游离二氧化硅对大鼠循环成纤维细胞mRNA 表达的实验

李举

(四川科技职工大学职业安全健康与环保工程系 四川 成都 610101)

1.材料

8 ～13 周雄性Sprague - Dawley(SD)健康大鼠30 只，游离SiO2 标准品。

2.方法

检测循环成纤维细胞总mRNA 纯度和含量提取的RNA 2μl，滴加DEPC 水200 μl，用分光光度计测定260 纳米(A260)及280 纳米(A280)吸光度值，如果A260 与A280 的比值位于1.8 ～2.0，表示得到比较高的RNA 纯度，此时的反应模板合适。在260 纳米的吸光度值等于1mRNA 含有40 μg/ml，mRNA 浓度(μg/μl)=260 纳米吸光值×40 μg/ml ×稀释倍数×0.001，mRNA 总含量(μg)=mRNA 浓度×总体积(μl)。

3.结果

不加上清为对照，和对照(OD 值等于0.397)比较，0 浓度组(OD 值是0.398)差异无统计学意义(P ＞0.05);20、40、60、80 μg/ml 浓度组(OD值分别是0.505、0.667、0.898、0.903)差异有统计学意义(P ＜0.05)，0(OD 值是0.398)到80 μg/ml 浓度组(OD 值是0.903)表达逐渐增加;60 μg/ml(OD 值是0.898)和80 μg/ml 浓度组(OD 值是0.903)比较，差异无统计学意义(P ＞0.05)。

4.讨论

浓度不同的二氧化硅实验提示实验组cFB 对胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、α 平滑肌肌动蛋白mRNA 的表达高于对照组，随着二氧化硅浓度增加而增加，暗示二氧化硅粉尘可以促进cFB 对胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、α 平滑肌肌动蛋白mRNA 表达水平增加，0 浓度组和对照向接近，提示没有经二氧化硅刺激上清不能促进cFB 对胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、α 平滑肌肌动蛋白mRNA 表达水平增加。Heppleston 等建立由巨噬细胞和FB 组成的矽肺模型实验。他们认为二氧化硅粉尘作用于巨噬细胞能够表达致成纤维细胞胶原合成因子［1］。在矽肺发病机理中徐勇认为矽尘和人肺成纤维细胞共同培养时，细胞能够吞噬矽尘，细胞内白介素1 的mRNA 水平增加［2］，彭欢等用白介素1 刺激人外周血cFB 时发现白介素1 促进cFB 增殖，促使分泌致炎因子，促进迁移［3-5］。这和本实验有类似。60 μg/ml 与80 μg/ml 浓度组的mRNA相比，差异无统计学意义。提示二氧化硅浓度增加时，接受刺激后cFB 对胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、α 平滑肌肌动蛋白的表达水平增加不太明显，这是因为较高浓度的二氧化硅粉尘对cFB 有毒害作用［6］。

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