两种不同厂家ELISA试剂检测抗-HIV结果的差异性分析*

朱浩稳，徐 飞，徐国锋，李 勇，邹国英，任碧琼

(湖南省第二人民医院/湖南中医药大学临床医学院，长沙 410007)



·论 著·

两种不同厂家ELISA试剂检测抗-HIV结果的差异性分析*

朱浩稳，徐 飞，徐国锋，李 勇，邹国英，任碧琼△

(湖南省第二人民医院/湖南中医药大学临床医学院，长沙 410007)

目的 探讨不同厂家酶联免疫吸附试验( ELISA) 试剂检测人免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)结果的差异性。方法 同时用两种不同厂家生产的第3代ELISA抗-HIV初筛试剂检测日常标本，初筛阳性结果的标本再用原来的试剂双孔复检排除假阳性，复检阳性的标本送确认实验室做免疫印迹试验(WB试验)确认。结果 用A、B两种试剂共检测30批次2 166例标本，经复检A、B两种试剂仍为阳性的标本数分别为9例和19例，其中A、B两种试剂共同阳性反应的标本6例；WB试验确认2例阳性，为A、B两种试剂同时阳性。单独A试剂的阳性预测值为22.22%(2/9),单独B试剂的阳性预测值为10.53%(2/19)，两种试剂双阳性标本的阳性预测值为33.33%(2/6)。结论 不同厂家ELISA试剂检测抗-HIV结果的阳性预测值有较大差异,同时采用两种试剂检测临床标本能提高阳性预测值。

酶联免疫吸附试验; 抗体; 人免疫缺陷病毒; 阳性预测值

人免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)自1983 年被发现以来,科学家们已进行了大量研究,建立了各种检测方法。抗-HIV检测是临床筛查HIV感染的常用手段,且为目前国内出入境人员、献血员等筛查的血清学标志[1]。目前酶联免疫吸附试验( ELISA )抗-HIV 检测试剂盒采用高纯度重组HIV(1+2型)抗原包被固相,以间接法进行测定。由于上述HIV包被抗原的组合、来源及数量等方面的差异,可能会造成使用不同生产厂家ELISA试剂盒测定结果出现较大的差异[2]。为此,本研究用两种不同生产厂家的ELISA试剂盒对临床标本抗-HIV进行检测,对测定结果进行比较，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2015年1～2月湖南省第二人民医院30个工作日临床标本共2 166例，所有标本均空腹采血,无溶血、黄疸、脂浊。标本采集当日及时检测。

1.2 试剂与仪器 抗-HIV ELISA 诊断试剂盒分别来源于A、B共两种不同厂家的试剂，主要设备为全自动ELISA酶标仪Addcare ELISA 600。

1.3 诊断标准 对于非急性HIV感染患者，抗-HIV初筛试验阳性，并经免疫印迹试验(WB试验)证实抗-HIV为阳性的，诊断为HIV感染。

1.4 检测过程 连续30个工作日对临床标本的抗-HIV项目采用A和B两种不同厂家的ELISA试剂对抗-HIV进行检测。操作方法和结果判断均严格按各试剂盒说明书在Addcare ELISA 600全自动ELISA酶免疫分析仪上进行编程控制操作。

1.5 统计学处理 采用SPSS 18.0统计软件进行数据处理，计数资料比较采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 30个工作日共计检测2 166例标本,A试剂复检阳性数9例,B试剂复检阳性数19例，采用χ2检验二者比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两种试剂检测抗-HIV结果(n)

2.2 A试剂和B试剂共同阳性标本6例，A试剂单独阳性标本3例，B试剂单独阳性标本13例，共计22例阳性标本经过WB试验确认只有两种试剂共同阳性标本中有2例阳性，阳性预测值为33.33%(2/6)，A试剂和B试剂单独阳性的标本经过WB确认试验无阳性标本，见表2。

表2 两种试剂的阳性预测值比较

3 讨 论

在临床工作中，输血前检测抗-HIV是防止输血感染HIV病毒传播的主要方法。通过血清抗-HIV指标检测可以为相关血源性感染的疾病提供依据[3]。

筛选献血者血液抗-HIV以保证输血安全，保障患者健康，因此必须要求筛选试剂有好的灵敏度；筛选受血者的血液抗-HIV指标，以保障医务人员的健康，预防职业暴露，减少医疗纠纷的发生，同样要求筛选试剂有好的灵敏度[4]。

为了比较抗-HIV筛查试剂的灵敏度，本研究对日常标本同时用两种试剂进行检测，本文结果显示，两种不同厂家ELISA试剂的灵敏度均达到100.0%(2/2)，说明这两种试剂具有相同的检测能力，但A试剂的初筛阳性率明显比B试剂低，差异有统计学意义(P<0.05)。究其原因是因微孔条上预包被的高纯度重组HIV(1+2型)抗原的来源不同引起的。

从本文试验结果可知，两种初筛试剂均存在一定比例的假阳性，可能与下列因素有关[5]：(1)ELISA检测抗体过程中可能存在其他抗体(如类风湿因子、抗链球菌溶血素O、C反应蛋白、抗核抗体等)的干扰，或存在非特异性反应原发生非特异性吸附作用，导致假阳性出现。(2)标本溶血、血样交叉污染、红细胞内酶类物质的非特异性反应等也可导致假阳性反应。(3)某些厂家在研发生产试剂的过程中，有意识地提高试剂的敏感性，导致试剂本身敏感性过高而特异性降低造成假阳性。(4)初筛试验采用ELISA，而确证试验采用WB试验，其检测原理不同，因此二者结果也存在差异。(5)试验过程未完全按操作规程进行操作，如孵育温度、时间未达要求、洗板不充分、加样过程中出现拖带等现象。

本研究结果发现，两种初筛试剂呈单项阳性与WB试验的阳性符合率为0.00%，两种初筛试剂呈双阳性与WB试验的阳性符合率为33.33%，提示两种抗-HIV试剂联合应用，可提高阳性预测值。阳性预测值对于血站的献血员来说，能避免因出现过多假阳性结果而使血液报废或血源流失；对于医院患者来说，能减轻心理负担，减少患者痛苦[6]。

临床抗-HIV的假阴性结果对患者和医护人员的危害性比假阳性更加严重。假阴性会使患者延误病情，会导致献血员传播疾病，对于医护人员可能会导致医疗纠纷，发生职业暴露[7]。ELISA试剂导致假阴性可能与下列因素有关：(1)标本中含有酶抑制剂可抑制ELISA试剂中的辣根过氧化物酶活性导致假阴性。(2)标本保存不当，在冰箱中保存过久，血清中IgG可聚合成多聚体，导致抗原抗体活性减弱。(3)抗-HIV浓度过低易受加样时间、试剂平衡时间、溶血程度的影响而出现假阴性。(4)急性感染的窗口期，患者血清中未出现抗-HIV。(5)标本凝固导致机器或人为因素未加到样品或加样过少，样品孔中未加入酶或加酶过少。两种抗-HIV试剂的应用能减少因素(2)、(3)、(5)3种情况发生，从而减少由于偶然因素导致的假阴性发生，提高灵敏度，提高防范医疗纠纷的等级[8]。

不同厂家的试剂抗-HIV检测的阳性率不同，影响ELISA阴、阳性结果的因素多种多样，假阳性与假阴性的发生除试剂原因、患者标本原因外，还应考虑可控制因素，因此在实际工作中应重视抗-HIV检测试剂的选择和质量控制。实验室在提高检验科工作人员的素质，建立严格的实验室质量管理体系的同时，还可以使用两种试剂检测抗-HIV，利用串联试验的互补性来提高阳性预测值，减少假阴性发生。

[1]余桂华，李建华.街头献血与团体献血人群HIV感染状况分析[J].云南医药,2015,58(2):212-214.

[2]李秀姿,廖衍强,吕庆良.不同试剂检测艾滋病抗体结果对照[J].吉林医学,2015,58(10):1999-2000.

[3]潘艳,徐红,郑兆丽,等.受血患者血清感染性指标检测与分析[J].中华医院感染学杂志,2015,25(7):1673-1674.

[4]熊丽红,钱榕,樊璐.四种HIV试剂的应用比较分析[J].实验与检验医学,2013,31(4):392-393.

[5]吕涛,龚文胜,朱顺玲.HIV抗体初筛实验假阳性1例[J].中国艾滋病性病,2015,21(3):238-239.

[6]李雪群,钟展华.抗HIV抗体单试剂反应性献血者归队可行性的调查分析[J].实验与检验医学,2015,33(2):246-247.

[7]屈丹,梁进娟,刘育新,等.医务人员职业暴露因素调查与预防措施[J].中国消毒学杂志,2015,32(5):473-474.

[8]刘建敏,董雪,李欣,等.沈阳市2013年HIV抗体初筛阳性标本的复检及确证结果分析[J].中国卫生检验杂志,2015,25(6):844-845.

Analysis of the differences between the results of two ELISA kits in the detection of anti-HIV*

ZHUHao-wen，XUFei，XUGuo-feng，LIYong，ZOUGuo-ying，RENBi-qiong△

(SecondProvincialHospitalofHuman/CollegeofClinicalMedicine,HunanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Changsha,Hunan410007,China)

Objective To explore the differences of the results of ELISA kits provided by different manufacturers in the anti-HIV detection.Methods Two kinds of third generation ELISA kits for anti-HIV screening provided by different manufacturers were used for routine sample detection.For the samples with positive results in screening,the original reagents were used to retest with double-hole,in order to eliminate false-positive.And the samples with positive results in retest were sent to confirmation laboratory to confirm the results by Western blot (WB).Results 2 166 samples of 30 batches were respectively detected by using reagent A and B.After retest,there were 9 and 19 cases of positive samples respectively detected by reagent A and B,and among them there were 6 cases of samples with positive results detected both by reagent A and B.There were 2 cases of positive samples confirmed by WB,which were positive detected both by reagent A and B.The positive predictive values of reagent A and B were 22.22%(2/9) and 10.53%(2/19) respectively.The positive predictive value of both of reagent A and B was 33.33%(2/6).Conclusion The positive predictive values of different anti-HIV ELISA kits from different manufacturers were significantly different.And the positive predictive value could be improved by using both of reagent A and B.

ELISA; antibody; human immunodeficiency virus; positive predictive value

国家卫计委医药卫生科技发展中心科技资助项目(28-6-7)；湖南中医药大学省级优秀团队建设资助项目(2013)；湖南省第二人民医院重点专科基金资助项目(2012)。

朱浩稳，男，本科，主任技师，主要从事临床生化与免疫学检验工作。△

，E-mail：13808481211@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.24.007

A

1672-9455(2015)24-3629-02

2015-06-15

2015-08-13)