猪链球菌分离鉴定及药敏试验

李艳梅

(青海省西宁市畜牧兽医站，810003)

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料：无菌采集青海省某猪场病死猪的肠系膜淋巴结、心包液、肝脏、肺脏、心血及病变关节液。

1.1.2 主要试剂及仪器：普通琼脂、鲜血琼脂、血清肉汤培养基、麦康凯琼脂、匹克氏增菌液按常规方法制备；罗红霉素、红霉素、万古霉素、克林霉素、环丙沙星、氨苄西林、头孢拉定、链霉素、青霉素钾、复方新诺明、利福平、庆大霉素、氨苄青霉素等13种药敏纸片。

1.1.3 实验动物：健康小白鼠。

1.2 方法

1.2.1 细菌分离：将病料分别涂片，革兰氏染色镜检，然后无菌采取病料于鲜血琼脂平板上划线分离，37℃有氧条件培养24h，可疑菌落接种于匹克氏增菌液，37℃培养24h，挑取单个菌落经涂片、染色、镜检，证实为纯培养物，将其接种于鲜血琼脂斜面上进行培养，得到纯培养物。

1.2.2 形态结构、染色特点与运动性检查按常规方法进行。

1.2.3 培养特性试验：分离菌接种于普通琼脂平板、血清肉汤、鲜血琼脂平板和麦康凯琼脂平板等培养基中，37℃有氧条件下培养观察其生长表现。同时另一组置于厌氧罐中37℃培养观察其生长表现。

1.2.4 生化试验：用分离菌纯培养物进行甘露醇、葡萄糖、蔗糖、棉实糖、山梨醇、水杨苷、菊糖、乳糖、马尿酸钠试验。

1.2.5 动物致病性试验：选用约20g重的健康小白鼠5只，腹腔接种分离菌血清肉汤培养物0.2mL，另设5只分别腹腔注射0.2mL血清肉汤作对照。隔离饲养注射后的小白鼠，并察其发病及死亡情况。

1.3 纸片扩散法药敏试验：将纯菌株接种至马丁琼脂斜面，37℃培养24h后用无菌生理盐水洗下并稀释菌液浓度约为200万个/mL；用灭菌棉拭子蘸取菌液均匀涂在琼脂平板上，待平板稍干后用镊子将各种抗生素药敏纸片平置于平板上，轻压使其紧贴平板表面。将贴好纸片的平板于37℃培养24h后观察结果。

2 结果与分析

2.1 细菌鉴定：①细菌分离结果：从病死猪肠系膜淋巴结、心血、肝、肺等均分离到一株具有α 溶血的纯细菌培养物；②形态结构和染色特点：分离菌为革兰氏阳性，菌体呈圆形，多呈双球形或短链状，液体培养物中链较长，通常由8-15个球菌排成链状，无荚膜、无鞭毛、无芽胞，无运动性，无粘液层，无两极着色现象。③培养特性：分离菌为兼性厌氧菌，见表1；④生化试验结果，见表2，从表2可知分离细菌的生化反应结果均符合猪链球菌的生化特性，表明分离菌是猪链球菌；⑤分离菌对小白鼠致病性：小白鼠于感染不到24h全部死亡，剖检可见脾、肝、肾肿大，胸腔积液，用心血和胸积液涂片革兰氏染色镜检，发现有大量单个、成对或短链革兰氏阳性球菌；对照组小白鼠未见异常。

表1 培养特性

表2 分离菌生化试验

2.2 药敏试验结果：分离菌株对罗红霉素、利福平、头孢拉定、氨苄西林、万古霉素高度敏感；对氨苄青霉素和青霉素钾中度敏感；对克林霉素、环丙沙星、复方新诺明、红霉素、庆大霉素及链霉素不敏感。

3 结论与讨论

3.1 通过菌体（落）形态、染色特点、培养特性、生化试验、动物致病性试验等系统鉴定，确定为猪链球菌Ⅱ型。

3.2 猪链球菌有Ⅰ、Ⅱ两个型（Ⅱ型最多见），可引发猪脑膜炎、肺炎、关节炎、心内膜炎及败血症；理论上有诸多药物可治疗猪链球菌病,然而，从药敏试验和临床治疗中可知常用药物的敏感性很低，多呈耐药性；主要与临床上抗菌药物的普遍应用和滥用,导致病原菌的耐药性日趋增强有关。此外，猪链球菌是一种人畜共患的传染性疾病，养殖人员和兽医等在接触病猪、处理污染物和剖检病死猪时应注意自身的防护，防止被感染。

3.3 日常要加强饲养管理和环境卫生消毒工作；对发病猪隔离，采用氨苄西林和利福平配合治疗，使用药物治疗时避免长期使用同一种药物，可几种药物交替使用。

[1]付梦玉,林丽萍,郭道初,等.一株临床2型猪链球菌的分离鉴定及生物学特性分析[J].中国畜牧兽医,2015,07.

[2]冀贞阳.“药敏试验”选药治疗猪链球菌病[J].小康生活,2005,10:33.