复方磺胺氯吡嗪钠—二甲氧苄啶混悬液对鸡的安全性试验

2015-04-02赵莎莎徐亚亚

江苏农业科学 2014年12期

赵莎莎+徐亚亚

摘要：选取40羽（雌雄各半健康的15日龄扬州黄羽肉鸡，随机分成4组，每组10羽。试验鸡分别以0 mg/kg、推荐剂量（300 mg/kg、3倍推荐剂量（900 mg/kg、5倍推荐剂量（1 500 mg/kg的磺胺氯吡嗪钠、二甲氧苄啶混悬液连续给药 5 d，给药方式为自由饮水，5 d后根据各组鸡平均增质量、血液学和血液生化学参数及组织病理学检查结果，评价磺胺氯吡嗪钠、二甲氧苄啶混悬液对鸡的安全性。

关键词：磺胺氯吡嗪钠；二甲氧苄啶混悬液；血液学；血液生化；安全性评价

中图分类号： S85979+6文献标志码： A

文章编号：1002-1302（201412-0262-04

磺胺氯吡嗪属于磺胺类广谱抗菌药，临床主要用于治疗由艾美耳属球虫感染引起的鸡球虫病和特定的细菌性疾病。二甲氧苄啶为兽医专用抗菌增效剂，内服吸收很少，含DVD的复方制剂主用于防治禽、兔球虫病及畜禽肠道感染[1]。本试验所用的复方磺胺氯吡嗪钠-二甲氧苄啶混悬液临床拟用于治疗由艾美耳属球虫感染引起的鸡球虫病，推荐的给药方案为1 L水加入本品1～2 mL，连用3～5 d。笔者参照美国FDA《新兽药靶动物安全性试验指南》（Guideline No 33中禽的毒性研究内容，结合该药物拟推荐的临床使用剂量设计并进行了本次试验，以提供磺胺氯吡嗪钠、二甲氧苄啶混悬液在鸡的组织病理学和临床病理学方面的研究数据，了解该产品对拟用靶动物的安全性。

1材料与方法

11供试药品

磺胺氯吡嗪钠、二甲氧苄啶混悬液，含量200%+40%，规格为200 mL，由中牧南京动物药业有限公司提供。

12试验仪器与试剂

121仪器及其他

OLYMPUS Au2700 全自动生化分析仪，生物显微镜，离心机；其他器具有血细胞计数板、离心管、载玻片、盖玻片等。

122试剂试验中所用试剂主要有瑞士染液、结晶紫染液、中性红染液等。

13试验动物及饲养地点

1日龄黄羽肉鸡100羽，购自中国家禽研究所孵化场，每天由专人定时喂料不含任何药物的全价日粮（中国家禽研究所提供，自由饮食。育雏及试验期间如需保温则采用油汀或白炽灯保温。

14试验动物入选和剔除标准

入选的15日龄鸡在试验前1 d必须经兽医检查确认为临床健康。试验前处于濒死的鸡以及生病或受伤的鸡不得作为试验动物用于本次试验。

15方法

151试验分组与给药方案

试验前1 d从100羽饲养至14日龄的雏鸡中选择40羽健康雏鸡，称重后按体质量进行均衡随机分组，共分4组，每组10羽鸡（公母兼有。试验鸡采用翅号和笼号进行标记识别。

根据该药物拟推荐的临床给药剂量，自15日龄起各组鸡分别按推荐应用水平的倍数，即0、1、3、5倍的最大推荐剂量进行自由饮水给药。试验持续期为药物推荐使用的最长持续时间，共计5 d。具体给药方案：对照组0 mg/kg、最大推荐剂量组300 mg/kg、3倍最大推荐剂量组900 mg/kg和5倍最大推荐剂量组1 500 mg/kg，连用5 d。

152安全性试验评价指标

1521临床观察

试验期间每天对试验动物进行细致而周密的观察，描述靶动物对药物有毒剂量产生的反应。具体观察项目取决于药物的已知特性和受试家禽的种类：（1与药物有关的发病率和死亡率；（2增重和饲料转化，试验前和试验结束后各测定1次；（3其他不良反应。

1522大体病理学检查

对试验中死亡的所有鸡都要剖检，对与药物毒性、疾病或其他原因有关的死亡率通过可接受的诊断技术加以确认，并记录死亡日期，对疑似与药物相关的大体损伤进行组织病理学检查。

1523临床病理学检查（血液学和血液生化学检查[3-4]

在试验结束时对每组试验鸡颈动脉放血并分别采集血样进行血液生化学检查和血常规检查。检测的参数有：（1血常规参数。包括红细胞数量、血红蛋白数量、白细胞数量、淋巴细胞数量、异嗜性粒细胞数量、单核细胞数量、嗜酸性粒细胞数量、嗜碱性粒细胞数量、淋巴细胞含量、异嗜性粒细胞含量、单核细胞含量、嗜酸性粒细胞含量、嗜碱性粒细胞含量。（2血液生化学参数。包括白蛋白含量、总蛋白含量、球蛋白含量、白球比值、直接胆红素含量、总胆红素含量、间接胆红素含量、谷草转氨酶活性、谷丙转氨酶活性、乳酸脱氢酶活性、碱性磷酸酶活性、葡萄糖含量、尿素氮含量、肌酐含量、钙含量、磷含量、钾含量、钠含量、氯含量。

1524组织病理学检查

试验结束时每组试验鸡进行组织学检查。其中对肝脏、肾脏、脾脏和肺等组织进行常规检查，根据出现的毒性情况决定是否对其他组织进行检查。如果与不给药的对照组相比，来自较高剂量试验组鸡的组织未出现与药物相关的组织病理学变化，则较低浓度剂量组的鸡组织则不必进行组织学检查。

1525数据统计分析

用SPSS应用软件系统进行数据的显著性检验。采用t检验比较试验组与对照组间平均增质量、料肉比（饲料利用率、血液学和血液生化学等各项指标的显著性差异[5]。

2结果与分析

21一般临床观察

整个试验期间，对照组、推荐剂量组和3倍推荐剂量组中的所有试验动物健康状况良好，饮水和采食均正常。5倍剂量组中有个别鸡在给药3 d时出现精神沉郁、采食量下降、羽毛蓬乱等现象；其他各试验组鸡在试验期间未观察到任何临床症状。试验期间各组动物均无死亡。

22增质量与饲料利用率

试验结束时各组平均增质量及饲料利用率结果分别见表1与表2。统计学分析结果（表1表明，推荐剂量、3倍推荐剂量组鸡平均增质量略有下降，但与对照组平均增质量差异不显著（P>005；5倍推荐剂量组与对照组和其他用药剂量组相比，平均增质量显著下降（P<005。[FL]endprint

[F（W8][HT6H][J][WTH]表1试验结束时各组鸡的平均增质量（n=20[WTB][HTSS][STB]

[HJ5][BG（！][BHDFG3，W15，W30，W15W]组别[B（][BHDWG12，W30W]体质量（g[BHDWG12，W15。2W][XXSX2-SX292]试验前（15日龄试验后（21日龄[BW]平均增质量（g

[BHDG12，W15Q1，W15。3W]对照组（0 mg/kg20390±105738700±2348a18310±1838a

[BHDW]推荐剂量组（300 mg/kg20010±102737330±2152a17320±1581a

3倍推荐剂量组（900 mg/kg19300±153636200±2722b16900±1612a

5倍推荐剂量组（1 500 mg/kg20060±166734150±3363c1409±1954b[HJ][BGF]

注：同列数据后不同小写字母表示差异显著（P<005。下表同。[F]

[FL（22]与对照组相比，推荐剂量组和3倍推荐剂量组的料肉比变化不明显，但5倍推荐剂量组料肉比增高，表明磺胺氯吡嗪钠、二甲氧苄啶溶液在使用剂量过高时会降低饲料的利用率，这与其对增质量的影响一致（表2。

[F（W7][HT6H][J]表2试验结束时各组试验鸡的料肉比[HTSS][STB]

[HJ5][BG（！][BHDFG3，W14，W5。3W]组别消耗饲料量（g增质量（g料肉比

[BHDG12，W14Q0，W5。3W]对照组（0 mg/kg4 16081 831227

[BHDW]推荐剂量组（300 mg/kg3 79091 732219

3倍推荐剂量组（900 mg/kg3 56501 690211

5倍推荐剂量组（1 500 mg/kg3 54661 409252[HJ][BG）F][F）]

23血液学参数

[JP2]由表3可见，随着剂量增加，3倍推荐剂量组和5倍推荐剂量组的一些血液学指标显示出增加或减少的趋势。统计学分析结果表明，推荐剂量组的嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞数量较对照组有所增加（P<005；3倍推荐剂量组的嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞数量较对照组有所增加（P<005，单核[JP3]细胞数量有所减少（P<005；5倍推荐剂量组的嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细饱和单核细胞数量与对照组差异显著（P<005。

24血液生化学参数

试验结束时血液生化学检测结果分别见表4。

25病理学检查

试验试验结束后分别将每组鸡扑杀，所有剂量组经肉眼观察均未发现任何异常或可疑病变。对5倍推荐剂量组内的所有鸡进行组织病理学切片，检查结果表明，所有鸡的肝、脾、肺和肾均未发现显微病理学变化（图1、图2、图3、图4、图5、图6、图7、图8。

3结论与讨论

本试验所采集的数据包括体质量、健康状况、食欲情况以[FL]

[F（W13][HT6H][J][WTH]表3试验结束时各组试验鸡的血液学指标（n=10[WTB][HTSS][STB]

[HJ5][BG（！][BHDFG3，W72。8W]组别红细胞数量（万个/μL血红蛋白含量（g/L白细胞数量（万个/μL淋巴细胞数量（万个/μL异嗜性粒细胞数量（万个/μL嗜酸性粒细胞数量（万个/μL嗜碱性粒细胞数量（万个/μL

[BHDG12，W72Q0，W72。7W]对照组23610±2141a8740±1197a3300±0330a0893±0100a2280±0230a0055±0007a0019±0002a

[BHDW]推荐剂量组23750±1060a8390±672a3410±0524a0920±0148a2370±0362a0065±0012b0022±0003c

3倍推荐剂量组22950±2232a8270±819a3400±0457a0940±0135a2350±0317a0066±0010c0022±0003c

5倍推荐剂组23730±2579a8320±791a3300±0283a0840±0097a2300±0211a0072±0006c0021±0002b

及血液学、临床生化学等参数。推荐剂量组、3倍推荐剂量组的试验鸡健康状况、食欲情况以及可能的毒性反应与对照组差异不显著，部分血液学参数有不同程度的变化，但在正常范围内；少数血液生化指标与对照组的差异可能和仪器分析有关。与对照组相比，推荐剂量和3倍推荐剂量组的增质量未受显著影响，饲料利用率也未显著改变。

5倍推荐剂量组在用药3 d后个别鸡出现轻度临床不耐受现象，主要表现为精神沉郁、采食量下降、羽毛蓬乱等现象。

[F（W12][TPSS11tif；S+3mm][F]

但试验结束时这些不良反应明显减少，表现出适应现象，且病理剖检未见相关组织呈现明显病理变化，但部分临床血液学、生化参数指标，如嗜酸性粒细胞数量、嗜碱性粒细胞数量、葡萄糖含量、谷丙转氨酶活性、Na含量和Cl含量等检测指标与未用药对照组之间差异显著（P<005。

鉴于本试验在较热的季节进行，试验期间鸡的饮水量增加对药物的不良反应和试验结果可能会有一定的影响。

[CM（24]本试验结果表明，南京中牧动物药业有限公司生产的磺[CM）]

[F（W11][TPSS44tif][F]

[F（W12][TPSS33tif][F]

[F（W13][TPSS55tif][F]

胺氯吡嗪钠、二甲氧苄啶混悬液至少以3倍最大推荐剂量对鸡连续给药5 d，并未观察到对鸡有毒性作用和死亡现象发生，鸡精神状况良好，食欲和粪便正常。说明磺胺氯吡嗪钠、二甲氧苄啶混悬液至少以3倍最大推荐剂量对靶动物鸡连续饮水给药5 d是安全的。

综合本次试验结果，建议在使用磺胺氯吡嗪钠、二甲氧苄啶混悬液饮水给药时，连续用药不得超过5 d，炎热季节可适当降低混饮药物的浓度。

[HS2][HT85H]参考文献：[HT8SS]

[1][（#]李湘鸣 SPSS软件应用指导：常用医学生物统计[M] 南京：东南大学出版社，2000[）][HJ]