流感(Avian influenza，AI)是由A型流感病毒所引起的各种家禽及野生禽类的感染和/或疾病综合征。禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)属于正黏病毒科、A型流感病毒属，根据病毒表面糖蛋白血凝素蛋白(Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)的抗原性不同，可将AIV分为不同的亚型，目前已发现有16种HA亚型和9种NA亚型。根据AIV致病性不同可将AI分为高致病性、中致病性和非致病性AI三类：家禽感染AI病毒后，有的不表现明显的症状，有的表现为呼吸道感染和产蛋严重下降，严重者甚至引起全身性感染，导致100%死亡。根据静脉接种致病指数（IVPI）将AIV划分为高致病性禽流感病毒 (Highly pathogenic avian influenza virus，HPAIV)、低致病性禽流感病毒 (Lowly pathogenic avian influenza virus，LPAIV)和无致病性禽流感病毒 (Non-pathogenic avian influenza virus，NPAIV)。目前所分离到的HPAIV主要是H5和H7亚型，特别是由H5N1亚型毒株引起的AI，家禽的发病率和死亡率都很高，危害巨大。从2004年起，《中华人民共和国动物防疫法》规定对HPAI实行强制免疫政策，这是预防、控制HPAI流行的重要举措。HA是AIV的主要保护性抗原，可以诱导产生中和抗体，保护免疫动物不出现临床症状和死亡，这些抗体在体内的保护性具有HA亚型特异性，而且保护效力可持续35周以上。因此，中和抗体可以作为鸡群抗AIV抗体水平及总体免疫水平的参考指标，在生产上可以通过监测鸡群抗AIV的中和抗体水平来制定合理的免疫程序，以达到有效预防控制AI的目的。

笔者对放养与笼养的太行鸡血清中的ND抗体、H5、H9亚型AIV血凝素抗体进行了监测，以期为太行鸡ND、AI防控工作提供有益的参考。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1试验动物及血清

选取同批次放养和笼养的太行鸡，分别于84日龄和126日龄采集抗凝血，析出血清用于抗体水平监测，每批次放养与笼养鸡各60只，公母各半。

1.1.2免疫程序

60～115日龄的太行鸡免疫程序见表1。

表1 试验太行鸡免疫程序

1.1.3抗体监测试剂

鸡新城疫血凝抑制试验抗原 （批号: 20140116）和鸡新城疫血凝抑制试验阳性血清（批号:20130904）为青岛易邦生物工程有限公司生产。禽流感病毒H5（Re-4）亚型HI试验用抗原（批号:2013001）及阳性血清（批号:2013001）；禽流感 H5（Re-6）亚型 HI试验用 （批号: 2013003）抗原及阳性血清（批号:2013002）；禽流感病毒H9亚型HI试验用抗原（批号:2013001）及阳性血清（批号:2013001），均为哈尔滨维科生物技术开发公司生产。无菌采取健康公鸡血并用肝素抗凝，按常规制备1%红细胞悬液，4℃保存备用。

1.2方法

1.2.1血凝抑制(Hemagglutination-inhibition,HI)试验

所有血清经56℃灭活30分钟，分别参照《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）、《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T 18936-2003)规定的微量法，采用HI试验进行血清中ND抗体、禽流感免疫抗体检测。

1.2.2判定标准

以能完全抑制4个单位抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度，即血清效价。血清效价的判断标准，HI抗体效价≥4 log2为抗体阳性，＜4log2为抗体阴性。

2 结果与分析（详见表2）

2.1 ND抗体监测结果

84日龄时，放养和笼养太行鸡的ND抗体变异系数分别为5.47%、4.64%，平均滴度分别为9.42 log2、9.75 log2。126日龄时，放养和笼养太行鸡的ND抗体变异系数分别为11.76%、10.73%，平均滴度分别为 8.50 log2、9.00 log2。综合变异系数、滴度范围和平均滴度考虑，笼养的太行鸡的ND免疫抗体水平高于放养的太行鸡。

2.2 H9亚型禽流感抗体监测结果

84日龄时，放养和笼养太行鸡的H9亚型禽流感抗体变异系数分别为2.91%、3.96%，平均滴度分别为9.92 log2、9.83 log2。126日龄时，放养和笼养太行鸡的H9亚型禽流感抗体变异系数分别为2.91 %、4.94%，平均滴度分别为9.92 log2、9.69 log2。随着免疫时间的延长，H9亚型禽流感免疫抗体水平下降不明显。综合变异系数、滴度范围和平均滴度考虑，放养的太行鸡的H9亚型禽流感免疫抗体水平高于笼养的太行鸡。

2.3 H5亚型（Re-4）禽流感抗体监测结果

表2 太行鸡抗体检测结果

84日龄时，放养和笼养太行鸡的 H5亚型（Re-4）禽流感抗体变异系数分别为9.36%、12.16 %，平均滴度分别为9.25log2、9.17log2。126日龄时，放养和笼养太行鸡的H5亚型（Re-4）禽流感抗体变异系数分别为11.58%、17.30%，平均滴度分别为7.67log2、7.00log2。随着免疫时间的延长，H5亚型（Re-4）禽流感免疫抗体水平显著下降。综合变异系数、滴度范围和平均滴度考虑，放养的太行鸡的H5亚型（Re-4）禽流感免疫抗体水平高于笼养的太行鸡。

2.4 H5亚型（Re-6）禽流感抗体监测结果

84日龄时，放养和笼养太行鸡的 H5亚型（Re-6）禽流感抗体变异系数分别为 27.63%、36.07%，平均滴度分别为6.75log2、6.42log2。126日龄时，放养和笼养太行鸡的H5亚型（Re-6）禽流感抗体变异系数分别为26.65%、45.53%，平均滴度分别为4.33 log2、5.44log2。随着免疫时间的延长，H5亚型（Re-6）禽流感免疫抗体水平显著下降，有的个体抗体呈阴性。综合变异系数、滴度范围和平均滴度考虑，放养的太行鸡的H5亚型（Re-6）禽流感免疫抗体水平高于笼养的太行鸡。

3 讨论

目前，禽流感和新城疫仍然是威胁我国养禽业的两种重大疫病。疫苗免疫接种是我国目前预防和控制禽类两种重大疫病的措施之一。通过对新城疫和禽流感疫苗免疫产生的抗体进行监测，根据免疫抗体水平，确定鸡群合理的加强免疫或补免时间，从根本上消除鸡群免疫保护空白期，确保鸡群有效免疫保护率最高。

两次监测结果表明，放养、笼养太行鸡的ND和H9亚型禽流感免疫抗体平均滴在8 log2以上，抗体变异系数均在20%以内，ND和H9亚型禽流感免疫接种效果较好。

两次监测结果表明，在接种疫苗后2周和8周，放养与笼养太行鸡的H5亚型（Re-4）禽流感免疫抗体平均滴度分别在9 log2以上、7 log2以上，抗体变异系数均在20%以内，H5亚型（Re-4）禽流感免疫接种效果较好。

两次监测结果表明，在接种疫苗后2周和8周，放养与笼养太行鸡的H5亚型（Re-6）禽流感免疫抗体平均滴度分别在6 log2以上、4 log2以上，但抗体变异系数均高于20%，H5亚型（Re-6）禽流感免疫接种效果不理想，且发现有的个体H5亚型（Re-6）禽流感免疫抗体为阴性。因此，监测的太行鸡存在一定的禽流感隐患，必须尽早加强免疫或补免，才有可能抵御野毒感染。

此外，抗体监测结果发现，笼养的太行鸡的ND免疫抗体水平高于放养的太行鸡；放养的太行鸡的H9亚型、H5亚型禽流感免疫抗体水平高于笼养的太行鸡。不同饲养模式的太行鸡的ND免疫抗体和禽流感免疫抗体水平比较结果不一致，原因有待于进一步调查。

生态放养鸡肠道菌群特性研究（13226627）；现代农业产业技术体系建设专项基金资助；河北省现代农业产业技术体系蛋鸡产业创新团队专项资金资助。

器官性能一定程度都存在改善效果，尤其对屠宰性能指数效果最好,屠宰率和全净膛率分别提高2.04%和3.89%。；与使用抗生素组比较，差异不显著，但在一定程度上表现出较好的优势。试验中添加绿色添加剂益生素、酶制剂和酸化剂的Ⅱ组、Ⅲ组都有改善AA肉鸡生产性能、屠宰性能、免疫性能的作用，但0.46%益生素+2%酶制剂+0.45%酸化剂组合使用综合效果最好。为了适应人们对绿色食品的需要，同时减少抗生素在肉仔鸡饲料中的应用，0.46%益生素+2%酶制剂+0.45%酸化剂组合在肉仔鸡生产中应用非常必要，并且值得推广。