口腔鳞状细胞癌组织中乙酰肝素酶的表达变化及意义

王新，龚中坚，於俊(南京医科大学附属无锡市人民医院，江苏无锡 214023)

口腔鳞状细胞癌组织中乙酰肝素酶的表达变化及意义

王新，龚中坚，於俊(南京医科大学附属无锡市人民医院，江苏无锡 214023)

摘要：目的观察口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中乙酰肝素酶(HPA)的表达变化，并探讨其意义。方法OSCC患者52例(观察组，术后3 a内失访2例，将病情稳定、尚无复发和转移者22例设为A组，另将6例死亡和22例复发、转移者设为B组)、健康志愿者20例(对照组)，采用免疫组化法检测两组HPA，并分析HPA表达与OSCC临床病理参数及患者生存状况的关系。结果观察组及对照组HPA表达水平分别为0.276±0.014、0.065±0.009，两组比较P<0.01。HPA表达与OSCC组织学分级及是否有淋巴转移、远处转移有关(P均<0.05)。A、B组HPA表达水平分别为0.114±0.021、0.377±0.034，两组比较P<0.05。结论OSCC组织中HPA表达升高，其可能与OSCC的侵袭、转移及预后差有关。

关键词：口腔肿瘤；口腔鳞状细胞癌；乙酰肝素酶

口腔鳞状细胞癌(OSCC)的转移和局部复发是影响患者治疗和预后的重要因素，而癌细胞的侵袭和转移必须穿过细胞层以及环绕在细胞层外的稠密基质。乙酰肝素酶(HPA)是一种能降解细胞外基质(ECM)和基底膜(BM)中的多糖的酶，在肿瘤侵袭和转移中发挥重要作用[1]。而关于HPA在OSCC组织中的表达及其与OSCC侵袭、转移的关系国内、外鲜有报道。本研究采用免疫组化法检测OSCC组织中HPA，并观察其表达变化，旨在为OSCC的临床治疗和预后判断提供依据。

1资料与方法

1.1临床资料选取2000年1月~2010年12月无锡市人民医院收治的OSCC患者52例(观察组)，男38例，女14例；<50岁20例，≥50岁32例。均经病理诊断，且术前均未进行任何放化疗。其中原发于舌16例、颊黏膜14例、腭部12例、口底8例、口腔其他部位2例。参照世界卫生组织(2004年)的肿瘤分类标准，依据WHO诊断标准3级法进行病理分级，其中Ⅰ级(高分化)12例、Ⅱ级(中分化)30例、Ⅲ级(低分化)10例。按2002年UICC TNM分期标准，Ⅰ、Ⅱ期9例，Ⅲ期24例，Ⅳ期19例。无淋巴结转移9例，有淋巴转移43例；无淋巴结远处转移44例，有淋巴结远处转移8例。对52例OSCC患者进行术后随访，随访至2013年12月，随访时间36~167个月。术后3 a内失访2例，将病情稳定、尚无复发和转移者22例设为A组，另将6例死亡和22例复发、转移者设为B组。52例均接受手术治疗并留取肿瘤组织。另选健康志愿者20例，取其正常口腔黏膜组织。

1.2HPA检测方法采用免疫组化法。免疫组化ABC法参照试剂盒说明书进行，石蜡切片脱蜡、水化后，进行抗原修复；用5%正常山羊血清室温封闭30 min；滴加一抗后湿盒中4 ℃孵育过夜，滴加即用型二抗于室温30 min；DAB显色3 min，苏木精复染，封片。鼠抗人HPA单克隆抗体和ABC免疫组化试剂盒均购自Santa Cruz公司。用HPA阳性片作为阳性对照，磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。细胞质或细胞核中出现棕黄色为阳性细胞，用DM2500图像分析系统(德国Leica公司)镜下观察，采用QWlN V2.6软件扫描分析，根据阳性细胞着色的面积和强度，以平均吸光度值(积分吸光度/面积)代表阳性细胞的表达水平。

2结果

观察组及对照组HPA表达水平分别为0.276±0.014、0.065±0.009，两组比较P<0.01。A、B组HPA表达水平分别为0.114±0.021、0.377±0.034，两组比较P<0.05。HPA表达与OSCC临床病理参数的关系见表1，由表1可知，HPA表达与OSCC组织学分级及是否有淋巴转移、远处转移有关(P均<0.05)。

表1　HPA表达与OSCC临床病理参数的关系

3讨论

OSCC是口腔恶性肿瘤中发病率最高的肿瘤，具有很强的侵袭性，其主要的治疗方法是局部切除手术及肩胛舌骨上颈淋巴清扫术，但术后极易发生区域淋巴结及远处转移[2]。由于对OSCC生物学性质认识上的局限性，目前尚无很有效的治疗措施，即使进行了广泛的手术切除及放射治疗，大多数患者最终还是出现复发和转移，临床上急需寻求治疗OSCC的新方法[3～5]。

HPA是一种能降解ECM和BM中多糖的酶。早在1983年，Nakajima等[6]在Science上撰文报道，HPA被命名为“Heparanase”，为内源性β-葡萄糖醛酸酯酶；在皮肤恶性黑色素瘤的裸鼠细胞系B16中发现，HPA活性与肿瘤的转移密切相关，在肿瘤侵袭和转移中发挥重要作用，是肿瘤治疗潜在的靶点[7,8]。现已发现，HPA通过降解ECM中的硫酸乙酰肝素多聚糖蛋白和释放其结合的生长因子如成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子和各种酶等促进肿瘤的侵袭与转移[9]。研究[10]显示，在胰腺癌、黑色素瘤、神经胶质瘤、胃癌、头颈癌及口腔癌等多种人类肿瘤中均发现了HPA的表达，且HPA表达均与癌细胞的侵袭与转移密切有关。这些资料提供了HPA参与癌细胞侵袭和转移的直接证据。近年来研究[11,12]还发现，HPA还与感染、糖尿病、动脉粥样硬化等多种疾病有关，其潜在功能被不断发掘，故有学者形象的把HPA的功能多样性称为“busy at the cell surface”。

本研究显示，观察组HPA表达水平高于对照组，HPA表达与OSCC患者年龄、性别以及肿瘤TNM分期无关，而与肿瘤组织分级有关，提示低分化OSCC者HPA表达水平低于中高分化者，说明HPA表达水平与OSCC的恶性程度正相关。本研究还发现，HPA表达与OSCC患者淋巴结转移、远处转移亦有关，提示HPA的高表达可能促进OSCC的区域淋巴结转移及远处转移。在术后随访中发现，A组HPA表达水平低于B组，提示HPA高表达可能与OSCC患者的预后呈负相关，可能是一种新的反映OSCC预后的指标。国内肖大江等[13]也得出相似结论，与我们的研究结果相符。

总之，OSCC中HPA的高表达可能与OSCC的侵袭、转移及预后差有关。

参考文献：

[1] Nakajima M, Irimura T, Di Ferrante D, et al. Heparan sulfate degradation: relation to tumor invasive and metastatic properties of mouse B16 melanoma sublines[J]. Science, 1983,220(4597):611-613.

[2] 文建民,金友仁,唐恩溢,等.肩胛舌骨上清扫术在cNO口腔癌中的应用[J].江苏医药,2009,35(10):1161-1162.

[3] Jadhav KB, Gupta N. Clinicopathological prognostic implicators of oral squamous cell carcinoma: need to understand and revise[J]. N Am J Med Sci, 2013,5(12):671-679.

[4] Sandu K, Nisa L, Monnier P, et al. Clinicobiological progression and prognosis of oral squamous cell carcinoma in relation to the tumor invasive front: impact on prognosis[J]. Acta Otolaryngol, 2014,134(4):416-424.

[5] Raj L S M, Boaz K, Natarajan S. Prognostic significance of lymph node pattern in oral squamous cell carcinoma(OSCC)[J]. J Clin Diagn Res, 2014,8(1):232-235.

[6] Nakajima M, Irimura T, Di Ferrante D, et al. Heparan sulfate degradation: relation to tumor invasive and metastatic properties of mouse B16 melanoma sublines[J]. Science, 1983,220(4597):611-613.

[7] Pisano C, Vlodavsky I, Ilan N, et al. The potential of heparanase as a therapeutic target in cancer[J]. Biochem Pharmacol, 2014,89(1):12-19.

[8] Masola V, Secchi MF, Gambaro G, et al. Heparanase as a target in cancer therapy[J]. Curr Cancer Drug Targets, 2014,14(3):286-293.

[9] Vlodavsky I, Beckhove P, Lerner I, et al. Significance of heparanase in cancer and inflammation[J]. Cancer Microenviron, 2012,5(2):115-132.

[10] 王新,任国欣,郭伟.乙酰肝素酶在头颈部恶性肿瘤中表达的研究进展[J].口腔颌面外科杂志,2011,21(3):223-225.

[11] Vlodavsky I, Iozzo RV, Sanderson RD. Heparanase: multiple functions in inflammation, diabetes and atherosclerosis[J]. Matrix Biol, 2013,32(5):220-222.

[12] Fux L, Ilan N, Sanderson RD, et al. Heparanase: busy at the cell surface[J]. Trends Biochem Sci, 2009,34(10):511-519.

[13]肖大江,朱国臣,郑晓彬,等.乙酰肝素酶与头颈部鳞状细胞癌侵袭、转移和血管生成的关[J].中华实验外科杂志,2009,26(10):1373-1375.

(收稿日期:2014-12-17)

基金项目：南京医科大学科技发展基金重点项目(2014NJMUZ58)。

中图分类号：R739.8

文献标志码：B

文章编号：1002-266X(2015)11-0071-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.11.029