平菇粗多糖提取方法及抗氧化活力的研究*

谢美华，宋信信，贾 丹，包刘媛，杨海艳*

(1.楚雄师范学院化学与生命科学学院,云南 楚雄 675000;2.云南省高校应用生物学重点实验室,云南 楚雄 675000)

平菇粗多糖提取方法及抗氧化活力的研究*

谢美华1，2，宋信信2，贾 丹2，包刘媛1，杨海艳1，2*

(1.楚雄师范学院化学与生命科学学院,云南 楚雄 675000;2.云南省高校应用生物学重点实验室,云南 楚雄 675000)

采用水提法,通过单因素和正交试验，对提平菇粗多糖的最佳方法进行了筛选，并采用DPPH法对其活力进行了测定。结果表明：提取平菇粗多糖最佳方法为微波法。微波6min、料液比1∶45，提取次数2次，粗多糖的得率为155.05mg/g。当平菇粗多糖溶液浓度为2.25 mg/mL时，抗氧化活性为92.49%，且提取液中粗多糖的含量与抗氧化活性成正比。

平菇;粗多糖;抗氧化活性;提取方法

平菇(Pleurotusostreatus)，学名侧耳,属伞菌目、侧耳科、侧耳属的一类外生菌根菌，目前已在全世界范围内广泛人工栽培。平菇含有丰富的营养物质，平菇中的多糖对癌细胞具有很强的抑制作用，能增强机体的免疫功能[1]，还具有明显的降血糖、降血脂、抗衰老、护肝等作用[2-3]。有研究表明，每100 g平菇干品中含有多糖类57.6～81.8mg，其是获得多糖的好材料[4]。如何高效地提取平菇中的多糖用于药用资源的开发，使平菇这一资源更好的开发的利用呢？为此，本研究采用单因素和正交试验法优选平菇多糖提取工艺，并利用DPPH法(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)对其多糖活性进行了测定，以期能找出一种高效的提取平菇多糖的方法。

1.材料与方法

1.1材料

1.1.1材料 平菇，于2013年9月购买自云南省楚雄市绿农食用菌公司。

1.1.2主要试剂与仪器

DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，日本进口原装TCI，购买自上海如吉生物科技发展有限公司)。

紫外可见分光光度计(上海谱元)，离心机(美国Thermo)，水浴锅(金坛市晶玻实验仪器厂)，电子天平(奥豪斯)，微波炉(格兰仕)，小型植物粉碎机(长沙市常宏制药机械设备厂)，电热鼓风干燥箱(上海跃进医疗器械厂)。

1.2方法

1.2.1材料的预处理

将采集来的平菇菌子实体洗净，用蒸馏水冲洗，切片，放入干燥箱中，将干燥好的平菇放入粉碎机中粉碎过40目筛。

1.2.2提取平菇粗多糖方法的筛选

称取三份0.5g的平菇菌子实体粉末→以水为提取剂，固定料液比1∶20(g/mL)。分别采用微波5min、热水浸提2h、超声波20min三种提取方法→离心取上清液→加活性炭去色素→抽滤后取滤液→sevage法除蛋白(加入氯仿∶正丁醇=4∶1)→离心(取上层) →平菇菌粗多糖。每个处理设三个重复。

1.2.3正交试验优选最佳提取工艺

通过1.2.2的筛选，选出最佳的提取方法。然后采用L9(33-)正交设计进行正交，研究不同的微波时间、料液比和提取次数三个因素对平菇菌粗多糖提取率的影响，因素与水平设计见表1。每个处理设三个重复试验。

表1 因素与水平

1.2.4数据测量

1.2.4.1平菇菌粗多糖的测定，采用硫酸-蒽酮比色法[5]

1.2.4.2绘制葡萄糖标准曲线

以葡萄糖浓度X为横坐标(μg/ml)、吸光度Y为纵坐标，绘制葡萄糖的标准曲线，进行线性回归。

1.3不同浓度的平菇的抗氧化能力测定，DPPH 法[6]

将Vc配成0.01，0.03，0.05，0.07，0.09，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mmol/L的浓液作为对照试验。所有测定重复操作3次，取平均值。

表2 DPPH试验加样表

1.4数据处理

采用SPSS Statistics 16.0进行数据分析，Excel作图。

2.结果与分析

2.1单因素法筛选提取平菇粗多糖最佳方法

分别用微波法、热水浸提法、超声波法提取平菇粗多糖，试验结果表明，提取效率最高的是微波法，其次是超声波提取法，最差的是热水浸提法(表3)。

表3 三种提取方法提取平菇多糖的结果比较

2.2正交试验结果

2.2.1根据2.1单因素方法筛选结果，采用热水浸提法进行正交试验，结果如表4所示，根据极差判断，3个因素对平菇的多糖得率的影响大小依次为料液比>提取次数>微波时间。通过对试验数据进行直观分析，最佳提取方法是A3B2C2，即微波6min、料液比1∶45，提取次数2次。从表5的方差分析可以看出，在本试验所研究的范围内,料液比对提取平菇粗多糖得率有极显著地影响，料液比为1∶30 时多糖的提取率(Mean±SE)为126.62±7.00，料液比为1∶45 时多糖的提取率为142.93±4.41，料液比为1∶60 时多糖的提取率为111.03±4.69。微波时间和提取次数对粗多糖得率没有明显的影响。

表4 正交试验结果

表5 平菇提取粗多糖正交试验方差分析表

2.2.2最佳提取条件的验证试验:为了验证正交试验优选的平菇粗多糖最佳提取工艺的稳定性，每组称取原料粉0.5g，做3组平行实验，每组3个重复。试验结果表明，试验工艺重复性较好，粗多糖得率平均为157.21 ±7.21(mg/g)，试验的重复性较好。

2.3平菇粗多糖的活力测定

试验结果表明，随着平菇粗多糖浓度的提高，抗氧化抑制率也随之提高。平菇粗多糖质量浓度为2.25 mg/mL时的抑制率与Vc质量浓度为0.035mg/mL相当，说明平菇粗多糖存在一定的抗氧化活性(见表6)。

表6 平菇粗多糖与Vc抗氧化抑制率比较

3.讨论与结论

平菇在世界范围内已广泛栽培，作为一种人工可栽培的食用菌，与野生食用菌相比，它有生长季节不受季节控制，易培养和价格相对低廉的优点。目前平菇主要被加工成平菇罐头、平菇脯、油炸平菇、平菇蜜饯等产品，这些产品的科技含量较低，依然处于产业链的最低端。随着近年来食用菌保健功能的进一步开发，以食用菌多糖为主要原料的药品、保健品等精深加工产品将有广阔的发展空间。本课题的研究结果表明，微波法可作为平菇多糖的提取工艺，其操作简单，成本较低；平菇多糖具有一定体外抗氧化活性。

[1]周国英，兰贵红，何小燕.食用菌多糖研究开发与进展[J].实用预防医学,2004,(1):55—56.

[2] Kathatun K，Mahtab H，Khanam PA，etal.Oyster Pleumtus ostreatusreduced blood glucose and cholesterol in diabetic subjects[J].MymensinghMedJ,2007,(16):94—99．

[3]Yang B K，Kim D H，Jeong S C，etal.Hypoglycemic effect of a Lentinus edodes exo-polymer produced from a submerged mycelial culture[J]．BiosciBiotechnelBiochem,2002,66(5):937—942．

[4]张敏,陈瑞战,陈瑞平,等.平菇多糖提取方法的比较[J].吉林大学学报(理学版),2011,49(5):1141—1149.

[5]陈杨琼,伍春莲,侯怡铃,等.松乳菇多糖含量的苯酚硫酸法检测研究[J].西华师范大学学报(自然科学版),2012,33(2):135—138.

[6]倪国柱，温琳豫，王健，等.DPPH法测定新疆磨合烟的抗氧化活性[J]．广州化工，2012，4(22)：104—106.

(责任编辑 徐成东)

Study on Crude Polysaccharide Extraction Method and Antioxidant Capacity of Pleurotus Astreatus

XIE Meihua1，2, SONG Xinxin2, JIA Dan2, BAO Liuyuan2& YANG Haiyan1，2

(1.SchoolofChemistryandLifeScience,ChuxiongNormalUniversity,Chuxiong, 675000,YunnanProvince;2.KeyUniversityAppliedBiologyLaboratoryofYunnan,Chuxiong, 675000,YunnanProvince)

Take water extraction method, screening the best condition for extract crude polysaccharide inPleurotusostreatuswas determine by single factor and orthogonal test. DPPH assay method was used to determine the antioxidant activities of extraction. The results showed that: (1)The preferred way for extraction crude polysaccharide ofPleurotusostreatuswas microwave method. The best condition for extraction crude polysaccharide ofPleurotusostreatuswas：Microwave extraction 6min, the ratio of material to liquid was 1:45,extraction 2 times,the extraction yield was 155.05mg/g.(2)The antioxidant properties was 92.49% when solution concentration of crude polysaccharide inPleurotusostreatuswas 2.25mg/mL，and the content of crude polysaccharide was directly proportional to the antioxidant activities．

Pleurotusostreatus; crude polysaccharide; antioxidant capacity; extraction method

2015 - 03 - 12

谢美华(1981—)，女，实验师，研究方向为植物病理学与微生物。

杨海艳(1979—)，女，高级实验师，博士，主要从事植物病理学研究。

TQ281

A

1671 - 7406(2015)06 - 0018 - 04