白藜芦醇对β淀粉肽1～42刺激内皮细胞炎症因子表达的影响＊

李焱平，刘礼富，胡高强，张 静，姜 鲜△

（1．四川省泸县人民医院检验科646100；2．泸州医学院附属医院麻醉科，四川泸州646000）

β淀粉样蛋白（βamyloid protein，Aβ）沉积导致血管内皮损伤是阿尔茨海默病（alzheimer disease，AD）发病机制之一［1］。白藜芦醇是多年生草本植物蓼科蓼属虎杖的根茎中的提取物，分子式为C14H12O3，相对分子质量为228．25，白色针状晶体［2］。广泛存在于葡萄、花生、虎杖等天然食物或药物中，以虎杖中含量最高，具有抗炎、抗血小板聚集、抗氧化等生物药理活性［3－4］。但是白藜芦醇能否减少 Aβ1～42致人脐静脉内皮细胞（HUVEC）炎症因子释放，提高 Aβ1～42刺激后 HUVEC活性目前还不清楚。据此，本文通过观察不同剂量白藜芦醇对Aβ1～42刺激后 HUVEC细胞活性及炎性因子IL－6、IL－1、TNF－α释放关系，为白藜芦醇用于治疗AD提供科学依据。

1 材料与方法

1．1 试剂与仪器 HUVEC细胞株（上海拜力生物试剂有限公司）；白藜芦醇（成都普瑞法科技开发有限公司，批号：20130409，纯度大于95%）；IL－1、TNF－α、IL－6ELISA 试剂盒（晶美生物工程有限公司）；Aβ1～42（北京奥普森有限公司）；CCK－8试剂盒（碧云天生物技术研究所）；超净工作台（苏州净化设备有限公司，SW－CJ－1F型）；倒置相差显微镜（日本Olympus公司，CKX41型）；酶标仪（美国BIO－RAD公司，550型）。

1．2 CCK－8法检测白藜芦醇对 Aβ1～42干预后 HUVEC细胞活性影响 将Aβ1～42在37℃孵育1周使其变为聚集状态备

用，HUVEC细胞株采用RPMI 1640＋10%胎牛血清＋青链霉素培养［5］。将对数生长期的 HUVEC按1×105／L接种。每个浓度3个复孔，选择 Aβ1～425×101μmol／L刺激24h作为HUVEC细胞凋亡模型，将细胞分为模型组（Aβ1～42＋细胞），白藜芦醇组（白藜芦醇160、80、40、20μg／L＋ Aβ1～42＋细胞），阴性组（细胞＋培养基），24h后每孔加入CCK－8 10μL继续培养1h，酶标仪450nm波长下检测各孔吸光度值，以OD450值反应细胞活力情况，连续重复3次。

1．3 ELISA法检测白藜芦醇对Aβ1～42干预后 HUVEC的IL－1、IL－6和TNF－α影响 将各组处理24h后取上清液，严格按照说明书进行操作，450nm处测量OD450值。

1．4 统计学处理 用SPSS16．0统计软件进行分析，计量资料采用x±s表示，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结 果

2．1 白藜芦醇对Aβ1～42刺激 HUVEC后细胞活性影响 阴性组细胞活性明显强于模型组，差异有统计学意义（P＜0．05）；白藜芦醇各亚组均可改善Aβ1～42刺激后HUVEC细胞活性，差异有统计学意义（P＜0．05），见图1。

2．2 白藜芦醇对 Aβ1～42刺激 HUVEC的IL－1、IL－6和 TNF－α影响 与模型组比较，阴性组IL－1、IL－6和TNF－α表达较低，差异有统计学意义（P＜0．01）。白藜芦醇各亚组干预后可减少 Aβ1～42刺激后 HUVEC的IL－1、IL－6和TNF－α的分泌，差异有统计学意义（P＜0．01），见表1。

表1 白藜芦醇对 Aβ1～42刺激 HUVEC后IL－1、IL－6和TNF－α的影响（x±s，pg／mL）

图1 白藜芦醇对Aβ1～42刺激HUVEC后细胞活性情况

3 讨 论

白藜芦醇在脑缺血及再灌注损伤、神经退行性疾病和癫痫发作等神经系统疾病的防治上有一定作用［6－7］。Aβ致血管内皮炎症反应，细胞凋亡可能是产生AD的原因之一［8］。但Aβ如何致血管内皮的过程与机制目前并未完全清楚，有人认为可能与Aβ致血管内皮细胞细胞凋亡，产生炎症反应等有关［9］。研究显示Aβ聚集和沉积激活小胶质细胞并产生TNF－α，诱导胞内产生过多氧自由基，损伤神经元［10］。胶质细胞的活化还可导致IL－1的过度表达和释放，继而诱发IL－6、γ－干扰素（interferon－γ，INF－γ）等细胞因子的表达［11］，这些分子通过作用于胶质细胞或神经元，形成交互作用影响胶质细胞或神经元，促成了慢性炎症产物贯穿AD病理损伤的不同阶段，并在病理发展的全过程中发挥作用［12－14］。

HUVEC较为稳定，易于实验操作，故本研究选择HUVEC作为研究。CCK－8结果显示白藜芦醇4个浓度组可以增加Aβ刺激血管内皮细胞后存活率，减轻Aβ致血管内皮细胞损伤；抑制 Aβ致 HUVEC的IL－1、IL－6与TNF－α表达。

综上所述，白藜芦醇能提高Aβ刺激后HUVEC细胞活性，此作用可能与减少炎症因子IL－1、IL－6与TNF－α的产生有关，在防治AD上有一定意义。

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