牛蒡子苷浓度对其纯度测定的影响

申琳曲佳

天津中医药大学第二附属医院(天津300150)

牛蒡子苷浓度对其纯度测定的影响

申 琳曲 佳△

天津中医药大学第二附属医院(天津300150)

目的:研究牛蒡子苷浓度对纯度测定的影响。方法:分别研究了对照品浓度对测定的杂质数量、主峰面积、回归系数及纯度的影响。结果:表明浓度对纯度分析有较大影响，随着浓度增加，测出的纯度下降。结论:牛蒡子测定纯度的适宜浓度为1.0mg/mL～2.0mg/mL。

化学对照品是新药质量研究、药品质量检测和质量控制使用的实物对照，可用于确定药品的真伪，评价药品质量的优劣，进而控制药品生产、供应、储存、使用过程中的质量。用对照品作为标准参照物对药品质量进行评价，可以保证分析测试质量，且测试结果具有可溯源性、准确性与合法性。 对照品的质量直接影响到检验样品的结果。纯度指物质含杂质多少的程度，是物质单一程度的表征参数，作为传递量值的化学对照品，其本身的纯度对被测物质的量值的准确性是至关重要的[1-5]。纯度分析是化学对照品建立、标定过程中的一个重要内容。

在采用HPLC色谱归一化法纯度测定时，对照品浓度选择是一个重要问题，目前，作者未见文献报道。本文以牛蒡子苷为例，就对照品浓度对液相色谱法测定纯度的影响展开研究。

1 仪器与试剂 SHIMADZU(岛津)LC-2010CHT高效液相色谱仪，Solution工作站；牛蒡子苷(中国药品生物制品检定所，批号：110819-200404，供含量测定用)；甲醇为色谱纯(天津市康科德科技有限公司，130812)，水为去离子水(实验室自备)。

2 方 法 2.1 标准溶液的制备 取牛蒡子苷对照品适量，用甲醇制成浓度为4.1864 mg/mL的对照品溶液，然后分别稀释为0.041864 mg/mL、0.083728 mg/mL、0.167456 mg/mL、0.41864 mg/mL、1.0466 mg/mL、2.0932 mg/mL的对照品溶液。

2.2 色谱条件 色谱柱：DiamonsilTMC18(250×4.6 mm，5 μm)。流动相：甲醇—水(1∶1.1)；检测波长：280nm；进样量：10μL[6]。

2.3 测定方法 按照面积归一化法计算主成分含量及杂质含量，每个浓度的对照品溶液分别测三次，计算平均峰面积，测量精密度用相对平均偏差RAD表示。

3 结 果 3.1 浓度对杂质数量的影响 经查阅文献及《中国药典》，有关测定牛蒡苷含量的药品中大部分用0.1～0.2mg/mL这个浓度。依据与取溶解牛蒡苷对照品的甲醇溶剂为空白溶液相比较，以10μL为进样量，将不同浓度的对照品溶液与空白溶液相比较，得出杂质个数。表1列出了不同浓度下的对照品溶液中检测出的杂质数量。从表1可以看出，当浓度较小时，检测出杂质的数量少，因为部分杂质由于浓度非常小，不能被检出。随着对照品浓度的增大，检测出的杂质数量逐渐增加，当浓度达到0.83728mg/mL时，检测出杂质的数量达到5个，此后，杂质数量不再随着浓度的增大而增加。这表明当浓度达到0.83728mg/mL时，可以完全检测出对照品溶液中的杂质。图1、2分别是对照品浓度为0.167456 mg/mL、1.0466 mg/mL时的液相色谱图，具有代表性，且这两个图图形分离度好，清晰，故选取这两个浓度下的色谱图。

3.2 浓度对主峰面积的影响 浓度对主峰面积的影响见表2。从表2中可见，随着对照品浓度的增加，主成分峰面积呈等比例增加。当浓度达到2.0932mg/mL时，峰面积与对照品浓度逐渐不再呈等比例增加。这主要是因为紫外检测器的作用原理是基于被分析试样组分对特定波长紫外光的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关系遵守比尔定律。比尔定律仅适用于稀溶液。随着浓度的增加，逐渐偏离了比尔定律。

表1 对照品浓度与检出杂质数量

浓度(mg/mL)杂质数量0．04186420．08372830．16745630．4186440．8372851．046652．093254．186456．27965

图1 牛蒡子苷(浓度为0.167456 mg/mL)液相色谱图

图2 牛蒡子苷(浓度为1.0466 mg/mL)液相色谱图

表2 对照品浓度与主成分峰面积

3.3 浓度对回归系数的影响 从浓度0.83728mg/mL～6.2796mg/mL，HPLC均检测出5个杂质，但随着浓度的增加其相关系数逐渐下降，不成线性。因此，选择5～9这五个浓度作为测试点。根据对照品的浓度及对应的峰面积，做出标准曲线，以下为选择不同数量的试验点及其对应的标准曲线的回归方程及其回归系数。从表3中可以看出，随着试验点数的增加，回归系数值下降。

表3 回归系数与试验点数的关系

试验点回归方程回归系数5y=13667597．84x+110545．360．99986y=13451128．30x+152149．470．99987y=12143483．52x+601596．080．99788y=8996402．83x+2294172．380．98129y=7079651．83x+3768594．390．9683

3.4 浓度对纯度的影响 不同浓度下计算出的主成分含量及杂质含量结果见表2。从表中可以看出，随着对照品浓度的升高，计算出的主成分含量降低。尤其是当浓度达到6.2796mg/mL时，测出的主成分含量下降明显。这也是因为对照品浓度过高，主成分峰面积并没有随浓度呈等比例增加，而杂质的峰面积却呈等比例增加，当浓度高时，现象尤为严重。因此，在选择浓度时，不宜过高。

4 结 论 本文考察了牛蒡子苷浓度对液相色谱分析其纯度的影响，结果表明浓度对纯度分析有较大影响，随着浓度增加，测出的纯度下降。当浓度过低时，部分杂质不能被检出。合适的测定浓度为1.0mg/mL～2.0mg/mL之间。在此范围内，不仅所有的杂质都可以检测到，而且主成分峰面积与浓度呈等比关系。

[1] 张潮林,徐文杰,沈雪梅.中国药典2005年版中药对照品的应用[J].齐鲁药事,2007,26(1): 29.

[2] 王国荣,石上梅,张庆生.世界卫生组织有关化学对照品建立、保存及分发情况介绍[J].药物分析杂志,2002, 22(6):491.

[3] 申兰慧,王 丽,陈国清.化学对照品色谱纯度检测的影响因素[J].中国药事,2012,26(3):235-237.

[4] 朴君红,崔永学.药品检验中对照品使用的常见问题探析.中国现代药物应用,2011,5(19):135.

[5] 孙文基.中药新药研究中的化学对照品[J].中国新药杂志,2001,10(4):305.

[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:67.

(收稿2014-09-18；修回2014-10-23)

The study of the concentration of Arctiin on its purity determination

Second Affiliated Hospital of Tianjin University of TCM(Tianjin 300150)

Shen Lin Qu Jia

Objective：To study the influence of the concentration of Arctiin on its purity determination. Methods：The influences of concentration on the number of impurity, on the main peak area, on the regression coefficient and on the purity were studied respectively. Results：The results showed that the concentration had a large influence on the purity determination.Conclusion：The suitable concentration is between 1.0 mg/mL and 2.0 mg/mL.

Arctiin Chromatography,high pressure liquid

牛蒡子苷 色谱法，高压液相

R94

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.03.046

△天津市药品检验所(天津 300070)