HOST2和HOTAIR在上皮性卵巢癌中联合检测的意义

汪先桃，刘　静，曾照芳（.四川省成都市龙泉驿区第一人民医院，四川　成都　6000；.重庆医科大学，重庆　40006）

HOST2和HOTAIR在上皮性卵巢癌中联合检测的意义

汪先桃1，刘静1，曾照芳2
（1.四川省成都市龙泉驿区第一人民医院，四川成都610100；2.重庆医科大学，重庆400016）

［摘要］目的：探讨HOST2和HOTAIR 在上皮性卵巢癌组织中联合检测的意义。方法：应用荧光定量PCR检测21例上皮性卵巢癌和21例上皮性正常卵巢组织的表达情况。结果：HOST2在上皮性卵巢癌组和正常卵巢组阳性率分别为90.4%、5.6%，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。HOTAIR在上皮性卵巢癌组和正常卵巢组阳性率分别为85.7%、14.2%，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。HOST2联合HOTAIR检测上皮性卵巢癌的阳性率为95.2%，在正常卵巢组织组中没有发现两者同时阳性。结论：HOST2和HOTAIR均在上皮性卵巢癌中表达升高，可成为提高上皮性卵巢癌诊断率的分子肿瘤标志物。HOST2和HOTAIR联合检测可以提高检测的灵敏度和特异性。

［关键词］HOST2；HOTAIR；卵巢癌；RT-PCR

［Abstract］Objective：To investigate the significance of combined detection of HOTAIR and HOST2 in epithelial ovarian cancer tissues. Method：The expression was detected in 21 cases of epithelial ovarian cancer and 21 cases of normal ovarian tissues by fluorescence quantitative PCR. Result：The expression rate of HOST2 in epithelial ovarian cancer group and normal ovarian cancer group was 90.4% and 5.6% respectively and the difference was statistically significant （P＜0.05）.The expression rate of HOTAIR in epithelial ovarian cancer and normal ovary was 85.7% and 14.2% respectively and the difference was statistically significant （P＜0.05）.The expression rate of HOST2 combined with HOTAIR in the detection of epithelial ovarian cancer was 95.2%.There was no expression in normal ovarian tissue. Conclusion：The high expression of HOST2 and HOTAIR is in epithelial ovarian cancer，which could improve the epithelial ovarian cancer molecular diagnosis of tumor markers. The Combined detection of HOST2 and HOTAIR could improve the sensitivity and specificity of detection.

［Key Words］HOST2；HOTAIR；ovarian cancer；RT-PCR

卵巢癌是妇科常见肿瘤之一，死亡率居妇科恶性肿瘤首位。开发对卵巢癌的新型诊断方法非常重要［1-4］。上皮性卵巢癌特异转录子2（ovarian cancer-specific transcripts 2，HOST2）lncRNA是一种在上皮性卵巢癌中发现的高表达的lncRNA［5］。HOTAIR是来源于HOXC基因座的lncRNA，存在于HOXC11和HOXC12之间，在各种组织中调节HOXD的表达，在组蛋白修饰和基因正确表达方面有调节作用的lncRNA［6］。我们对上皮性卵巢癌和正常卵巢组织标本进行HOST2 lncRNA和HOTAIR lncRNA基因联合检测，分析其表达情况，研究两者在上皮性卵巢癌中的诊断价值，现报道如下。

1　临床资料

均为2012年1月至2013年4月成都市龙泉驿区第一人民医院收治的上皮性卵巢癌21例和正常卵巢组织21例，术前均未接受放化疗。术中切取卵巢部分组织立即置于液氮中，用于提取RNA。部分组织经HE染色后用于病理诊断。患者均已签署知情同意书。所有涉及人体标本的研究均事先获得成都市龙泉驿区第一人民医院伦理委员会的批准。

2　主要试剂和仪器

总RNA抽提试剂盒、逆转录试剂盒、PCR扩增试剂SYBR GreenⅡ（大连TaKaRa公司）；磷酸盐缓冲液（PBS）为本院自配。荧光定量PCR扩增仪（gene cycle TM Bio-Rad，美国）。

3　实验方法

RNA提取和cDNA合成先用Trizol试剂从组织中提取总RNA。提取总RNA后，经真空干燥，溶解于DEPC水中。测定A260nm/A280nm比值及RNA浓度后，立即进行cDNA合成。cDNA合成，根据RNA的浓度，分别取一定量的RNA模板样品，依次加入逆转录试剂，总反应体积60μL，具体操作按逆转录试剂盒说明书进行。

引物设计：根据HOST2和HOTAIR全长基因序列，利用Primer Premier5.0设计HOST2和HOTAIR特异性的引物和内参引物（见表1）。引物是由上海英俊（Invitrogen）公司合成。

表1　HOST2基因、HOTAIR和β-actin基因的引物序列

PCR扩增。扩增体系：目的基因与内参基因反应体系为25μL。扩增条件：预变性95℃，5min；变性95℃，30s；延伸52℃，30s；退火72℃，1min，30个循环；72℃复性5min。进行cDNA PCR扩增。目的基因和内参基因的扩增在同时完成，检测样本的同时制备目的基因和内参基因的双标准曲线，判断二者的扩增效率是否一致并对样本进行定量，同时实验设阴阳性和空白对照。F值计算公式：F=目的基因拷贝数/内参基因拷贝数。

统计学方法：所有数据采用SPSS19.0统计学软件进行处理，组间比较采用t检验分析，计数资料比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。考虑实验影响因素，当F≥0.20时判断该标本为有表达，实验均重复3次。

4　结　果

HOST2和HOTAIR在卵巢组织中表达比较。PCR结果显示两个基因在上皮性卵巢癌组织中均有一定程度表达，两者比较差异无统计学意义（P＞0.05）；HOTAIR基因在正常卵巢组织中表达弱，F值（0.13±0.07），HOST2基因在正常卵巢组织中表达极弱。HOST2和HOTAIR在上皮性卵巢癌组织中表达明显高于其在正常卵巢组织中表达，差异有统计学差异（P＜0.05），见图1。

图1　组织中HOST2和HOTAIR表达情况

两组卵巢组织中 HOST2和HOTAIR阳性率比较。HOST2在上皮性卵巢癌组和正常卵巢组分别为90.4%，5.6%；HOTAIR阳性率在上皮性卵巢癌组和正常卵巢组分别为85.7%，14.2%；HOST2联合HOTAIR检测上皮性卵巢癌的阳性率为95.2%，见表2。在上皮性卵巢癌组中，两个基因同时阴性率为4.8%（1/21），在正常卵巢组中没有发现两者同时阳性，见表3。两者同时检测有利于提高灵敏度和特异性。

表2　各组HOST2基因和HOTAIR基因联合检测结果

表3　各组HOST2和HOTAIR联合检测结果

5　讨　论

近年来，随着lncRNA的研究深入，表明lncRNA参与了转录激活、染色质修饰、核内运输、转录干扰等多种重要的调控过程［7］。提示lncRNA与人类疾病关联。HOST2和HOTAIR是在卵巢癌中发现的lncRNA。HOTAIR lncRNA可以连接导致肿瘤转移的染色质［8］，HOTAIR在卵巢癌中的表达高于正常卵巢组织的表达［9］，但HOTAIR在其它癌组织中也有表达，如在肝细胞癌组织中的表达比邻近非癌灶组织中的表达高［10］。HOST2是在卵巢癌组织和卵巢癌细胞株中特异表达的lncRNA［2］。两基因联合检测卵巢癌具有一定的优势。

HOST2和HOTAIR都具有对上皮性卵巢癌的诊断价值，两者联合检测有利于提高上皮性卵巢癌诊断的特异性和灵敏性，同时检测能提高高危人群的检出率，对个体危险度有较准确的评估。

［参考文献］

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［9］崔玲，谢晓砚，王和，等.长链非编码RNA HOTAIR mRNA在卵巢癌中的表达［J］.四川大学学报（医学版），2013，44（1）：57-59.

［10］Yang Z，Zhou L，Wu LM，et al.Overexpression of long noncoding RNA HOTAIR predicts tumor recurrence in hepatocellular carcinoma patients following liver transplantation［J］.Ann Surg Oncol，2011，18（5）：1243-1250.

证治集粹

［收稿日期］2015-05-15

［中图分类号］R273.731

［文献标识码］B

［文章编号］1004-2814（2015）10-0961-02