犬精液的采集、处理及人工输精操作

冯 勇

(黑龙江省鸡东县向阳镇畜牧兽医站158200)

1 犬人工授精的必要性

犬是最早用于人工授精研究的动物，但发展和其他家畜相比稍显缓慢。在许多发达国家，人工授精繁育的小犬如要注册犬类系谱，需要先报经注册中心同意。因此在许多西方国家，犬的人工授精一般只在以下两种情况下进行: 第一，不能进行交配的犬只; 第二，公母犬距离太远，位于不同地区或不同国家。

与大多数其他动物一样，犬人工授精数量正在显著增加，目前已经建立了非家养犬科动物的人工授精中心，用于保种或商业目的。

2 精液采集与处理

对公犬的精液采集通常采用手指按摩法，也可在全身麻醉的情况下使用电刺激法采精。收集前精液、富精子部分和少量后精液(前列腺液) 。可将全部射出的精液输入母犬的阴道内，但通常需要将鲜精进行稀释，以便多次输精或为多只发情母犬输精。当使用完全精液时，应尽量减少前列腺液的收集量。根据需要，可将犬的精液做冷藏或冷冻保存。

3 输精操作

液态保存精液的输精: 由于犬不能交配而对犬施行人工授精时，可采用手指按摩法采集犬的精液，用原精立即输入母犬的阴道内，也可以稀释后输入一部分，剩余稀释精液在48 h 内使用。同样，采用冷藏精液给母犬输精时，可在获得精液时及48 h 后输精。在采精前应确保母犬接近发情期的可受配期。

采用鲜精或冷藏精液时，可进行阴道内输精，尽可能把精液输到子宫颈外口(Burke，1986) 。可采用截短了的牛用输精导管，使用犬用阴道开张器引导输精导管到正确位置。有人建议，在输精后模仿公、母犬“锁结”的情况，把一两根手指插入母犬阴门，刺激雌性生殖道出现交配时的生殖道的活动。目前有一种Osiris 输精导管，在管外套有Foley 充气球(Nianski，2006) ，输精时充入气体，既可模仿自然交配时母犬阴道锁紧公犬阴茎，又可以阻止精液回流。但是还没有证据表明，这种输精导管与常用输精导管相比可多大程度提高受胎率。无论采用何种方法输精，输精后几分钟内应将母犬后躯抬高，防止精液回流。

冻精解冻后输精: 冷冻精液在阴道内输精的受胎率低于子宫内输精。因此，目前推荐采用的方法是通过子宫颈，或直接通过外科手术或腹腔镜将精液输入子宫内。根据国外的报道，犬子宫内输精的产仔率接近85%，而阴道内输精只有60%左右。但是，阴道内多次输精可以提高受胎率，子宫内多次输精意义不大。使用Osiris 输精导管阴道内输精，受胎率仍然只有60% 左右(Nianski，2006) 。由于母犬阴道和子宫颈管较长，子宫颈外口位置不易掌握，输精导管很难穿过子宫颈管。使用挪威型输精器(外部为聚四氟乙烯树脂套管，套管内是一根直径约2 mm 输精管) 可成功进行子宫内输精，不过掌握这种输精器的使用技术需要进行大量的操作实践，掌握后方能熟练进行。

有国外学者描述的子宫内输精方法如下: 母犬站立，一般不使用镇静剂，一只手经腹壁固定子宫颈，另一只手将输精导管穿过子宫颈进入子宫。输精后，保持塑料套管与套管内输精管闭合，并抬起母犬后躯，避免精液回流。可用内窥镜定位子宫颈外口，辅助固定子宫颈。需要说明的，中等大小母犬的输精比较容易，过度肥胖的母犬输精较为困难。在操作人员对子宫颈输精方法还不熟练的情况下，也可以通过外科手术或腹腔镜输精。

4 输精时间的正确把握

母犬对公犬表现性接受行为的时间较长，但可受精时间却相对较短。因此，要得到最好的输精效果，必须准确把握排卵时间。自然交配时，许多配种人员只允许在母犬出现发情前出血的12 d 后进行一次交配。与使用冷藏精液输精比较，使用冷冻精液更需要确定最适输精时间。公犬自身的生育力也非常重要，精子在产道中的存活力是决定受胎率的关键因素。存活时间长的精子即使不是在最佳时间输精也可以使母犬妊娠，而存活时间短的精子则可能在母犬尚未排卵之前即已死亡而不能使母犬受孕。

母犬的孕酮和LH 浓度在排卵前升高，测定其浓度变化，可以预测排卵时间。也可以用超声波检查卵巢，确定排卵时间。观察阴道的细胞学变化预测排卵时间不够准确，尤其对采用冻精输精不适宜。在发情期开始以后(或出现高比例的阴道角化上皮细胞以后) ，每天检测血中孕酮浓度可以准确预测排卵时间。孕酮在LH 出现峰值时由基础浓度增至2.0 ～3.0 ng/mL，排卵时上升到4.0 ～8.0 ng/mL，排卵后2 d 上升到10 ～25 ng/mL。因此，孕酮浓度的第一次上升可以作为LH 峰值出现的指示。还可以通过生物测定法(如半定量测定LH) 直接测定血清和尿中LH(Durrant 等，2006) ，输精最好是在排卵后2 ～3 d 进行。研究表明，在最佳时间输精的产仔率(78%) 和窝产仔数(5.8 ±0.2 个)均高于延迟输精(分别为56%和4.5 ±0.5 个) 时。