家族性皮质肌阵挛震颤性癫痫一家系8q23.3-24.1 连锁分析

刘彩霞 ，孙 维，孙 凯，李 佳，胡国华，史宝和，居乃新，陈秋惠

家族性皮质肌阵挛震颤性癫痫(Familial cortical myoclonic tremor with epilepsy，FCMTE)又称良性成人家族性肌阵挛性癫痫(Benigh adult familial myoclonic epilepsy，BAFME)，是一种常染色体显性遗传疾病。早些年，日本家系和意大利家系研究将FCTME 致病基因分别粗略的定位8q23.3-24.1、2q11.1-q12.2，国外遗传分析显示相关致病基因与上述两个基因位点不连锁。我们对该家系的基因位点分析从筛查8q23.3-24.1 开始着手。

1 资料与方法

1.1 一般资料

我们已报道的临床拟诊为家族性皮质肌阵挛震颤性癫痫一家系患者［1］。临床特点符合以下诊断标准［2］:(1)连续3 代发病，均成年起病，男女均受累，呈常染色体显性遗传;(2)表现为肢体远端震颤、癫痫发作，部分患者于光刺激、惊吓、情绪刺激时诱发全面强直发作;(3)服β 受体阻滞剂无效，口服苯巴比妥等抗癫痫药物有效，为非进展病程。(4)体感觉诱发电位支持震颤来源于皮质。

1.2 研究方法与试剂

1.2.1 样品采集与DNA 提取 在获得患者(7例)和对照者(患者的直系亲属及配偶13 例，其中1例为可疑病例)知情同意后取外周血5 ml，用家系编号，详细标记血样。利用血液基因组DNA 提取试剂盒(天根)提取各样本基因组DNA 。

1.2.2 选择与设计微卫星引物 我们根据已报道的8q23.3-24.1 染色体位点，在NCBImapview图谱中找到这些区域中合适遗传距离的STR(见表1)。

1.2.3 PCR 反应、产物处理、毛细管电泳及结果收集 对选择的STR 位点分别合成普通引物及5'标记FAM 的荧光引物，然后进行荧光引物标记的PCR 反应。在ABI PRISM 3730 DNA Analyzer 上用PE 公司的POP-4 分离胶，60 ℃、15KV 下，电泳30 min，选用ABI PRISM GeneMapper Software(Ver3.5)收集实验数据，进行分子量内标校正和扩增片段大小分析，并读取全部微卫星标记物等位基因片段的大小。

1.2.4 基因型分析及连锁分析 利用Gene-MapperV3.5 进行基因分型，确定家系中各个样本在每个STR 标记处的分型情况。在Linkage5.1 软件中设定疾病基因频率、疾病外显率及拟表型频率，θ=0～0.5 进行连锁分析，记录LOD 值。

2 结果

我们在8q23.3-q24.1 染色体区段选取的5 个STR 位点，在θ=0.0 时这5 个STR 位点与致病基因的两点LOD 值均＜-2(见表2)。

表1 已报道致病位点所选择的STR 信息及引物序列

表2 8q23.3-q24.1 染色体区段STR 位点与该家系致病基因两点连锁分析

3 讨论

家族性皮质肌阵挛震颤性癫痫(FCMTE)又称良性成人家族性肌阵挛性癫痫(BAFME)、家族性成人肌阵挛癫痫(familial adult myoclonic epilepsy，FAME)等，是一种少见的遗传性癫痫综合征，为常染色体显性遗传疾病。近年来，随着遗传学研究工作的不断深入，该病逐渐被人们重视起来。迄今，世界已报道了100 多个该病家系，中国、日本、荷兰、意大利、土耳其等国家均有报道，其中主要分布于日本和意大利两国，日本发现的家系已经超过60 例。目前，我国也陆续报道了多个该病的家系，我们对研究的这个FCMTE 家系的临床特点也做了相应报道［1］。

早些年，日本家系和意大利家系研究将致病基因分别粗略的定位于8q23.3-24.1，2p11.1-q12.2［2，3］，近年来在法国、泰国和中国又陆续发现了5p15.31-p15、3q26.32-3q28 和10p15 等多个基因位点［4～6］。参考已报道的文献，我们在8q23.3-q24.1染色体区段选取了5 个STR 位点，如果选择的5 个STR 标记与致病基因的两点连锁参数LOD 值＜-2，否定该家系的致病基因在此区段;LOD 值＞1，那么本家系致病基因在此区段;如果LOD 值＞3 就能够肯定该家系的致病基因在此区段。结果在θ=0.0时，我们分析的5 个STR 位点与致病基因的两点LOD 值均＜-2。根据此数据我们推断此家系的致病基因位点不在8q23.3-q24.1。但还存在以下可能:(1)我们研究的该家系致病基因不在8q23.3-q24.1。(2)STR 具有人种和地域性，NCBI 数据库的STR Marks 是以欧洲人群为模板的，而杂合度受遗传背景的影响比较大，对我国人群针对性不够强，以致造成STR 位点的等位基因变化范围、重复单元、杂合度等数据与数据库报道有一定出入。另外，也可能我们的家系样本量不足够大，或是我们选择的STR 位点在本家系的杂合率相对较低或由于STR 标记在染色体区段密度相对小。在以后的研究工作中我们将继续增加本病的其他家系或在相应的区域增加样本量，以累加LOD 值;也可尝试使用不同的连锁分析方法对分型结果进行分析，综合各种计算结果判断。总之，尽管本报道的实验结果为阴性，但为FCMTE 的遗传学研究提供了一份良好的研究资料。

［1］刘彩霞，陈秋惠，居乃新，等.家族性皮质肌阵挛震颤性癫痫一家系［J］.中华医学遗传学杂志，2014，31(6):807-808.

［2］Van Rootselaar AF，Van Schaik IN，Van den Maagdenberg AM，et al.Familial cortical myoclonic tremor with epilepsy:a single syndromic classification for a group of pedigrees bearing common features［J］.Mov Disord，2005，20(6):665-673.

［3］Striano P，Chifari R，Strino S，et al.A new benign adult familial myoclonic epilepsy(BAFME)pedigree suggesting linkage to chromosome 2p11.1-q12.2［J］.Epilepsia，2004，45:190-192.

［4］Licchetta L，Pippucci T，Bisulli F，et al.A novel pedigree with familial cortical myoclonic tremor and epilepsy (FCMTE):clinical characterization，refinement of the FCMTE2 locus，and confirmation of a founder haplotype［J］.Epilepsia，2013，54(7):1298-1306.

［5］Depienne C，Magnin E，Bouteiller D，et al.Familial cortical myoclonic tremor with epilepsy:the third locus (FCMTE3)maps to 5p［J］.Neurology，2010，74(24):2000-2003.

［6］Yeetong P，Ausavarat S，Bhidayasiri R.et al.A newly identified locus for benign adult familial myoclonic epilepsy on chromosome 3q26.32-3q28［J］.Eur J Hum Genet，2013，21(2):225-228.