胃癌HIF-1α 表达及其与胃癌术后复发的相关性研究

2015-04-10高树全仲婷婷催大鹏北方学院附属第一医院肝胆外科河北张家口075000

局解手术学杂志 2015年3期

高树全，仲婷婷，催大鹏 (北方学院附属第一医院肝胆外科，河北张家口075000)

胃癌是消化系统中最常见的恶性肿瘤，目前能够从根本上治愈胃癌的方法即胃癌根治术［1］。虽然胃癌根治术能够使胃癌患者的生活质量提高，但治疗后患者易复发，加之患者曾经行胃癌切除手术的经历将使胃癌复发的概率上升，这也是我们探索胃癌复发与转移机制的原因。目前胃癌的复发与转移已经成为胃癌治疗研究的新方向［2］。有文献［3］报道缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与血管内皮生长因子(VEGF)能够促进血管的生成。在正常人体内，这2 种因子的含量非常低，但胃癌患者体内，这种因子的含量异常升高，我们推测这2 种因子的含量与胃癌肿瘤的发展呈相关性。本文使用免疫组织化学法测定胃癌组织中HIF-1α、VEGF的具体分布情况，结合测定结果分析HIF-1α、VEGF 与胃癌复发以及转移之间的线性关系，为临床胃癌的研究提供依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2011 年6 月至2014 年6 月在我院进行过胃癌根治切除手术的患者资料，术后胃癌复发患者80 例为观察组，其中男37 例，女43 例，年龄35 ～65 岁，平均(58.5 ±5.7)岁;选取在我院行胃癌根治切除术，随访5 年及以上无复发病的患者50 例为对照组，其中男28 例，女22 例，年龄为38 ～63 岁，平均(57.5 ±7.4)岁;对患者进行超声，CT 等检测，排除第2 次原发胃癌患者，保证研究对象的所有临床病理资料的完整性、准确性以及实时性。患者签署知情同意书，由医院伦理委员会全程跟踪。

1.2 方法

经胃镜(GIF-XP20 型)对病变部位采取组织活检，诊断标准参照病理诊断《全国胃癌协作组制定的诊断标准》［4］执行。对HIF-1α、VEGF 水平检测采取免疫组化方法。操作步骤:用EDTA 对HIF-1α 进行热修复20 min，对VEGF 热修复2 min，修复后使用冷水、PBS 缓冲液冲洗。苏木精染色后，脱水，成片。阴性对照参照代替一抗样本的PBS1 缓冲液。对样本参数的免疫组织进行判断参考以下原则:①若HIF-1α 表达为阳性，我们则可以在细胞核内见到棕黄色或黄色颗粒。VEGF 表达阳性则体现为黄色或棕黄色颗粒。②放大倍数100 倍，镜下观察细胞着色水平，将着色不同水平分成0 ～3 级，随机选取样本中的3个有效区域，使用放大倍数为400 倍，镜下对细胞进行计数，以500 为一个计数单位，阳性细胞的比率在10%以下为1 级，在10% ～50%为2 级，大于50%的为3 级;③级数计算:将着色不同水平分级与阳性细胞比率分级所测得结果相乘，0 级为阴性，1 ～3 级为弱阳性，4 ～6 级为中度阳性、6 级以上为重度阳性。

1.3 统计学分析

实验数据使用SPSS 19.0 软件包统计分析肿瘤发展因素与HIF-1α 与VEGF 的含量之间的关系，Spearman 分析法分析2 组患者的相关性，Cox 分析法对胃癌进行风险模型分析，以P ＜0.05为具有统计学差异。

2 结果

2.1 VEGF 与HIF-1α 表达情况

Spearman 法进行相关分析后，得出HIF-1α 与VEGF 呈正相关(r=0.458，P=0.000)。观察各组胃组织中VEGF、HIF-1α 阳性表达明显高于对照组(表1、表2)，染色结果见图1。

表1 各组胃组织中VEGF 表达情况

表2 各组胃组织中HIF-1α 表达情况

图1 HIF-1α 和VEGF 在胃癌组织中阳性表达

2.2 胃癌高风险因素分析

复发组中胃癌HIF-1α 阳性率与临床病理因素的相关性分析结果提示(表3):HIF-1α 阳性率与胃癌分化程度、淋巴结转移与否、TNM 临床分期及VEGF 表达密切相关。而胃癌1 年生存率和平均生存时间HIF-1α 阴性表达患者明显高于阳性表达患者，差异有统计学意义(表4)。通过Cox 法进行风险模型分析，HIF-1α(OR=3.145，95%CI:1.665 ～4.027)与VEGF(OR=3.012，95%CI:1.244 ～3.886)是引起胃癌复发的重要因素。

表3 胃癌复发组HIF-1α 阳性率与临床病理特征的相关性分析［例(%)］

表4 患者1 年生存率和平均生存时间比较

3 讨论

胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤，胃癌根治术为治疗本病的常用方法，能明显提高患者的生活质量，减少痛苦［5-6］，但治疗后部分胃癌患者容易复发。胃癌的早期症状不易表现出来，大多数患者发现胃癌且接受根治手术治疗时，胃癌已经到了进展期［7］。在这一阶段，虽然对患者进行了根治手术治疗，但是胃癌复发的概率仍然较高。而如果在胃癌早期对胃癌患者进行根治手术治疗，并且在之后对其进行观测随访，结果表明，胃癌前期治愈后的胃癌复发率为胃癌进展期复发率的13%［8］。在胃癌进展期进行根治手术治疗后复发病率高达75%［9］。所以为了提高胃癌患者手术之后的生存率，延长生存时间，我们对诱发胃癌患者根治手术治疗之后复发率的相关因素进行了系统的分析。

根据目前的研究表明，HIF-1α、VEGF 的共同作用是导致胃癌根治手术之后复发的主要原因，其中促进肿瘤血管生成是促进胃癌肿瘤发展的前提条件［10］。在肿瘤患者的体细胞中，癌细胞的抑制因子与癌细胞的促进因子之间的平衡被打破，癌细胞的促进因子活跃度十分高，癌细胞的抑制因子的活跃度很低。VEGF因子在细胞中的主要作用就是促进血管的生产，在对正常人与肿瘤患者的检查中发现，正常人VEGF 的含量非常低，但是患有肿瘤的患者VEGF 的含量往往较高［11］。除此之外，VEGF 还有其他的功能，比如加速淋巴管内皮细胞的形成与增殖，促进淋巴管的形成，而且还可以增加淋巴血管之间的通透性，加速淋巴血管转移，所以肿瘤恶性程度与VEGF 含量有着紧密的联系。VEGF 可使体内出现免疫识别障碍，机体认定肿瘤组织为正常组织，从而产生正常的新陈代谢，促进HIF-1α生成，可强化肿瘤因子的转录，进一步增加VEGF 的生成量，从而进一步促进肿瘤组织的发展［12］。

胃癌复发组HIF-1α 与临床病理特征的相关性分析显示［8］，对胃癌复发性具有影响的因子包括胃癌分化程度、胃癌淋巴结转移与否、胃癌浸润程度、胃癌TNM 分期与VEGF 的表达等。张磊等［13］对53 例胃癌复发患者组织中的HIF-1α 表达进行了测定，发现阳性表达率与胃癌肿瘤大小以及与肝转移情况有直接关系。文献报道［14］检测HIF-1α 在胃癌组织中的表达能够推测胃癌的远端转移，进而推测胃癌的复发与HIF-1α 关系密切。刘勇及蔡刁龙等［15-16］对胃癌手术患者的预后情况进行分析，发现己糖激酶-Ⅱ与HIF-1α 关系着胃癌分化、胃癌肿瘤的大小以及胃癌的临床分期。可作为对胃癌术后患者复发的影响因素。本研究结果表明肿瘤发展速度与细胞体内的HIF-1α 含量有着明显的线性关系，HIF-1α在肿瘤的发展的过程中起到了重要的促进作用。本组实验结果表明:与对照组相比，观察组中HIF-1α 的阳性表达明显更多，提示胃癌患者的HIF-1α的变化与病情状况有关;2 组VEGF 阳性表达中，观察组明显多于对照组，提示胃癌患者的VEGF 表达与病情状况有关。因此，可以认为检测胃癌患者VEGF 和HIF-1α情况，对胃癌患者复发的预测具有重要意义。

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