新疆昌吉地区规模化猪场猪瘟免疫抗体水平检测与分析

李泽宇

（新疆农业职业技术学院，新疆 昌吉831100）

猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒（CSFV）引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。目前，该病主要在亚洲、非洲、南美洲和欧洲等44 个国家流行。猪瘟在我国曾广泛流行，20 世纪50 年代使用猪瘟兔化弱毒苗后得到一定控制。但近20年来，非典型性猪瘟发病增多，仔猪发病也趋多见，对我国养猪业的危害非常大。近年来昌吉养猪业得到了飞速发展，2013年全年出栏生猪242.5万头，而对于猪瘟的防治，多用疫苗免疫，但是由于养殖水平参差不齐、免疫程序不规范，该病在新疆时有发生。为了掌握昌吉地区规模化猪场猪瘟免疫抗体水平的高低及消长规律，同时为养殖户提供一个科学合理的免疫程序，本试验选择昌吉地区5个规模化猪场进行检测。

1 材料与方法

武汉科前动物生物制品公司生产的猪瘟病毒ELISA 抗体检测试剂盒、实验室提供自动酶标仪（美国BioTek仪器有限公司），微量移液器（eppendorf公司），恒温培养箱（北京市光明医疗仪器厂），无菌操作台，振荡器，灭菌高压锅，高速离心机等实验所需仪器设备。

2 实验样品

2.1 血清样品的准备

血清：由新疆昌吉地区A、B、C、D、E5个规模化猪场（种母猪﹥300头）共采集血清数共1350份，采集公猪血清共50份、后备母猪共200份、哺乳母猪共100份、妊娠母猪100份、7日龄仔猪150份、14日龄仔猪150份、21日龄仔猪150份、30日龄仔猪30150份、40日龄仔猪150份、55日龄仔猪150份。

2.2 样品采集时间、方法及样品储存

血清共分4次均等采集，分别为2012年7月、2012年10月、2013年1月、2013年4月；主要采集方法为前腔静脉采血法（对与成年猪只个别采取耳缘静脉采血），血液采集后用高速离心机提取血清即样品，置于－20℃冰箱储存备用。

3 试验方法与判定

3.1 血清稀释

3.1.1 样品 按照1∶40的体积在血清稀释板进行稀释。

3.1.2 对照 按照1∶40的体积分别将阳性对照和阴性对照稀释，对样品和对照，稀释相同的倍数。

3.2 试验方法步骤

3.2.1 加样 取抗原包被板，将稀释好的样品血清和对照血清分别按照100μL 对应从稀释板转入抗原包被板中，待检样品每份加一个孔，对照样品每份加2个孔，在振荡器上微微振匀孔中的样品，然后置37 ℃温育30min。

3.2.2 洗涤 洗板甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μL，静置3 min倒掉，再在吸水纸上拍干，共计洗涤5次。

3.2.3 加酶 每孔加羊抗猪酶标二抗100μL，置37 ℃再温育30min。

3.2.4 洗涤 同2。

3.2.5 显色 每个孔分别加入底物A 和B（50 μL）混匀，室温避光显色10min。

3.2.6 检测 终止反应加终止液50μL 利用酶标仪检测。

3.3 结果判定

在酶标仪上测各孔的OD630nm值。试验成功的条件是阳性对照孔的平均OD630nm值均≥0.8，阴性对照孔的平均OD－630nm值均＜0.3。

样品OD630nm值≥0.35，为阳性；样品OD630nm值＜0.35，为阴性。

表1 CSF血清抗体ELISA 检测与HIA 的转换

4 数据统计分析

用EXCEL 软件进行原始数据处理，用SPSS11.5对试验数据进行t检验。

5 结果与分析

5.1 各猪场CSF血清抗体水平分析

从表格可以看出（表2）：通过对昌吉地区5 个规模化猪场共1350份血清的检测，结果阳性总数为1 081，阳性率为80.07%，平均OD 值为1.121，标准差为0.856，其中A、B、C、D、E5个规模化猪场阳性率分别为92.2%、82.59%、74.44%、88.51%、62.59%、80.07%，各个规模化猪场之间阳性率差异均为极显著（P＜0.01），其中A 场和D 场差异不显著（P＞0.05），B 场和D 场差异不显著（P＞0.05），其他之间差异均为显著（P＜0.05）。

表2 昌吉地区5个规模化猪场各场CSF血清抗体水平及阳性率汇总表

通过统计可知，A、B、C、D、E 各场的OD 值分别1.215、0.901、1.115、1.254、0.904、总体OD 值为1.121，其中A 场和D 场差异不显著（P＞0.05），B场和D 场差异不显著（P＞0.05），其他之间差异均为显著（P＜0.05）。

图2 昌吉地区5个规模化猪场各场CSF血清抗体平均OD 值

5.2 各猪场CSF不同血清抗体效价水平分析

从表格（表3）可以看出：抗体效价＜5log2血清数共269 份，占总血清数的19.93%，抗体效价为5log2血清数共97份，占总血清数的7.2%，抗体效价为6log2血清数共169份，占总血清数的12.5%，抗体效价为7log2 血清共289 份，占总血清数的21.4%，抗体效价≥8log2血清数共526份，占总血清数的38.97%。

表3 不同抗体效价的样本数及所占比率统计表

图3 不同抗体效价的样本数及所占比率统计表

5.3 不同阶段猪群CSF血清抗体水平分析

从表格（表4）可以看出：公猪、后备母猪、哺乳母猪、妊娠母猪、7日龄仔猪、14日龄仔猪、21日龄仔猪、30日龄仔猪、40日龄仔猪、55日龄仔猪抗体阳性率分别为92%、69%、86%、93%、72%、82%、88.67%、80.67%、72.66、82.67%，通过统计可知各阶段的猪群抗体阳性率差异很大，阳性率最高为妊娠母猪和公猪，抗体阳性率最低为后备母猪和40日龄仔猪。从仔猪阳性率结果可以看出，仔猪在7日龄猪瘟抗体阳性率最低为72%，从7 日龄到21 日龄在逐渐升高，21日龄抗体阳性率最高为88.67%，30日龄抗体阳性率降到最低为72.66%。

表4 昌吉地区5个规模化猪场不同阶段猪群CSF血清抗体水平及阳性率汇总表

图4 昌吉地区5个规模化猪场不同阶段猪群血清抗体阳性率

图5 昌吉地区5个规模化猪场不同阶段猪群血清抗体平均OD 值

6 讨论

6.1 各猪场总体检测结果分析

从结果分析可知，昌吉地区5个规模化猪场共1350份血清，阳性总数为1081，该地区的总体阳性率为80.07%，平均OD 值为1.121。与国家规定的70%水平对比相对较高，血清的整体效价较好，本次结果与马晓艳等2012年对新疆地区的猪瘟抗体合格率为75.3%结果相近，本次结果显示猪瘟抗体阳性率比张继红等2009利用猪瘟正向间接血凝试验对新疆地区12个地（州、市）采集的1749份血清样品总体免疫合格率为71.3% 较高。刘建营等（2012）对广东地区2012年猪瘟抗体水平进行了检测，结果显示广东地区猪瘟抗体阳性率为76.5%，程汉等（2012）对江苏泰州地区的猪瘟抗体水平进行检测，结果显示阳性率为79.3%。但是部分猪场猪瘟抗体阳性率低于70%，这与猪场防疫管理有不可推卸的责任，应加强猪瘟的免疫抗体水平监测。

6.2 不同阶段仔猪CSF血清抗体阳性率水平分析

图6 不同阶段仔猪的CSF血清抗体水平分析

从图9可以看出：从仔猪阳性率结果可以看出，仔猪在7日龄猪瘟抗体阳性率最低为72%，从7日龄到21日龄在逐渐升高，21日龄抗体阳性率最高为88.67%，30 日龄抗体阳性率降到最低为72.66%。这与曹建等（2012）用HIA 法对仔猪母源抗体效价检测的结果15～21日龄达到最高值，21日龄后逐步降低，于35日龄达到抗体保护临界值基本相符。结合临床可知，哺乳初期抗体阳性率有所上升，与母乳中充足的母源抗体有直接关系，但随着日龄增大，仔猪抗体阳性率降低，断奶后抗体阳性率急剧降低，因为母源抗体摄入不足引起。经过第一次免疫，仔猪猪瘟抗体阳性率在35～50 日龄开始回升。因此在仔猪母源抗体摄入不足时及时进行免疫接种非常必要。

7 小结

从试验结果来看，昌吉地区猪瘟免疫后保护力目前比较稳定，达到了国家规定要求的免疫保护率70%，但是有个别猪场免疫效果不理想，这与不健全的防疫制度有很大的关系。通过现场调查可知：昌吉地区猪瘟首免日龄多数在30d左右，二免日龄在60d左右。部分猪场进行超前免疫，并于50日龄进行二免。

结合对本次实验结果的分析与国内外相关文献报道，对昌吉地区猪瘟免疫程序提出以下建议：

7.1 把好疫苗质量关

7.1.1 做好疫苗运输保管工作，保证其生物学效价。运输途中用冰块包装以保证低温，疫苗稀释后在15 ℃以下6h 内用完，在15～27 ℃应于3h 内用完，超时弃用并销毁。

7.1.2 坚持免疫消毒，确保注射有效。针具消毒，一猪一针头，避免交叉感染；针头长度适中，方法得当，以利于刺激机体产生抗体。

7.1.3 禁止使用过期、无标签、失效稀释后不溶解及时间较长的疫苗，确保猪只使用合格的疫苗，以产生足够的抗体、增强免疫力。

7.2 适时接种

7.2.1 后备公、母猪使用前进行两次猪瘟免疫接种，间隔一个月。

7.2.2 生产公、母猪每年春秋两秋各普免一次。

7.2.3 经产母猪每次断奶前跟胎免疫一次。

7.2.4 仔猪23～25日龄进行首免疫，60日龄时进行第二次免疫，为提升免疫水平，可以进行多次免疫。

7.3 定期进行猪瘟免疫抗体监测

定期进行猪瘟免疫抗体监测，可了解猪瘟疫苗的免疫效果及猪瘟抗体水平，以估测猪群合适的免疫时间，对制定免疫程序有重要意义。

［1］ 王琴.国内外猪瘟现状及研究进展［M］.农业部中国兽医药品监察所国家猪瘟参考实验室，北京：中国农业大学出版，2003：48－56.

［2］ 许追，齐向涛，齐亚银，等.新疆石河子地区猪瘟免疫抗体水平检测与分析［J］.养猪，2013（5）：97－99.

［3］ 台凡力，李佳.广东湛江市规模化猪场猪瘟免疫抗体水平检测分析［J］.养猪，2014（3）：94－96.

［4］ 朱建军，冯升，毛晓丽，等.五家渠市规模猪场猪瘟免疫抗体水平检测分析［J］.养猪，2013（6）：123－124.

［5］ 付少刚，马建春，曹晓真，等.猪瘟免疫抗体水平监测及免疫效果评估分析［J］.中兽医医药杂志，2011（5）：38－40.

［6］ 邹丽，周雪，徐登峰.猪瘟免疫抗体水平的监测［J］.中国畜牧兽医文摘，2013（7）：94.

［7］ Ruggli N，Tratschin JD，Mittelholzer C，et al.Nucleotide sequence of classical swine fever virus strainAlfort／187 and transcription of infectious RNA from stably cloned fμLl－length cDNA ［J］.J Virol，1996，70：3478－3487.

［8］ 王在时，丘惠深，郎洪武.猪瘟病毒野外分离物的研究.中国兽药监察所研究报告汇编第14 辑，北京：1999，35－38.

［9］ 刘湘涛，韩雪清，刘伯华，等.猪瘟流行野毒Erns基因的序列分析［J］.中国农业科学，2000，33（4）：75－81.

［10］ Fritzemeier J，Ritzemeier J，Teuffert JI，et al.Epidemiology of classical swine fever in Germany in thenineties［J］.Vet Microbiol，2000，77（1－2）：29－41.

［11］ 杜念兴.猪瘟的回顾与展望.中国畜禽传染病［J］.1998（5）：317－319.

［12］ 韩雪清，刘湘涛，赵启祖.猪瘟病毒及其猪瘟疫苗研究进展［J］.动物医学进展，2000，21（2）：1－7.

［13］ 涂长春.猪瘟国际流行态势、我国现状及防制对策［J］.中国农业科学，2003 36（8）：955－960.

［14］ 吕宗吉，涂长春，余兴龙，等.我国猪瘟的流行病学现状分 析［J］.中 国 预 防 兽 医 学 报，2001，23（4）：300－302.