热毒宁注射液超滤过程色泽控制研究

朱兆林 丁 岗,2

（1.南京中医药大学，江苏 南京210029；2.江苏康缘现代中药研究院，江苏南京211100）

0 引言

热毒宁注射液是江苏康缘药业股份有限公司研制的原国家二类新药，处方中含有金银花、青蒿、栀子3味药材，用于治疗上呼吸道感染（外感风热症）所致的高热等病症[1]。

热毒宁注射液超滤前后的药液是含多种成分的混合物，既含有有效成分，又含有无效杂质，如不尽量去除杂质，会影响制剂的质量和稳定性。因此，在热毒宁注射液生产过程中应用了两级膜超滤及膜过滤的工艺对药液进行精制。

王永香[2]等在聚砜超滤膜对热毒宁注射液脱炭液的纯化工艺研究中得出，聚砜材质截留相对分子质量5 000的板式膜能够100%去除药液中的细菌内毒素。江苏康缘药业股份有限公司的相关人员对其安全性已经进行了较为深入的研究，经过两级超滤膜超滤后，聚砜材质截留相对分子质量10 000的中空纤维膜对热毒宁注射液脱炭液中的草酸盐及树脂有明显的去除效果。

李淼[3]等在热毒宁注射液生产过程中的关键工序对细菌内毒素的去除效果研究中，采用动态浊度法对活性炭吸附率以及10×103截留超滤对细菌内毒素的去除率进行了考察，发现活性炭的吸附率为78.7%、细菌内毒素的去除率为99.6%。超滤技术过程简单高效、无相变、节能、无二次污染，在中药成分的分离、纯化和精制中发挥了重要作用，尤其能显著提高中药注射剂的安全性、稳定性及质量可控性[4]。

江苏康缘药业股份有限公司在超滤工艺方面进行了较多的研究[5-7]。本文主要针对超滤过程对热毒宁注射液的色泽控制进行了研究。

色泽是指中药注射剂由于其原料的影响，允许有一定的色泽范围，但同一批号成品的色泽必须保持一致，在不同批号的成品间，也应控制在一定的色差范围内。

与2010版《中国药典》方法配制的比色对照液比较，色差应不超过规定色号的±1个色号；静脉注射剂的颜色不宜过深，以便于可见异物的检查和控制。

热毒宁注射液成品的色泽经与黄色标准比色液（2010版《中国药典》一部附录ⅪA）比较，应控制在3～5号。因热毒宁注射液在灭菌后色泽稍有加深，因此超滤后的药液色泽最好控制在3～4号，不宜超过4号。

1 仪器和材料

10 000板式膜组件（超滤系统为：JMCDCUF800，16块膜，2.5 m2/块；截留相对分子质量为10×103，聚醚砜材质，Millpore）；电机为DV160L4/V，SEW电机（苏州）有限公司。

10 000中空纤维超滤膜组件（5个模组，规格型号CLW（N）-05，90 mm×1.1 m，纤维内径0.2 mm，纤维外径0.4 mm，截留相对分子质量为10×103，聚砜材质PS），北京旭邦膜设备有限公司；Y100L1-4型变频调速交流三相异步电机，天津大明电机股份有限公司。

Y-1-10型标准比色液，上海市食品药品检验所。

2 方法与结果

2.1 相关测定

2.1.1 试验样品的制备

小容量注射剂车间按照热毒宁注射液生产工艺要求，制备热毒宁注射液10 000超滤前液适量，备用。

2.1.2 色泽的测定

热毒宁注射液生产过程中溶液的颜色检查：取待测样品2 mL，加水稀释定容至100 mL，与黄色标准比色液（2010版《中国药典》一部附录ⅪA）比较，应符合热毒宁注射液质量标准，即药液色泽为3～5号。

2.1.3 蛋白质的测定

蛋白质检测方法[2，7]：取药液1 mL，加新鲜配制的30%磺基水杨酸试液1 mL，混合放置5 min，不得出现混浊，则判为阴性。

2.1.4 树脂的测定

树脂检测方法[2，7]：取药液5 mL，加（浓）盐酸1滴，放置30 min，应无明显的混浊或沉淀，则判为阴性。

2.1.5 草酸盐的测定

草酸盐检测方法[2，7]：取药液2 mL，加3%氯化钙试液2～3滴，放置10 min，不得出现混浊或沉淀，则判为阴性。

2.1.6 栀子苷的测定[2，7]

（1）采用高效液相色谱法，色谱条件及系统适用性试验设计：色谱柱PhenomenexC18（250 mm×4.6 mm，5 μm），以0.05 mol/L磷酸氢二钠（用磷酸调pH6.0）-乙腈（88:12）为流动相，检测波长237 nm，理论板数按栀子苷峰计算不低于2 500。

（2）对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇-水（1:1）溶解，制备成约含栀子苷0.06 mg/mL的溶液，摇匀，即得。

（3）供试品溶液的制备：精密量取供试品溶液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加50%甲醇水溶液稀释至刻度，摇匀，备用。

（4）再精密量取（3）中备用液5 mL，置于10 mL容量瓶中，加50%甲醇水溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

（5）测定方法：分别精密量取对照品及供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，用外标一点法计算即得。

超滤前后药液中栀子苷的转移率＝C2M2/C1M1

式中 C1——超滤前药液中栀子苷的含量，mg/mL；

M1——超滤前药液的重量，kg；

C2——超滤后药液中栀子苷的含量，mg/mL；

M2——超滤后药液的重量，kg。

2.1.7 绿原酸的测定[2，7]

（1）采用高效液相色谱法，色谱条件及系统适用性试验设计：色谱柱PhenomenexC18（250 mm×4.6 mm，5 μm），以1%醋酸水溶液-甲醇（80:20）为流动相，检测波长327 nm，理论板数按绿原酸峰计算不低于3 000。

（2）对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品6 mg，置于100 mL容量瓶中，加1%醋酸水溶液-甲醇（1:1）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

（3）供试品溶液的制备：精密量取供试品溶液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加1%醋酸水溶液-甲醇（1:1）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

（4）测定方法：分别精密量取对照品及供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，用外标一点法计算即得。

超滤前后药液中绿原酸转移率＝C2M2/C1M1

式中 C1——超滤前药液中绿原酸的含量，mg/mL；

M1——超滤前药液的重量，kg；

C2——超滤后药液中绿原酸的含量，mg/mL；

M2——超滤后药液的重量，kg。

2.2 正交试验设计

针对热毒宁注射液10 000超滤过程中对色泽的影响，从超滤液的pH值（A）、超滤液的温度（B）、板式膜及中空纤维膜的超滤比例（C）、超滤过程中膜的进出口压力差（D）这4个因素，每个因素选择3个水平，采用L（934）正交设计因素水平表（表1），考察10 000超滤过程对色泽的影响。正交试验设计及结果如表2所示。方差分析如表3所示。

表1 影响10 000超滤膜的因素水平

表2 正交试验设计及结果

表3 方差分析

通过极差R值大小及趋势显示，各因素对色泽影响大小的顺序为：板式膜和中空纤维膜的超滤比例＞超滤前药液pH值＞超滤过程中膜的进出口压力差＞超滤液的温度。通过正交试验表得出最终的优选的超滤参数为：A2B2C2D3，即超滤前药液pH＝4.6，药液在30 ℃保温条件下，10 000超滤过程中保持进出口压力差在0.05～0.07 MPa，采用板式膜和中空纤维膜的超滤比例为1:1。

同时，采用优化后的超滤方法进行热毒宁注射液生产，检测相应的指标性成分如表4所示。

表4 药液超滤前后两种检测结果对比

从表4可以得出：

（1）药液在优化前与优化后，其可见异物、蛋白质、草酸盐、树脂等检测指标无显著差异；

（2）有效成分栀子苷、绿原酸转移率稍有变化，但优化前后两者的转移率仍都能达到95%以上；

（3）超滤对药液的影响是多方面、多层次的，对药液的其他影响还需要作进一步的系统研究。

3 结语

目前在热毒宁注射液生产过程中，采用10 000分子量及50 00分子量的超滤膜对其进行超滤，超滤过程对药液的色泽控制有重要影响。通过10 000超滤过程对色泽的研究，使热毒宁注射液在生产过程中的控制又增加了有力的依据。药品溶液颜色检查是控制药品中有色杂质限量的方法，主要控制由生产制备中可能引入的有色杂质或贮存中由于药品不稳定而产生的有色产物。有色杂质的量在一定程度上也可以用来判断该药品的纯度，这种方法已经成为药品质量安全检验的一个有效的简易方法，通过对药品外观颜色以及有色杂质呈现出的不同颜色的深浅去判断有色杂质的量，最终确定该药品是否符合药品质量安全标准。

近年来，现代膜分离技术因其高效、节能等优势日益在制药工业中得到应用。20世纪80年代初，日本汉方制剂专利中已采用微滤澄清水煎液再超滤除杂的工艺。国内近几十年来，在中药制药方面关于膜分离的研究有所发展，但依然处于起步阶段，远远不能满足中药生产发展的需要。

本文仅从热毒宁注射液生产过程中采用两种10 000分子量超滤膜进行对比实验，在实际生产过程中还要对原材料的质量、脱碳工艺、有效成分的转移率、灌封过程、灭菌过程、稳定性考察数据等进行深入控制检查。同时还要考虑药液本身的变化和超滤膜的清洗和应用的效果。在后续的生产过程中，具体细节控制还有待于进一步细致的探讨和研究。

[1] 萧伟，凌娅，戴翔翎，等.不同评价指标优选热毒宁注射液中间体的精制工艺[J].中国天然药物，2007，5（1）：42-44.

[2] 王永香，张卫平，萧伟，等.聚砜超滤膜对热毒宁注射液脱炭液的纯化工艺研究[J].中草药，2013，44（14）：1905-1910.

[3] 李淼，徐玉玲，宋娟，等.热毒宁注射液生产过程中关键工序对细菌内毒素去除效果研究[J].中国中药杂志，2011，36（6）：663-665.

[4] 张跃真，林军.超滤技术在中药液体制剂中的应用[J].中国药房，2007，18（9）：704-705.

[5] 王永香，刘涛，王振中，等.活血通络注射液超滤工艺的膜污染及清洗研究[J].中草药，2011，42（5）：913-915.

[6] 祝倩倩，萧伟，王振中，等.注射用芪红脉通微滤液的超滤工艺适用性研究[J].中草药，2013，44（9）：1117-1121.

[7] 朱明岩，凌娅，萧伟，等.不同超滤膜组件处理热毒宁注射液脱炭液的效果比较[J].中国实验方剂学杂志，2015，21（11）：21-23.