不同时间、不同混合液浸提西瓜叶绿素含量的研究

崔丽红，黄蔚

（湘西民族职业技术学院，湖南吉首，416000）

叶绿素是一类与光合作用有关的重要色素，其含量是植物重要的一项生理指标。叶片是植物进行光合作用的场所，其叶绿素含量的高低是光合作用的效率和质量的直接反映，因此叶绿素含量可一定程度上反映植物的生长发育状况。对于大果型的西瓜而言，光合作用是西瓜产量形成的最重要保证。因此，西瓜叶绿素含量对西瓜生产至关重要。

早期被国际上广泛采用的Arnon 法提取叶绿素，过程繁琐、工作量大，且叶绿素易受光氧化而导致试验误差[1]。陈福明等[2]提出的混合液浸提法，却均由于提取时间较长，提取液稳定性较差，测定值偏低而未被广泛采用。刘绚霞等[3]进行了油菜叶绿素提取方法的研究，结果表明，丙酮∶乙醇为2∶1 混合液提取油菜叶绿素效果较好，操作简单、提取完全、误差小、效率高。本试验在前人研究的基础上，在室温条件下，利用不同时间、不同混合液浸提叶绿素，以期筛选出测定西瓜叶片叶绿素所需的最佳时间和最佳提取液，为西瓜田间大量样本叶绿素含量的测定提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试品种为州职一号，2015 年3 月24 日播种，当幼苗长至4 叶1 心时，随机抽取瓜苗，取第2～3片真叶，洗净，吸干叶片表面水分，去除叶柄、大叶脉后剪碎混匀。

表1 不同浸提时间、不同混合液测定的叶绿素含量比较

采用752 紫外可见分光光度计测定吸光度，丙酮、95%乙醇、甲醇等试剂均为分析纯，试验用水为蒸馏水。

1.2 试验方法

提取液设5 个处理，分别为80%丙酮+20%蒸馏水；50%丙酮+50%乙醇；45%丙酮+45%乙醇+10%蒸馏水；50%丙酮+50%甲醇；45%丙酮+45%甲醇+10%蒸馏水。每份称取0.2 g，剪碎，在室温下放入具塞试管，10 个为一组，室温暗室下分别加入5种混合提取液2 mL 浸提叶绿素，并不时摇动，8 h 后每隔4 h（即8、12、16、20、24、28 h）每种混合提取液各取出2 支试管，定容至20 mL 然后在663 nm 及645 nm 波长下测定吸光度值（以蒸馏水为空白，调整吸光度值至0），根据Lambert-Beer 定律，计算鲜样中叶绿素a 和叶绿素b 的含量[4]。

图1 5 种叶绿素提取液吸收的光谱

2 结果与分析

2.1 不同浸提时间、不同浸提液对测定叶绿素含量的影响

从表1 可以看出，在室温（23℃）下浸提西瓜叶绿素，不同时间、不同混合液表现出相同的趋势，即50%丙酮+50%乙醇、50%丙酮+50%甲醇的混合液提取效果比同类加蒸馏水的好，提取的叶绿素含量相对较多且时间较短；单一的80%丙酮+20%蒸馏水提取叶绿素最慢且含量最低，这与陈洪国等[5]的研究结果一致，表明混合液提取叶绿素比单一的提取液好，且时间较短。

2.2 不同时间各提取液吸收光谱的比较

从图1 可以看出，5 种叶绿素提取液的吸收光谱中，50%丙酮+50%乙醇、50%丙酮+50%甲醇的趋势基本一致，所对应的波长663 nm 及645 nm 的最高值均在16 h 出现，其后逐步下降；45%丙酮+45%乙醇+10%蒸馏水、45%丙酮+45%甲醇+10%蒸馏水的趋势也基本一致，但其所对应的波长663 nm 及645 nm 的最高值均在20 h 出现，其后开始下降；80%丙酮+20%蒸馏水对应的波长663 nm 及645 nm的最高值均在24 h 出现，峰值出现时间最晚，表明此提取液提取叶绿素耗时最长，所提取的叶绿素含量最少，至于具体原因有待进一步研究。

3 讨论与结论

混合液浸提法所得的叶绿素含量明显高于单一的浸提液，且提取时间相对较短，其中以混合液50%丙酮+50%乙醇浸提所得叶绿素的含量最高。试验中，单一的80%丙酮+20%蒸馏水浸提所得叶绿素含量最低，且浸提时间最长。这表明丙酮与乙醇混合提取叶绿素存在协同效应，且等比例等摩尔混合时效果最佳，在波长663 nm 及645 nm 的最高值出现时间最早。因此，在西瓜田间大量样本叶绿素测定时，可采用50%丙酮+50%乙醇提取。

[1]张志良，瞿伟菁.植物生理学实验指导.2 版[M].北京：高等教育出版社，2003，67-70.

[2]陈福明，陈顺伟.混合液法测定叶绿素含量的研究[J].林业科技通讯，1984（2）：4-8.

[3]刘绚霞，董振生，刘创社，等.油菜叶绿素提取方法研究[J].中国农学通报，2004，20（4）：62-63.

[4]徐芬芬，叶利民，徐卫红，等.小白菜叶绿素含量的测定方法比较[J].北方园艺，2010（23）：32-34.

[5]陈洪国，姜军权.不同浸提温度、时间及浸提剂对测定叶绿素含量的影响[J].咸宁学院学报，2005，25（6）：77-78.