山羊繁殖季节性相关基因KiSS-1与RFRP的表达研究

黄冬维，储明星，狄 冉，刘秋月，胡文萍，王翔宇，潘章源，郭晓飞

(1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室，北京 100193；2.安徽省农业科学院畜牧兽医研究所，合肥 230031)

山羊繁殖季节性相关基因KiSS-1与RFRP的表达研究

黄冬维1，2，储明星1*，狄 冉1，刘秋月1，胡文萍1，王翔宇1，潘章源1，郭晓飞1

(1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室，北京 100193；2.安徽省农业科学院畜牧兽医研究所，合肥 230031)

本研究为初步阐明KiSS-1和RFRP基因对山羊繁殖季节性的作用，选择常年发情济宁青山羊和季节性发情辽宁绒山羊为对比品种，应用RT-PCR和qRT-PCR技术分别研究KiSS-1和RFRP基因组织表达谱以及在下丘脑-垂体-卵巢(子宫)繁殖轴表达差异。结果发现：(1)KiSS-1基因主要表达于山羊下丘脑、垂体、松果体、肾、卵巢、脂肪和甲状腺等组织，RFRP基因主要表达于山羊下丘脑、大脑皮层、小脑、卵巢和垂体等组织，两基因组织表达谱均存在一定的品种特异性；(2)KiSS-1基因在济宁青山羊下丘脑表达量显著高于辽宁绒山羊(P<0.05)，而在垂体和卵巢中的表达量两品种间差异不明显(P>0.05)；(3)济宁青山羊下丘脑RFRP基因表达显著高于辽宁绒山羊(P<0.05)，而济宁青山羊卵巢和垂体中RFRP基因表达明显低于辽宁绒山羊(P<0.05)。研究结果提示，KiSS-1基因可能参与调控山羊季节性繁殖，而RFRP基因是否调控季节性繁殖或以何种方式作用还需要进一步研究。本研究可为山羊KiSS-1和RFRP基因功能研究打下基础，并为揭示山羊繁殖季节性的遗传基础提供参考。

山羊；繁殖季节性；KiSS-1；RFRP；表达

自然界多数动物表现为季节性繁殖，繁殖季节性受下丘脑-垂体-性腺轴系统的调控[1]。虽经多年研究，但动物繁殖季节性的分子调控机制仍不清楚。近年来，研究者发现，RFamide家族神经肽类编码基因KiSS-1与RFRP可能是动物季节性繁殖活动的重要调控因子。KiSS-1基因最初从人黑色素瘤细胞中分离出来，它编码一个含164个氨基酸残基的蛋白，编码产物经过加工后产生13～54个氨基酸残基长度不等的生物活性多肽，这些多肽通称为kisspeptins，它们具有相同的C端结构和共同受体GPR54[2-3]。Kisspeptin神经纤维末梢连接下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)神经元[4]，而GPR54表达于GnRH神经元，表明kisspeptin直接调控GnRH的脉冲释放[5-6]。绵羊脑室内注射kisspeptin试验表明，kisspeptin直接作用于下丘脑-垂体-性腺轴，促进GnRH释放和LH水平上升，调控季节性繁殖活动[7-8]。RFRP基因编码蛋白最早于2000年从日本鹌鹑大脑中提取出来，是定位于下丘脑室旁核的十二肽，因其具有抑制促性腺激素的作用又命名为促性腺激素抑制激素(Gonadotropin-inhibitory hormone，GnIH)[9]。RFRP神经元与GnRH神经元紧密毗邻并投射到正中隆起[10]，RFRP成熟肽可以抑制啮齿动物及绵羊促性腺激素的合成释放[11]。KiSS-1与RFRP基因编码蛋白同属RFamide神经肽类，但作用正好相反，两者均受到动物季节性光照信号内源分子褪黑激素调控[12-14]和雌激素负反馈作用[15-16]，因而相互协调作用共同控制动物季节性繁殖活动[17]。

我国多数山羊品种属于季节性繁殖，而目前对山羊季节性繁殖遗传基础不清楚。我国山羊品种众多，繁殖季节性各异，辽宁绒山羊属季节性繁殖，一般集中于秋冬发情繁殖[18]，而济宁青山羊具有常年发情的特点，一年四季均可繁殖[19]。本研究以季节性发情辽宁绒山羊和常年发情济宁青山羊作为对比品种，选择KiSS-1和RFRP作为山羊季节性发情调控候选基因，通过反转录PCR和荧光定量PCR技术分别研究两个基因在两个品种中的组织表达谱和在下丘脑-垂体-性腺轴的表达差异，从转录水平初步揭示两基因在山羊季节性繁殖中的作用，为获得繁殖季节性关键基因提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物和组织样品采集

于2011年4月中下旬在农业部济宁青山羊保种基地(山东省嘉祥县)和辽宁省辽阳市辽宁绒山羊育种中心选择健康、空怀济宁青山羊与辽宁绒山羊成年母羊各3只，屠宰后迅速采集新鲜组织并放置于预先装有RNA固定液的无RNase离心管中，样品采集在1 h内完成。所采组织冷藏(4 ℃)过夜后转入-20 ℃保存，干冰运输带回实验室转入-80 ℃超低温冷冻保存备用。

1.2 RNA提取和反转录

利用高纯总RNA快速提取试剂盒(百泰克，北京)提取组织总RNA，其中裂解液用Trizol(Invitrogen，美国)替代。用DNaseⅠ(天根，北京)消化基因组DNA。将紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测无降解，且A260 nm/A280 nm在1.8～2.1 的RNA置于-80 ℃冷冻备用。

使用cDNA快速合成试剂盒(天根，北京)反转录合成cDNA，反转录体系为20 μL：10×RT mix 2 μL，dNTPs (2.5 mmol·L-1) 2 μL，Oligo-dT15 2 μL，Quant Reverse Transcriptase 1 μL，1 μg总RNA，无RNase H2O补足20 μL。反应程序：37 ℃温育 60 min。反转录产物稀释后，用GAPDH持家基因RT-PCR检测后，-20 ℃保存，以备表达检测所用。

1.3 引物设计

根据山羊KiSS-1基因序列(GenBank登录号：GU142847和AB433789)和RFRP基因序列(GenBank登录号：JF327669)各设计1对表达检测引物，内参基因选用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)，其RT-PCR引物采用课题组成熟引物[20]，引物均由Invitrogen合成(引物序列见表1)。

表1 扩增目的基因与内参基因的引物信息

Table 1 Informations of primers amplifying target and internal control genes

基因引物Primer引物序列(5'-3')Sequence片段大小/bpSize退火温度/℃TmKiSS-1F:ATGAACGTGCTGCTTTCCTR:TCCGAGCTGCGAGCCTGTG11760RFRPF:GCCTTTCCAGACGGGTCCCAR:GGCAGGTCATGGAGTAAAGT14460GAPDHF:GAGAAACCTGCCAAGTATGAR:CGAAGGTAGAAGAGTGAGTG13960GAPDH(RT-PCR用)F:AGGCTGGGGCTCACTTGAAGR:ATGGCGTGGACAGTGGTCAT22359

1.4 RT-PCR扩增与测序

PCR体系为20 μL：含2×PCR Master Mix(博迈德，北京)10 μL，上、下游引物(10 mmol·L-1)各0.3 μL，cDNA 1.5 μL，ddH2O 7.9 μL。PCR程序：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，34次循环；72 ℃延伸5 min。扩增产物片段经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测后进行回收，连接pMD19-T载体(TaKaRa，大连)，转化大肠杆菌TOP10感受态细胞，每个基因片段挑选3个阳性克隆进行扩大培养，并送北京六合华大基因股份有限公司进行双向测序。

1.5 荧光定量

1.5.1 荧光定量PCR体系和程序 荧光定量PCR体系为15 μL：UltraSYBR Mixture (with ROX)(CWBIO，北京) 10 μL，上、下游引物各0.4 μL，cDNA 2.0 μL，无RNase H2O 7.2 μL。PCR程序：95 ℃ 预变性10 min；95 ℃ 变性15 s，60 ℃延伸60 s，40个循环；荧光定量PCR程序后做熔解曲线分析。

1.5.2 标准曲线的建立 取适合的cDNA样本，进行5倍等比稀释制备5个浓度梯度(1、1/5、(1/5)2、(1/5)3、(1/5)4)的cDNA样品。以这些cDNA模板对目的基因及内参基因进行荧光定量PCR，以获得的Ct值为纵坐标，以浓度梯度的对数值(10为底)为横坐标，绘制目的基因及内参GAPDH基因的标准曲线。

1.5.3 荧光定量与数据分析 荧光定量PCR全部在LC480荧光定量PCR机器上进行，每个样品重复检测3次，设置阴性对照(模板为H2O)，内参基因GAPDH。采用2-ΔΔCt法[21-22]计算相对表达量，运用SAS 8.1(ANOVA)分析基因表达差异。

2 结 果

2.1 RNA提取与cDNA合成

琼脂糖凝胶电泳检测发现，28S亮度大于18S，5S很淡(图1a)，表明RNA完整性好，无明显降解。以反转录产物cDNA为模板，进行GAPDH基因扩增，结果发现内参基因扩增良好(图1b)。

2.2KiSS-1与RFRP基因组织表达谱

KiSS-1、RFRP和GAPDH基因RT-PCR扩增结果如图2所示。济宁青山羊和辽宁绒山羊24个组织GAPDH内参基因均扩增良好，亮度基本一致，差异不明显。济宁青山羊KiSS-1基因主要表达于下丘脑、垂体、松果体、小脑、丘脑和脑桥等脑部组织及肾、卵巢、心、脂肪和甲状腺组织也有一定表达。辽宁绒山羊KiSS-1基因主要表达组织与济宁青山羊相似，但其子宫体有一定表达而卵巢表达很微弱。济宁青山羊RFRP基因主要表达于下丘脑、大脑皮层、小脑、卵巢和肺。辽宁绒山羊RFRP基因主要表达于下丘脑、垂体、大脑皮层、小脑、丘脑以及卵巢、心、肾、皮下脂肪和甲状腺等组织。

a.总RNA提取结果；b.部分组织GAPDH持家基因RT-PCR扩增结果：1～8.下丘脑、垂体、松果体、卵巢、子宫体、子宫角、甲状腺和脾；M.DNA marker Ⅰa.Gel electrophoresis of total RNA；b.RT-PCR amplification of housekeeping gene GAPDH in some tissues：1-8.hypothalamus，pituitary，pineal，ovary，corpus uteri，cornua uteri，thyroid and spleen，respectively；M.DNA marker Ⅰ图1 组织总RNA提取和反转录合成cDNAFig.1 The quality of total RNA and cDNA

a.济宁青山羊；b.辽宁绒山羊。1～24.下丘脑、垂体、松果体、大脑皮层、小脑、丘脑、海马、脑桥、延髓、卵巢、子宫体、子宫角、输卵管、肾上腺、肝、心、脊髓、肾、肺、胰、脾、骨骼肌、皮下脂肪以及甲状腺；M.DNA 相对分子质量标准a.Jining Grey goat；b.Liaoning Cashmere goat.1.Hypothalamus；2.Pituitary gland；3.Pineal；4.Cerebral cortex；5.Cerebellum；6.Thalamus；7.Hippocampus；8.Pons；9.Medulla oblongata；10.Ovary；11.Uterus；12.Uterine horn；13.Oviduct；14.Adrenal gland；15.Liver；16.Heart；17.Spinal cord；18.Kidney；19.Lung；20.Pancreas；21.Spleen；22.Skeletal；23.Subcutaneous fat；24.Thyroid；M.DNA marker Ⅰ图2 济宁青山羊与辽宁绒山羊KiSS-1、RFRP和GAPDH基因在各组织中的RT-PCR结果Fig.2 RT-PCR analysis of KiSS-1，RFRP and GAPDH gene expression in different tissues in Jining Grey goat and Liaoning Cashmere goat

2.3 山羊KiSS-1和RFRP基因在繁殖轴的表达水平

通过RT-PCR技术定性检测了KiSS-1和RFRP基因在两个山羊品种的表达情况，但结果很难精确定量，因而运用了荧光定量PCR技术对两个基因在下丘脑-垂体-卵巢和子宫等繁殖调控通路组织的表达水平进行了研究，结果见图3和图4。

KiSS-1基因除在济宁青山羊子宫中没有检测到表达外，两个山羊品种其他组织中均有表达。济宁青山羊KiSS-1基因在下丘脑中表达量最高，但与垂体表达量差异不显著(P>0.05)，而前两者表达量显著高于卵巢(P<0.05)。辽宁绒山羊垂体组织表达量显著高于其他组织(P<0.05)。两个品种相比较发现，济宁青山羊下丘脑表达量显著高于辽宁绒山羊(P<0.05)，而品种间其他组织KiSS-1基因表达无明显差异。

图中表达量标注相同字母表示差异不显著(P>0.05)，标注不同字母表示差异显著(P<0.05)。图4同The expression levels with the same superscript have no significant difference (P>0.05).The expression levels with the different superscripts differ significantly (P<0.05).The same as Figure 4图3 KiSS-1基因在卵巢、下丘脑、子宫、垂体组织中的表达水平Fig.3 Expression levels of KiSS-1 gene in ovary，hypothalamus，uterus and pituitary

图4 RFRP基因在卵巢、下丘脑、子宫、垂体组织的表达水平Fig.4 Expression levels of RFRP gene in ovary，hypothalamus，uterus and pituitary

RFRP基因在两个山羊品种下丘脑、垂体和卵巢中均表达，但在子宫组织没有检测到。济宁青山羊下丘脑RFRP基因表达量明显高于卵巢(P<0.05)，而卵巢高于垂体(P<0.05)。辽宁绒山羊下丘脑、卵巢和垂体RFRP基因表达无明显差异。两个品种相比较发现，济宁青山羊下丘脑RFRP基因表达量高于辽宁绒山羊(P<0.05)，而辽宁绒山羊垂体和卵巢表达量均显著高于济宁青山羊(P<0.05)。

3 讨 论

3.1KiSS-1基因表达与季节性繁殖

J.H.Lee 等[2]应用Northern杂交方法检测发现，人KiSS-1基因在胎盘中高表达，在肾和胰腺中有微弱表达，在心、大脑、肝、肺和骨骼肌中没有检测到表达。A.I.Muir等[23]用定量RT-PCR方法研究人20个组织及中枢神经18个部位KiSS-1基因的表达定位，同样发现胎盘KiSS-1基因表达量最高，并广泛表达于下丘脑、海马、丘脑、小脑和脊髓等中枢神经组织，不过表达量较低。臧猛等[24]克隆了长白和大白猪KiSS-1基因，并检测其在18种组织的表达情况，结果发现，KiSS-1基因在大脑、下丘脑、垂体、子宫、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、心、肝、肺、肾、肌肉和脂肪均有表达，仅卵巢和脾中没有检测到KiSS-1基因表达。本研究发现，山羊KiSS-1基因在下丘脑、垂体、松果体、小脑、丘脑和脑桥等多个脑部组织表达，同时肾、卵巢、心、脂肪和甲状腺也有一定表达，这与人类研究结果相似，但表达KiSS-1基因的内脏组织明显少于猪。

基于啮齿动物和绵羊KiSS-1基因在季节繁殖调控中的重要作用[25]，本研究针对山羊下丘脑-垂体-卵巢-子宫繁殖轴组织KiSS-1基因表达进行定量检测，与RT-PCR结果基本相符，同时在辽宁绒山羊卵巢检测到KiSS-1基因表达，这可能是定量PCR技术比RT-PCR更加灵敏所致；另外，济宁青山羊子宫没有检测到KiSS-1基因表达，与RT-PCR结果一致。品种对比研究发现，济宁青山羊下丘脑KiSS-1基因表达量显著高于辽宁绒山羊，而本研究中辽宁绒山羊处于非繁殖季节，而济宁青山羊常年繁殖，推测下丘脑KiSS-1基因的高表达可能是导致济宁青山羊与辽宁绒山羊繁殖季节性差异的原因之一。长日照繁殖动物叙利亚仓鼠置于短日照条件下8～10周后其睾丸变小，血液睾酮水平降低，下丘脑ARC和AVPV内KiSS-1基因mRNA表达均显著下调，KiSS-1神经细胞数量显著减少；而非季节性繁殖动物Wistar试验大鼠在长日照和短日照条件下丘脑ARC中KiSS-1基因mRNA表达水平相同，KiSS-1基因表达差异导致了啮齿动物繁殖季节性差异，这从侧面支持了本研究结果[26]。短日照繁殖动物绵羊在短日照时KiSS-1基因 mRNA表达量比长日照时(休情)要高[27-28]；而在休情季节，注射kisspeptin可促使80%的绵羊发情并排卵，表明kisspeptin是启动母绵羊季节性繁殖的关键因子[8]。Abadeh母山羊繁殖季节卵泡期下丘脑kisspeptin神经元明显多于黄体期和休情季节，而kisspeptin 10可以促进山羊促黄体素和睾酮的释放，这强有力地支持了本研究结果[29-31]。当然，本研究缺乏蛋白表达和短日照繁殖季节对比数据，需要进一步深入研究。

3.2RFRP基因表达与季节性繁殖

目前RFRP基因表达谱研究不多，T.Ikemoto等[32]研究发现，鸡RFRP基因mRNA仅表达于中脑，而在垂体、卵巢、睾丸等其他17种组织均无表达。甘超等[33]应用荧光定量PCR研究发现，天府肉鹅母鹅GnIH前体基因主要表达于下丘脑，延髓和脊髓也有一定表达，其他神经组织几乎无表达，在肾上腺、输卵管和卵巢也有一定表达。天府肉鹅4～5 mm直径卵泡GnIH基因表达量均高于其他各级卵泡，因而GnIH基因可能参与卵泡选择和闭锁的调控[34]。用半定量RT-PCR方法检测了新西兰白兔33种组织GnIHmRNA的表达，结果发现，GnIH在眼球壁、下丘脑、肝、肾和肾上腺表达较高，在垂体、脊髓、脑桥、小脑、延髓、海马、卵巢、睾丸、附睾、心、脾和胰也有表达[35]。原位杂交检测发现，绵羊RFRP基因在下丘脑内侧基底部、室旁核、背内侧核等广泛表达，仅腹中核没有表达[36]。本研究检测了两个山羊品种24个组织RFRP基因表达，结果发现，RFRP基因主要表达于山羊下丘脑、大脑皮层、小脑、卵巢，这与兔的研究结果相似；另外品种间表达组织存在一定差异，辽宁绒山羊垂体、皮下脂肪和甲状腺等组织均特异表达。

为阐明RFRP基因对山羊繁殖季节性的影响，本研究通过定量PCR方法分析了常年发情济宁青山羊和季节性发情辽宁绒山羊在春末时两品种下丘脑-垂体-卵巢(子宫)繁殖调控轴组织RFRP基因的表达差异，结果发现，RFRP基因均主要表达于下丘脑，这与家兔和绵羊等物种的研究结果相一致。然而，本研究还发现，常年发情济宁青山羊下丘脑RFRP表达量高于休情期辽宁绒山羊，这与其“GnRH抑制激素”之名并不符合。J.T.Smith等[37]研究也表明，RFRP基因表达升高很可能导致了Blackface母绵羊长日照条件的季节性休情，这与本研究结果正好相反。不过，对西伯利亚仓鼠和叙利亚仓鼠的研究表明，RFRP基因对哺乳动物繁殖活动具有激活作用[13，38]，下丘脑RFRP基因表达上调促成其长日照繁殖状态[39]。另外还有研究发现，绵羊RFRP基因表达变化可能并不与其繁殖活性有必然的关联性[40]。可见，RFRP基因对哺乳动物繁殖的作用尚无定论。T.Ubuka等[39]研究发现，给长日照时西伯利亚仓鼠注射RFRP1或RFRP3抑制其繁殖，而短日照时则激活繁殖，结果表明，RFRP基因只有适量表达才会激活繁殖，而表达过高或较低均抑制繁殖。因而，本研究结果较合理的解释是济宁青山羊常年发情特性可能与其下丘脑RFRP基因表达适量有关，而辽宁绒山羊季节性休情因下丘脑RFRP基因表达较低所致，当然这需要进一步验证。本研究中，济宁青山羊处于发情间期，其表达量较高还可能与发情周期所处阶段有一定关系，这可以从对大鼠和猪的研究结果中获得启示[41-42]。此外，本研究还发现，济宁青山羊卵巢和垂体RFRP基因表达量均显著低于辽宁绒山羊，RFRP基因是否通过外周组织而抑制山羊繁殖？S.Zhao等[43]研究发现，RFRP及其受体基因mRNA均在叙利亚大鼠精细胞和精子细胞表达，并受到日照长短和繁殖条件的显著影响，因而RFRP基因可能通过外周繁殖组织自分泌/旁分泌作用而参与繁殖调控。目前这方面研究很少，因而山羊卵巢和垂体组织RFRP基因表达与其繁殖季节性的关系值得深入研究。

4 结 论

山羊KiSS-1基因主要表达于下丘脑、垂体、松果体等脑部组织和肾、卵巢、脂肪和甲状腺组织，山羊RFRP基因主要表达于下丘脑、大脑皮层、小脑、卵巢和垂体等组织，山羊两基因组织表达谱存在一定的品种特异性。KiSS-1基因在常年发情济宁青山羊下丘脑表达显著高于季节性发情辽宁绒山羊，提示其可能对山羊季节性繁殖有重要的调控作用，山羊下丘脑KiSS-1基因高表达可能是非繁殖季节常年发情品种能够繁殖的原因。而下丘脑RFRP基因表达量与繁殖抑制或激活的关系需要深入的研究，RFRP基因在卵巢和垂体表达，并且济宁青山羊明显低于辽宁绒山羊，研究结果提示，RFRP基因可能通过下丘脑以外组织对山羊季节繁殖活动进行调控。

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(编辑 郭云雁)

Study on Expression ofKiSS-1 andRFRPGenes Related to Reproductive Seasonality in Goats

HUANG Dong-wei1，2，CHU Ming-xing1*，DI Ran1，LIU Qiu-yue1，HU Wen-ping1，WANG Xiang-yu1，PAN Zhang-yuan1，GUO Xiao-fei1

(1.KeyLaboratoryofFarmAnimalGeneticResourcesandGermplasmInnovationofMinistryofAgriculture，InstituteofAnimalScience，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193，China；2.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine，AnhuiAcademyofAgriculturalSciences，Hefei230031，China)

To elucidate the roles ofKiSS-1 andRFRPgenes in goat，their expression profilings in tissues and the expression levels in hypothalamus-pituitary-ovary (and uterus) were determined between Jining Grey goat (year-round estrus) and Liaoning Cashmere goat (seasonal estrus) by using RT-PCR and qRT-PCR methods，respectively.The results showed that：(i)KiSS-1 mRNA was detected in goat hypothalamus，pituitary，pineal，kidney，ovary，subcutaneous fat and thyroid，whileRFRPmRNA was detected in goat hypothalamus，cerebral cortex，cerebellum，ovary and pituitary，both of them had different tissue expression profilings between two goat breeds；(ii)KiSS-1 mRNA expression level was higher in hypothalamus for Jining Grey than that in Liaoning Cashmere goats (P<0.05)，while the expression had no significant difference in ovary and pituitary between 2 breeds (P>0.05)；(iii) The expression level ofRFRPmRNA was higher in hypothalamus of Jining Grey than that in Liaoning Cashmere goat (P<0.05)，while its expression in ovary and pituitary was opposite between 2 breeds (P<0.05).The present study suggests thatKiSS-1 gene may involve in regulating seasonal breeding in goats，but the effect (or the acting manner) ofRFRPgene in goat seasonal breeding need be further researched.The results lay the foundation for elucidating the function of goatKiSS-1 andRFRPgenes and provide reference for revealing the genetic mechanism of reproductive seasonality in goat.

goat；reproductive seasonality；KiSS-1；RFRP；expression

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.06.007

2014-08-27

中国农业科学院科技创新工程(ASTIP-IAS13)；国家自然科学基金项目(30871773)；国家肉羊产业技术体系专项(CARS-39)；转基因生物新品种培育重大专项课题(2014ZX08010005-003)

黄冬维(1981-)，男，湖南长沙人，助理研究员，博士，主要从事草食动物遗传育种与健康养殖研究，E-mail：hdwwxf@163.com

*通信作者：储明星，博士，研究员，博导，E-mail：mxchu@263.net

S827；S813.3

A

0366-6964(2015)06-0924-08