肾精不足模型造模方法文献分析*

郑莉明，敖海清，徐志伟

(广州中医药大学基础医学院，广州 510405)

肾精不足模型造模方法文献分析*

郑莉明，敖海清，徐志伟

(广州中医药大学基础医学院，广州 510405)

目的:全面归纳近10年肾精不足模型的各种造模方法及其理论依据、相关疾病和评价指标，为肾精不足证及其相关疾病的研究提供文献统计学依据。方法:电子检索中国知网数据库和万方数据库2004年1月至2013年10月收录的肾精不足模型相关期刊论文、学位论文、会议论文，归纳其造模方法和相关评价指标。结果:共纳入肾精不足模型相关文献38篇，其造模方法主要分为药物干预、手术切除、物理方法和模拟中医病因4大类;主要与生长发育迟缓、不孕不育症、骨质疏松症、更年期综合征、早衰等疾病相关;模型评价指标主要反映生长发育迟缓、生殖功能低下、衰老或相关疾病病理特征等。结论:各种造模方法都有其优缺点，目前尚缺乏能全面反映神经内分泌免疫功能紊乱的肾精不足模型。

肾精不足;动物模型;相关疾病;模型评价指标

肾精不足是临床常见的中医证型，常见于临床各大疾病，但目前较少关于肾精不足动物模型归纳整理的文献，这不利于肾精不足证型及其相关疾病的研究。本研究就目前肾精不足常用造模方法、相关评价指标及存在的问题从文献研究的角度加以探讨。

1 资料与方法

1.1 资料来源

进行电子检索，检索式为:FT=(肾精不足+肾精亏虚+肾精亏损+肾精虚)×动物模型;应用的数据库为中国知网数据库(http://www．cnki．net/)和万方数据库(http://c．g．wanfangdata．com．cn/);检索时限为2004.1至2013.10;检索文献类型为学术期刊、学位论文、会议论文。

1.2 标准与评估

1.2.1 纳入标准 研究疾病以肾精不足为根本;研究中用到肾精不足动物模型或讨论内容与肾精不足动物模型有关;未明确说明中医证型，但研究疾病与中医肾精不足相关。

1.2.2 排除标准 以人为观察对象的研究;研究的中医病机复杂，不是以肾精不足为主;造模方法单纯模仿其他文献;对使用较多的造模方法，选取最具代表性的文献，其余排除。

1.3 质量评估

根据文章摘要剔除不符合纳入标准者，阅读全文剔除资料重复、文摘和资料不全者。

1.4 数据提取

共检索到4081篇，按纳入及排除标准筛选后，共纳入38篇文献。

2 结果

2.1 纳入文献

使用药物干预造模法21篇，使用手术切除造模法4篇，使用物理造模法1篇，根据中医病因造模12篇。

2.2 造模方法(见表1)

2.2.1 药物干预 1)激素类药物:①性激素:雄激素能引起低促性腺激素性性腺功能低下性无排卵。马惠荣［1］在雌性大鼠颈背部皮下一次性注射丙酸睾丸酮0.05 ml/只制作无排卵模型，用于研究多囊卵巢综合征;②糖皮质激素:糖皮质激素能使HPAT轴功能紊乱而出现神经-内分泌-免疫网络功能失调和骨代谢抑制等。康天济［2］给予大鼠肌注地塞米松和刘雁飞等［3］给大鼠灌胃强的松复制骨质疏松模型。2)中药:雷公藤具有生殖损害作用，可复制生殖功能障碍模型。黄琼霞等［4］给予大鼠雷公藤多苷片30 mg/(kg·d)灌胃，连续30 d;谌婕［5］推荐给予雌性小鼠30 mg/(kg·d)，持续10周。3)其他:①羟基脲能抑制核苷酸代谢，使体内生理、生化代谢功能低下和紊乱。楚生辉等［6］给予大鼠羟基脲片500 mg/(kg·d)灌胃，连续30 d，复制生殖功能障碍模型;②环磷酰胺通过干扰DNA合成而具有生殖毒性。李晖［7］持续5 d给予雄性大鼠环磷酰胺40 mg/(kg·d)腹腔注射，可用于复制生精障碍模型、男性更年期综合征模型［8］。王浩［9］用雌性大鼠腹腔注射环磷酰胺复制卵巢早衰模型;③腺嘌呤吸收水解后，能诱发雄鼠睾丸功能损害，是目前男性不育症造模应用较多的方法。涂鹏［10］给予雄性大鼠腺嘌呤25 mg/(100 g·d)灌胃，连续30 d，复制生精障碍模型;④维甲酸可激活破骨细胞，促进骨吸收。冼华［11］给予大鼠维甲酸70 mg/(kg·d)灌胃，连续2周，复制骨质疏松模型;⑤免疫反应诱发卵巢组织损伤。陈丽［12］用ZP3透明带多肽粉末和大鼠卵巢组织配制免疫试剂，多点注射雌鼠皮下复制免疫性卵巢早衰模型;⑥酒精性更年期综合征模型的雌激素变化及卵巢形态改变与临床绝经综合征情况相吻合。夏斌［13］一次性将0.2 ml无水乙醇注射到雌性大鼠卵巢内，增龄4周，复制更年期综合征模型;⑦D-半乳糖能引起细胞代谢紊乱，自由基积聚，过氧化脂质、脂褐素等增高，出现衰老［14］。徐叔云法:以D-半乳糖按12Omg/(kg·d)颈背部皮下注射3月龄小鼠，连续42 d，复制亚急性衰老小鼠模型［15］;⑧溴氰菊酯具有类雌激素样作用，会影响仔鼠性器官的发育和正常生殖内分泌功能。赵颖等［16］用溴氰菊酯(1/20LD50DM)(6.93 mg/(kg·d))给孕鼠灌胃，仔鼠作为先天不足生殖功能障碍模型;⑨烟雾中有毒物质可影响胎儿发育，中医学认为烟草“辛温，有大毒”(《滇南本草》)，耗伤孕母真阴，无以濡养胚胎，可致子代先天禀赋不足。蔡光先等［17］使孕鼠每天接受香烟烟熏，分娩后仔鼠用于研究先天脑部发育迟缓疾病;⑩陈云志等［18］提出维生素D为肾藏精的物质基础，用含2.5%氯化锶的自来水喂养雄性小鼠并避光饲养，持续6周，造成小鼠体内25(OH) D3缺乏，性激素方面改变与肾精不足证具有较高相似性。

2.2.2 手术切除 大鼠在去势后的生理改变与更年期后相似。将雌性大鼠双侧卵巢切除增龄3个月［19］，可用于研究绝经后骨质疏松症、围绝经期综合征、衰老、生殖内分泌免疫紊乱等。邵玉等［20］手术摘除雄性大鼠双侧睾丸，增龄13周，可用于研究骨质疏松症、中枢神经系统功能下降等。骨的制动使机械应力对骨刺激减少，抑制骨形成和增加骨吸收，从而导致骨量的丢失。高俊［21］切除大鼠右侧坐骨神经5 mm，术后增龄4周，造成废用性骨质疏松症。

2.2.3 物理方法 用物理方法达到骨制动效果。张睿［22］将大鼠尾部悬吊使大鼠因后肢废用而成骨质疏松模型，造模8周。

2.2.4 根据中医病因 1)单因素造模方法:①恐伤肾:孙理军等［23］让雄性大鼠每天接受猫的恐吓，持续2个月;恐伤孕鼠:冯新玲［24］使孕鼠每天接受猫的恐吓。郝蕊［25］在猫吓孕鼠的同时，加入人为定量恐吓造成母鼠肾精受损，使子鼠先天不足。党照丽［26］在恐伤孕鼠后，再让其分娩的仔鼠接受猫的恐吓，造成先天不足、后天失养的模型，用于研究生长发育迟缓、神经内分泌免疫系统紊乱、先天脑部发育障碍等方面;②房劳伤肾:腰向颖等［27］将雌雄鼠按一定比例同笼诱导房事不节，一般持续2～3个月。王丹［28］用自制电刺激仪每天刺激雄性大鼠的敏感部位，使其生殖器充血勃起并排出精液，持续10 d。此法较雌雄同笼房劳法减少了动物成本和大大缩短了造模周期，应进一步研究是否值得推广，用于研究男性不育症、免疫功能减退等疾病;③自然衰老:选用自然老年鼠为衰老模型［29］，一般选用13～24月龄，用于研究衰老、骨质疏松症、围绝经期综合征、神经内分泌免疫功能低下等。

2)复合因素造模方法:①房劳加惊恐:孙洁等［30］将雌雄鼠按一定比例同笼，雄鼠同时接受猫的恐吓，连续21 d，复制雄鼠肾精不足模型。造模后使其与雌鼠交配致孕，分娩的雄性仔鼠可作为先天肾精不足模型，用于研究生殖障碍、生长发育障碍、肾病及肝、骨代谢失衡等方面。屈娅婷等［31］先采用烟熏孕鼠法造成仔鼠矮小，再给予雄性仔鼠房劳加惊恐，复制矮小症肾精亏虚雄性大鼠病证结合模型。②房劳加游泳:谢玲玲等［32］给予雄性小鼠房劳加力竭游泳，造模4周用于研究男性生殖功能减退。③惊恐加游泳:姚军孝［33］给予雄性小鼠每天接受猫的恐吓和力竭游泳，持续21 d，用于研究生长发育迟缓、抗氧化能力下降等疾病。

2.3 模型评价指标

2.3.1 一般情况 体毛枯疏、精神萎靡、倦怠嗜睡，反应迟钝、弓背蜷缩、拥挤扎堆、行动迟缓，采食量、饮水量减少，且易受惊吓，体质量明显下降。

表1 按疾病归类造模方法

2.3.2 生长发育迟缓 体质量增长慢，股骨长度生长慢，生长激素(GH)降低［36］。脑部发育迟缓，脑内细胞凋亡较正常仔鼠增加［20］。

2.3.3 生殖功能障碍 生殖器官质量减轻，雌鼠阴道涂片见动情周期缺失、不完整且延长［5］，雄鼠精子质量显著性降低［11］。

2.3.4 骨质疏松 骨密度测定较空白组显著降低;股骨病理切片见骨小梁变细、变薄，形态结构性差，有扭曲或断裂，骨小梁间间隙增大［23］。

2.3.5 卵巢早衰 阴道涂片见动情周期紊乱，表现为动情前期延长，渐至动情周期缺失，仅有动情间期的白细胞及少量黏液，并出现有核上皮细胞混杂［13］。

2.3.6 男性更年期综合征 大鼠血清总睾酮(TT)、血清游离睾酮(FT)水平下降，行为学(悬尾试验)部分改变［9］。

2.3.7 女性更年期综合征 卵巢病理切片显示以囊肿及部分萎缩为主，未见明显卵泡［15］。阴道涂片呈现动情周期紊乱、动情间期延长［34］。

2.3.8 衰老 自由基累积、抗氧化能力下降，表现为超氧化物酶(SOD)活性下降，丙二醛(MDA)含量增高［16］。Morris水迷宫行为测试，提示学习记忆能力下降［18］。雌鼠阴道涂片表现无动情周期［34］。

3 讨论

肾精不足模型可分为病理模型和传统病因模型。不孕不育症、骨质疏松症、卵巢早衰、更年期综合征、衰老等都以肾精不足为根本，其临床病理研究较为清晰，所以大多采用病理模型。但病理模型只能反映临床肾精不足病理的某个或几个方面，化学药物造模会引起急性损伤和中毒现象，影响检测指标甚至导致模型动物死亡，而手术切除法中的去势法，除了带来手术创伤，模型也不符合临床患者内分泌水平波动的情况。传统病因模型就是根据先天禀赋不足或后天调养失宜、或惊恐无度、或强劳无逸、或房事不节、或久病，或高年肾气亏虚等病因，复制出肾精不足证的模型，而非病的模型。病因模型符合中医理论，更向临床病因靠拢，适用于中医基础和临床的研究，有很好的发展前景。但同一病因可以导致不同的病证，同一病证又可以有不同的病因，二者不完全具有一对一的特异性，所以利用单纯中医病因造成动物的病理改变并不能说明它只属于某一个证。

另外，各种造模方法在给药途径、用药剂量、造模时间、具体操作等方面差异较大，缺乏规范化、标准化，模型的可靠性因此受到质疑。一些肾精不足的造模方法往往也用于复制肾阳虚或肾阴虚模型，而以肾精不足证为基础的疾病模型，也常常兼夹其他证型。在评价肾精不足模型的指标中，一般采用反映生长发育迟缓、生殖功能低下、衰老或相关疾病病理特征的指标，但目前的指标都不是“金指标”。虽有学者试图找出肾精不足的物质基础，但结论未得到普遍认可。肾精不足证本质的临床诊断指标尚未得到特异化、数量化，导致其模型仍难以量化和标准化。

以上结果归纳了多种肾精不足模型造模方法，各有优缺点，应根据研究疾病的特点和实验目的选择较为合适的造模方法。肾精不足模型研究较肾阳虚、肾阴虚模型少，但随着中医养生文化推广与普及，肾精不足证候的研究将越来越受到重视。

［1］ 马惠荣．ASR卵巢HO/胆红素系统的研究及补肾调经方对其影响［D］．石家庄:河北医科大学，2005．

［2］ 康天济．补肾实骨汤治疗糖皮质激素性骨质疏松的实验研究［D］．哈尔滨:黑龙江中医药大学，2008．

［3］ 刘雁飞，胡林春，初秋，等．中药对糖皮质激素所致大鼠骨质疏松的影响［J］．中国地方病防治杂志，2009，24(2):110-111．

［4］ 黄琼霞，曹继刚，舒劲松．补肾毓麟汤对肾虚性生殖功能障碍大鼠生育力影响的实验研究［J］．湖北中医学院学报，2005，7 (3):7-9．

［5］ 谌婕．雷公藤多甙致雌性小鼠肾虚生殖功能低下动物模型研究［D］．成都:成都中医药大学，2006．

［6］ 楚生辉，刘敏，曹高忠．七肾汤对羟基脲肾虚大鼠生育力影响的实验研究［J］．中国民族民间医药，2010，16:32-37．

［7］ 李晖．二紫胶囊对生精障碍大鼠凋亡调控基因的影响［J］．中国实验方剂学杂志，2012，18(18):226-228．

［8］ 周兴．天蚕壮阳散干预男性更年期综合征大鼠模型的实验研究［D］．长沙:湖南中医药大学，2009．

［9］ 王浩．益肾调周法对卵巢早衰模型大鼠β-内啡肽的影响［J］．针灸临床杂志，2012，28(6):59-63．

［10］ 涂鹏．生精毓麟汤对肾精亏虚雄鼠精子功能的影响及其机制研究［D］．武汉:湖北中医药大学，2011．

［11］ 冼华．补骨防疏汤对骨质疏松大鼠骨代谢的作用研究［D］．重庆:重庆医科大学，2007．

［12］ 陈丽．Western-blot法检测护卵汤对免疫性卵巢早衰小鼠模型FoxP3蛋白表达的影响［D］．长沙:湖南中医药大学，2011．

［13］ 夏斌．二仙汤及大豆黄酮对绝经综合征模型大鼠生长性能及内分泌的影响［D］．长沙:湖南中医药大学，2013．

［14］ 冯冬兰．补肾活血化痰法对亚急性衰老动物模型SOD、MDA、E2作用的研究［D］．武汉:湖北中医学院，2006．

［15］ 赵利华．艾炷灸延缓D-半乳糖小鼠脑衰老作用的研究［D］．广州:广州中医药大学，2009．

［16］ 赵颖，罗颂平．孕期溴氰菊酯染毒对仔鼠生殖功能的影响及中药的干预作用［J］．中国男科学杂志，2010，24(7):3-6，20．

［17］ 蔡光先，刘柏炎，陈奕安．六味地黄汤对宫内发育迟缓胎鼠脑发育的影响［J］．中华中医药杂志，2007，22(9):642-644．

［18］ 陈云志，杨长福，秦钟，等．维生素D缺乏肾精不足小鼠模型的建立［J］．中华中医药杂志，2012，27(9):2412-2414．

［19］ 杨丽．OP模鼠MSCs生物学特性及药物对大鼠MSCs骨向分化的干预研究［D］．广州:暨南大学，2007．

［20］ 邵玉，黄海，周丽，等．补肾壮骨冲剂对去势骨质疏松大鼠骨组织形态学的影响［J］．广州中医药大学学报，2011，28(1): 53-55．

［21］ 高俊．益肾护骨方对废用性骨质疏松动物模型相关指标影响的研究［D］．南京:南京中医药大学，2012．

［22］ 张睿．持续与间歇1～7 d振动对抗悬吊大鼠骨质疏松的实验研究［D］．长春:吉林大学，2011．

［23］ 孙理军，王震，李翠娟，等．过度惊恐型肾虚质大鼠血清细胞因子水平变化的实验研究［J］．陕西中医学院学报，2012，35 (1):62-64．

［24］ 冯新玲．恐伤孕鼠对其仔鼠脑发育的影响及其机制研究［D］．武汉:湖北中医学院，2006．

［25］ 郝蕊．肾虚质大鼠免疫稳态失衡的分子机理及中药干预研究［D］．西安:陕西中医学院，2008．

［26］ 党照丽．肾虚质大鼠免疫基因表达与肾藏象理论相关性研究［D］．西安:陕西中医学院，2012．

［27］ 腰向颖，葛丽英，钱彦方，等．补肾生精汤对房劳小鼠模型生精细胞的影响［J］．河北中医药学报，2013，28(2):2-4．

［28］ 王丹．单因素刺激方法致大鼠肾精亏虚的动物模型及肾精亏虚对免疫功能影响的相关研究［D］．成都:成都中医药大学，2009．

［29］ 杜艳军．艾灸对老年大鼠海马线粒体凋亡及其基因调控的研究［D］．武汉:湖北中医学院，2005．

［30］ 孙洁，周安方，周艳艳，等．补肾填精方对肾虚雄性小鼠及其雄性仔鼠睾丸组织形态学的影响［J］．中国中西医结合外科杂志，2008，14(5):479-482．

［31］ 屈娅婷，何军锋，李路丹，等．矮小症肾精亏虚型雄性大鼠病证结合模型的研制［J］．中华中医药学刊，2009，27(2):341-343．

［32］ 谢玲玲，王萧，张永斌．“房室不节”所致肾虚证动物模型造模方法探讨［J］．山西中医，2010，26(2):46-48．

［33］ 姚军孝．肾精亏虚对机体生长发育和脑组织抗氧化功能影响及其补肾治疗的实验研究［D］．兰州:兰州大学，2012．

Analysis of Literatures About Methods for Preparing Kidney Essence Insufficient Models

ZHENG Li-ming，AO Hai-qing，XU Zhi-wei
(School of Fundamental Medical Science，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405，China)

Objective:To summarize the methods，theories and types of making kidney essence insufficient model，the related diseases and evaluating factors and thus provide basis of literature statistics for researches on diseases related to the syndrome．Methods:Journals，conference papers and theses about kidney essence insufficient model published between 2004.1 and 2013.10 were searched from CNKI and WANFANG databases to analyze the model preparation methods and detective measures．Results:In total 38 papers were selected．The method consists of drug intervention，surgical resection，physical method and simulating the etiological factor of the traditional Chinese medicine．The diseases related to the model mainly include growth retardation，infertility and male infertility，osteoporosis，climacteric syndrome，premature aging，etc．Growth retardation，reproductive hypofunction，aging or changes in pathophysiology of the diseases are reflected in the evaluating factors．Conclusion:Given all the methods presented have both advantages and disadvantages，none of them can reflect neuro-endocrine-immunity dysfunction of kidney essence insufficiency in all aspects．

Kidney essence insufficiency;Animal models;Related diseases;Evaluating factors

R-332

A

1006-3250(2015)10-1323-04

2015-02-21

国家自然科学基金资助项目(81173144);教育部2010年度新世纪优秀人才资助计划项目(NCET-100088)

郑莉明(1988-)，女，医学博士，从事中医药抗应激损伤的理论与应用研究。