肥大细胞亚型与结直肠癌患者预后关系的研究*

张艳红　段春芳　谢　凭

1　广东省广州市番禺区南村医院病理科　511300；　2　广州番禺区新造医院

论著

肥大细胞亚型与结直肠癌患者预后关系的研究*

张艳红1段春芳2谢凭1

1广东省广州市番禺区南村医院病理科511300；2广州番禺区新造医院

摘要目的：探讨肥大细胞(MC)亚型与结直肠癌患者预后的关系。方法：收集40例有完整临床、病理资料的结直肠癌患者的标本和40例正常结直肠黏膜标本，进行特殊染色和免疫组化染色。结果：MC在正常结肠黏膜组织数量4~22，平均6.7/HP。MC在肿瘤组织中数量为26~138，平均73/HP，差异有统计学意义。T型MC计数结果为0~48，平均2.2/HP。C型MC计数结果为16~83，平均51/HP。TC型MC计数结果为0~16，平均1.8/HP。C型与TC型MC与结直肠癌患者的肿瘤分化程度、临床分期和预后均无关。T型MC与结直肠癌患者的肿瘤分化程度、临床分期和预后有关，差异有统计学意义。结论：MC总数与临床预后呈负相关，T型MC与肿瘤分化程度、临床分期和预后呈负相关。

关键词肥大细胞肠癌免疫组化

The Relationship between Mast Cell Subtype and Prognosis in Patients with Colorectal Cancer

ZHANG Yanhong#,DUAN Chunfang,XIE Ping.#DepartmentofPathologyofNancunHospitalofPanyuDistrictofGuangzhouCity，GuangdongProvince511300

ABSTRACT Objective:To investigate the relationship between the subtypes of mast cells and the prognosis of colorectal cancer patients.Methods:40 cases of colorectal cancer with complete clinical and pathological data, and 40 normal colorectal mucosa specimens, were collected for special staining and immunohistochemical staining.Results:The number of MC in the normal colon mucosa was 4~22, and the average was 6.7/HP.The number of MC in tumor tissues from 26~138,and the average of 73/HP.T-type MC count was 0~48, the average was 2.2/HP.The C-type MC C count was 16~83,the average was 51/HP.TC-type MC count was 0~16, the average was 0.8/HP.The degree of tumor differentiation,clinical staging and prognosis of C-type MC and TC-type MC were not related to the tumor differentiation and prognosis of colorectal cancer patients. The differentiation degree and clinical stage of T-type MC were related to the tumor differentiation and prognosis of the patients with colorectal cancer, and the differences were statistically significant.Conclusion:The total MC number is negatively correlated with the clinical prognosis. T-type MC is negatively related to tumor differentiation, clinical staging and prognosis but nothing with C-type MC and TC-type MC.

KEY WORDS Mast Cells,Colon cancer,Immunohistochemistry

炎症细胞对肿瘤的作用是近年来研究的热点问题[1]，肥大细胞(Mast cell,MC)是重要的效应和免疫细胞，分布于整个黏膜和结缔组织，广泛存在于机体与外界相通的部位，如皮肤、消化道、呼吸道等部位。MC根据分泌颗粒的不同及蛋白酶的差异，可分为T型MC、C型MC和TC型MC三个亚型，T型MC只含有类胰蛋白酶(tryptase)，C型MC只含有类糜蛋白酶(chymase)，少量TC型MC不仅含有类胰蛋白酶，还含有类糜蛋白酶[2]。有研究发现，肿瘤组织中MC数量增加，但MC对肿瘤的作用还存在矛盾的观点，不同亚型对肿瘤的影响更是少有研究。本研究通过定量分析结直肠癌中MC的亚型，探讨结直肠癌中MC亚型的变化及与临床预后的关系。

1资料与方法

1.1一般资料收集2000-2005年在广州市番禺区人民医院及番禺区南村医院住院治疗的有完整临床与病理资料的结直肠癌病例共40例，年龄32~78岁，平均年龄52.1岁。其中男27例，女13例，术前均未行放、化疗，术后随访5年以上或至死亡。选取同期正常结直肠黏膜组织40例作对照组。

1.2实验方法组织标本均经4%中性甲醛固定、石蜡包埋，连续切片，厚4μm，行常规HE染色、特殊染色和免疫组织化学双染。HE切片观察肿瘤细胞的分化程度、浸润深度、淋巴结转移等。特殊染色的项目为甲苯胺蓝和阿尔新蓝-藏红O染色，甲苯胺蓝将MC染成紫红色，阿尔新蓝-藏红O将MC染成红、蓝、红蓝相间3种不同的颜色。每张切片上观察阳性细胞数量最多的5个高倍视野，统计二种染色方法的阳性细胞量，计算平均值。肿瘤组织行免疫组化双染，免疫组化双染抗体为AA5和CC1两种单克隆抗体，T型MC呈红色，C型MC呈褐色，TC型MC同时着色。每张切片上观察阳性细胞数量最多的5个高倍视野，统计3种亚型MC的数量。特殊染色试剂购至珠海贝索公司，免疫组化试剂购至北京中衫公司。实验均按说明书操作。

1.3随访对出院患者通过门诊、电话等方式进行随访，术后第1年3个月1次，第2年半年1次，第3~5年1年1次。患者肿瘤局部复发和远处转移均通过CT检查或肠镜活检病理检查确定。

1.4统计学分析应用SPSS17.0统计软件进行数据分析，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学差异。

2结果

2.1结直肠癌患者的临床病理分期40例结直肠癌患者中病理诊断为高分化腺癌12例，中低分化腺癌28例；有淋巴结转移24例，无淋巴结转移16例；肿瘤临床分期Ⅰ~Ⅱ期18例，Ⅲ~Ⅳ期22例。

2.2组织中MC总数MC在正常结肠黏膜组织中主要分布在黏膜下层和肌层，数量4~22，平均6.7/HP。MC主要分布在肿瘤与正常组织交界处，肿瘤内MC少见。MC数量26~138，平均73/HP。以73/HP为标准，将40例结直肠癌患者分为高计数组和低计数组。

2.3肿瘤组织中MC亚型计数T型MC计数结果为0~48，平均2.2/HP。C型MC计数结果为16~83，平均51/HP。TC型MC计数结果为0~16，平均1.8/HP。三种MC亚型均按均数分为高计数组和低计数组。

2.4随访结果40例患者随访时间为50~112个月，平均随访74.3个月。其中6例患者死亡，平均死亡时间为5.2年，11例患者复发，平均复发时间为4.8年。见表1。

表1　MC亚型与临床病理参数的关系

3讨论

MC在结直肠癌预后的作用一直存在争论。Yodavudh等认为结直肠癌组织内MC的浸润数量越多，患者的生存时间越短，预后越差[3]。但相反的，Nielsen等的研究结果显示，MC与结直肠癌患者的预后呈正相关[4]。MC不同亚型与结直肠癌的关系少有报告。

本研究发现，在分化程度差、临床分期高的肿瘤中，MC的量要多于分化程度好、临床分期低的肿瘤，差异有统计学意义，说明MC数量增多与临床预后差相关。有研究报告了MC可分泌多种细胞因子，主要相关的细胞因子有IL-8、MCP-1、MIP-1a等[5]。这些细胞因子与相应受体结合后，促进癌基质炎症细胞浸润，肿瘤细胞生成，癌基质蛋白降解及促进肿瘤细胞增殖、分泌血管生成因子等，使肿瘤表现更有侵袭性和易转移。C型和TC型MC在不同分化程度的肿瘤均有增加，差异无统计学意义，提示C型和TC型MC可能在肿瘤早期的恶变过程中起作用。有研究表明，C型MC分泌的类糜蛋白酶可刺激肿瘤细胞外基质的降解和促进肿瘤周围新生血管形成[6]。而TC型MC虽可分泌二种蛋白酶，但以分泌类糜蛋白酶为主，所以其生物学意义与C型MC类似。本研究也提示，C型MC可能参与了肿瘤早期恶变的过程并持续存在于肿瘤细胞周围，促进血管生成和细胞外基质降解。

T型MC数量变化与肿瘤的分化程度、临床分期及淋巴结转移均有统计学意义。T型MC分泌的类胰蛋白酶是一种中性丝氨酸蛋白酶，人体MC中主要以β-类胰蛋白酶为主。已发现在人结肠腺癌侵袭过程中有大量的活性肥大细胞脱颗粒。Yoshii[7]研究类胰蛋白酶通过激活DLD-1结肠癌细胞系的PAR-2所引发的效应时,发现类胰蛋白酶和PAR-2-AP引起的DLD-1增殖反应与MAP和MEK激酶的磷酸化有关，从而促进了细胞的增殖。研究还发现，与C型MC分泌的类糜蛋白酶一样，类胰蛋白酶也能促进肿瘤细胞周围血管的增生和细胞外基质的降解。

综上所述，本次研究提示，MC的数量与肿瘤患者的预后呈负相关，三种类型的MC均可促进肿瘤细胞外基质的降解和血管新生，T型MC还可促进细胞增殖与恶变。

参考文献

[1]Coussens LM,Werb Z. Inflammatory cells and cancer:think different〔J〕.J Exp Med,2001,193(6):F23-F26.

[2]Galli SJ. New insights into the riddle of the mast cells:microentironmental regulation of mast cell development and phnotypic heterogeneity〔J〕.Lab Invest,1990,62(1):5-33.

[3]Yodavudh S,Tangjitgamol S,Puangsa S.Prognostic significance of microvessel density and mast cell density for the survival of Thai patients with primary colorectal cancer〔J〕.J Med Assoe Thai,2008,91(5):723-732.

[4]Nielsen HJ，Hansen L，Chrislensen IJ,etal．Independent prognostic value of eosinophil and masl cell infiltration in colorectal cancer tissue〔J〕. Pal1ho,1999,189(4):487-495．

[5]李颖,王向东,王鸿,等.CC类趋化因子在慢性鼻窦炎的表达〔J〕.首都医科大学学报,2013,34(6):795-798.

[6]Gulubova M,Vlaykova T.Prognostic significance of mast cell number and microvascular density for the survival of patients with primary colorectal cancer〔J〕.Gsatroenterol Hepatol,2009,24(7):1265-1275.

[7]Yoshii M,Jikuhara A,Mori S,etal.Mast cell tryptase stimulates DLD-1 carcinoma through prostaglandin- and MAP kinase-dependent manners〔J〕.J Pharmacol Sci,2005,98(4):450-458.

(编辑雅文)

收稿日期2015-07-27

*基金项目：广州市番禺区科技与信息化局科技攻关项目(项目编号2014-z03-27)

中图分类号：R735.3

文献标识码：A

文章编号：1001-7585(2015)24-3314-03