南瓜苗期腐烂病病原鉴定及药剂防治试验

刘永亮等

摘要：通过组织分离法，从温室大棚内发生南瓜苗期腐烂病的植株中分离得到一株菌株。采用南瓜茎人工接种试验进行致病性测定，确认该菌株为病原菌。经形态学鉴定，初步将该病原菌鉴定为瓜枝孢霉（Cladosporiumcucumerinum），编号为Cc-1。孢子萌发试验及温室防病试验结果表明：6225%腈菌唑·福美双可湿性粉剂800倍液与75%百菌清可湿性粉剂600倍液对真菌Cc-1的孢子萌发抑制率均高于90%，温室防治效果分别为7611%与7550%。

关键词：南瓜苗；腐烂病；病原鉴定；芽枝霉属；药剂防治

中图分类号：S436.429+S484+.9文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）01-0086-03

寿光蔬菜大棚南瓜育苗生产中，发生一种危害南瓜苗期茎叶的病害。该病害在作砧木用的南瓜幼苗茎部与叶片均可发病，多为嫩茎发病，发病初期为淡黄绿色水渍状病斑，后期发病部位凹陷龟裂，表面产生大量灰褐色霉层，易倒伏。叶片发病时，初期形成褪绿色病斑，后期病斑处正反面产生灰褐色霉层。多在温度低、湿度大的傍晚与次日上午发病，严重影响南瓜砧木的生长与发育。

该病害症状与报道的黄瓜黑星病症状表现相似[1～3]。但目前尚未见关于南瓜上发生类似黑星病的研究报道。本试验通过南瓜砧木茎叶腐烂病原菌分离与鉴定，初步确定了病原菌种类，并通过温室药剂抗病试验，检测出所用药剂的防治效果，为该病害的防治提供了依据。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1供试品种京新白雪南瓜，由河北省青县大地育苗中心繁育，从泰安友谊种业批发部购买。

1.1.2供试药剂75%百菌清：由山东大成农药股份有限公司生产；62.25%腈菌唑·福美双：由山东恒利达生物科技有限公司生产。均购自泰安富华农资。

1.2试验方法

1.2.1病原菌的组织分离与鉴定取新鲜的病叶与病茎，用清水冲洗，经75%酒精与0.1%升汞消毒，从其病健交界处切3～5cm见方的组织块，置于PDA培养基上25℃恒温培养，待菌丝长出后，进行纯化转移至新的PDA培养基上培养，4℃保存菌种。

观察菌落、菌丝、产孢结构及孢子形态，参考魏景超（1979）[4]的方法对病原进行初步鉴定。

1.2.2离体南瓜茎接种试验在PDA培养基上划线接种分离的真菌，25℃培养6～8d，向培养皿中倒入无菌水10～15ml，用曲玻棒在菌落表面轻轻刮动数次，即制成孢子母液，倒入灭菌小烧杯中，加入适量无菌水，用玻璃棒充分搅拌。用4层灭菌纱布过滤到另一个无菌小烧杯中，制成1×105cfu/ml孢子悬浮液。

取10株健康的南瓜植株，切取长为5cm左右的健康嫩茎，接种孢子悬浮液，保湿处理，7d后观察结果。对病斑进行再次组织分离，观察比较所得病原菌与初次分离病原菌形态有无差异。

1.2.3孢子萌发试验取已灭菌试管7支，各倒入1×105cfu/ml孢子悬浮液9ml，然后分别加入无菌水，腈菌唑·福美双800、900、1000倍液，百菌清600、800、1000倍液各1ml。每处理重复3次，置于25℃处，12h后观察并记录结果，用悬滴法测孢子的萌发率及抑制率。

1.2.4温室防病试验选取健康南瓜种子，温水浸种3d催芽，选取出芽较一致的种子，播到装有灭菌土的营养钵中，每盆4～5粒。参考李光华等（2003）[5]和曹守军等（2011）[6]的方法，等幼苗长出一片真叶时，喷浓度为106cfu/ml孢子悬浮液10ml/株，每天1次，连续喷4d。在第2次喷孢子悬浮液前，分别喷无菌水及药剂腈菌唑·福美双800倍液和百菌清600倍液各10ml/株，植株液滴消失后，再喷孢子液，每处理6盆。最后一次接种病原菌后7d，观察结果并记录病情。

分级标准：参照李保聚（1997）[7]对苗期黄瓜黑星病的分级标准，略有改动。0级：植株健康，叶片形状与叶色未发生变化；1级：叶片萎缩或出现直径小于0.5mm的病斑，叶柄及茎表面无病斑；2级：叶片出现大于0.5mm的病斑，叶柄及茎表面出现病斑，病斑未凹陷龟裂；3级：叶柄及茎表面出现凹陷龟裂病斑，植株未在龟裂病斑处倒伏；4级：植株在龟裂病斑处倒伏，出现萎蔫症状，生长点还存在；5级：植株死亡或生长点腐烂死亡。

病情指数=∑（各级病株数×相应病级代表值）/（调查总株数×最高病级代表值）×100

防治效果（%）=（对照组病情指数-处理组病情指数）/对照组病情指数×100

1.3数据分析

试验数据均由SPSS17.0软件进行分析，经Duncan氏新复极差法进行差异显著性分析。

2结果与分析

2.1病原菌形态学鉴定结果

经组织分离，得到1株菌株，其分离率达85%。该菌株在PDA培养基上培养3～4d后，可形成单个菌落（图1-A），菌落为圆形，边缘较整齐，初期白色，后期为灰褐色，菌落生长缓慢。其菌丝（图1-B）初期无色，后期为褐色，光滑壁薄，呈锐角分支，有隔，排列紧密。分生孢子梗（图1-C与1-D）无色或浅色，直立细长，有分支，有隔。顶端尖锐，分生孢子顶生，2～4个孢子串生，以分生孢子链进行分支。分生孢子（图1-F）淡褐色或橄榄色，单胞，壁薄，少见分隔，大小不一，一般为（28.9～41.6）μm×（12.8～14.6）μm。孢子间易断裂，孢子萌发（图1-E）时，多从一端长出菌丝，有时可见两端长出菌丝。endprint

摘要：通过组织分离法，从温室大棚内发生南瓜苗期腐烂病的植株中分离得到一株菌株。采用南瓜茎人工接种试验进行致病性测定，确认该菌株为病原菌。经形态学鉴定，初步将该病原菌鉴定为瓜枝孢霉（Cladosporiumcucumerinum），编号为Cc-1。孢子萌发试验及温室防病试验结果表明：6225%腈菌唑·福美双可湿性粉剂800倍液与75%百菌清可湿性粉剂600倍液对真菌Cc-1的孢子萌发抑制率均高于90%，温室防治效果分别为7611%与7550%。

关键词：南瓜苗；腐烂病；病原鉴定；芽枝霉属；药剂防治

中图分类号：S436.429+S484+.9文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）01-0086-03

寿光蔬菜大棚南瓜育苗生产中，发生一种危害南瓜苗期茎叶的病害。该病害在作砧木用的南瓜幼苗茎部与叶片均可发病，多为嫩茎发病，发病初期为淡黄绿色水渍状病斑，后期发病部位凹陷龟裂，表面产生大量灰褐色霉层，易倒伏。叶片发病时，初期形成褪绿色病斑，后期病斑处正反面产生灰褐色霉层。多在温度低、湿度大的傍晚与次日上午发病，严重影响南瓜砧木的生长与发育。

该病害症状与报道的黄瓜黑星病症状表现相似[1～3]。但目前尚未见关于南瓜上发生类似黑星病的研究报道。本试验通过南瓜砧木茎叶腐烂病原菌分离与鉴定，初步确定了病原菌种类，并通过温室药剂抗病试验，检测出所用药剂的防治效果，为该病害的防治提供了依据。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1供试品种京新白雪南瓜，由河北省青县大地育苗中心繁育，从泰安友谊种业批发部购买。

1.1.2供试药剂75%百菌清：由山东大成农药股份有限公司生产；62.25%腈菌唑·福美双：由山东恒利达生物科技有限公司生产。均购自泰安富华农资。

1.2试验方法

1.2.1病原菌的组织分离与鉴定取新鲜的病叶与病茎，用清水冲洗，经75%酒精与0.1%升汞消毒，从其病健交界处切3～5cm见方的组织块，置于PDA培养基上25℃恒温培养，待菌丝长出后，进行纯化转移至新的PDA培养基上培养，4℃保存菌种。

观察菌落、菌丝、产孢结构及孢子形态，参考魏景超（1979）[4]的方法对病原进行初步鉴定。

1.2.2离体南瓜茎接种试验在PDA培养基上划线接种分离的真菌，25℃培养6～8d，向培养皿中倒入无菌水10～15ml，用曲玻棒在菌落表面轻轻刮动数次，即制成孢子母液，倒入灭菌小烧杯中，加入适量无菌水，用玻璃棒充分搅拌。用4层灭菌纱布过滤到另一个无菌小烧杯中，制成1×105cfu/ml孢子悬浮液。

取10株健康的南瓜植株，切取长为5cm左右的健康嫩茎，接种孢子悬浮液，保湿处理，7d后观察结果。对病斑进行再次组织分离，观察比较所得病原菌与初次分离病原菌形态有无差异。

1.2.3孢子萌发试验取已灭菌试管7支，各倒入1×105cfu/ml孢子悬浮液9ml，然后分别加入无菌水，腈菌唑·福美双800、900、1000倍液，百菌清600、800、1000倍液各1ml。每处理重复3次，置于25℃处，12h后观察并记录结果，用悬滴法测孢子的萌发率及抑制率。

1.2.4温室防病试验选取健康南瓜种子，温水浸种3d催芽，选取出芽较一致的种子，播到装有灭菌土的营养钵中，每盆4～5粒。参考李光华等（2003）[5]和曹守军等（2011）[6]的方法，等幼苗长出一片真叶时，喷浓度为106cfu/ml孢子悬浮液10ml/株，每天1次，连续喷4d。在第2次喷孢子悬浮液前，分别喷无菌水及药剂腈菌唑·福美双800倍液和百菌清600倍液各10ml/株，植株液滴消失后，再喷孢子液，每处理6盆。最后一次接种病原菌后7d，观察结果并记录病情。

分级标准：参照李保聚（1997）[7]对苗期黄瓜黑星病的分级标准，略有改动。0级：植株健康，叶片形状与叶色未发生变化；1级：叶片萎缩或出现直径小于0.5mm的病斑，叶柄及茎表面无病斑；2级：叶片出现大于0.5mm的病斑，叶柄及茎表面出现病斑，病斑未凹陷龟裂；3级：叶柄及茎表面出现凹陷龟裂病斑，植株未在龟裂病斑处倒伏；4级：植株在龟裂病斑处倒伏，出现萎蔫症状，生长点还存在；5级：植株死亡或生长点腐烂死亡。

病情指数=∑（各级病株数×相应病级代表值）/（调查总株数×最高病级代表值）×100

防治效果（%）=（对照组病情指数-处理组病情指数）/对照组病情指数×100

1.3数据分析

试验数据均由SPSS17.0软件进行分析，经Duncan氏新复极差法进行差异显著性分析。

2结果与分析

2.1病原菌形态学鉴定结果

经组织分离，得到1株菌株，其分离率达85%。该菌株在PDA培养基上培养3～4d后，可形成单个菌落（图1-A），菌落为圆形，边缘较整齐，初期白色，后期为灰褐色，菌落生长缓慢。其菌丝（图1-B）初期无色，后期为褐色，光滑壁薄，呈锐角分支，有隔，排列紧密。分生孢子梗（图1-C与1-D）无色或浅色，直立细长，有分支，有隔。顶端尖锐，分生孢子顶生，2～4个孢子串生，以分生孢子链进行分支。分生孢子（图1-F）淡褐色或橄榄色，单胞，壁薄，少见分隔，大小不一，一般为（28.9～41.6）μm×（12.8～14.6）μm。孢子间易断裂，孢子萌发（图1-E）时，多从一端长出菌丝，有时可见两端长出菌丝。endprint

摘要：通过组织分离法，从温室大棚内发生南瓜苗期腐烂病的植株中分离得到一株菌株。采用南瓜茎人工接种试验进行致病性测定，确认该菌株为病原菌。经形态学鉴定，初步将该病原菌鉴定为瓜枝孢霉（Cladosporiumcucumerinum），编号为Cc-1。孢子萌发试验及温室防病试验结果表明：6225%腈菌唑·福美双可湿性粉剂800倍液与75%百菌清可湿性粉剂600倍液对真菌Cc-1的孢子萌发抑制率均高于90%，温室防治效果分别为7611%与7550%。

关键词：南瓜苗；腐烂病；病原鉴定；芽枝霉属；药剂防治

中图分类号：S436.429+S484+.9文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）01-0086-03

寿光蔬菜大棚南瓜育苗生产中，发生一种危害南瓜苗期茎叶的病害。该病害在作砧木用的南瓜幼苗茎部与叶片均可发病，多为嫩茎发病，发病初期为淡黄绿色水渍状病斑，后期发病部位凹陷龟裂，表面产生大量灰褐色霉层，易倒伏。叶片发病时，初期形成褪绿色病斑，后期病斑处正反面产生灰褐色霉层。多在温度低、湿度大的傍晚与次日上午发病，严重影响南瓜砧木的生长与发育。

该病害症状与报道的黄瓜黑星病症状表现相似[1～3]。但目前尚未见关于南瓜上发生类似黑星病的研究报道。本试验通过南瓜砧木茎叶腐烂病原菌分离与鉴定，初步确定了病原菌种类，并通过温室药剂抗病试验，检测出所用药剂的防治效果，为该病害的防治提供了依据。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1供试品种京新白雪南瓜，由河北省青县大地育苗中心繁育，从泰安友谊种业批发部购买。

1.1.2供试药剂75%百菌清：由山东大成农药股份有限公司生产；62.25%腈菌唑·福美双：由山东恒利达生物科技有限公司生产。均购自泰安富华农资。

1.2试验方法

1.2.1病原菌的组织分离与鉴定取新鲜的病叶与病茎，用清水冲洗，经75%酒精与0.1%升汞消毒，从其病健交界处切3～5cm见方的组织块，置于PDA培养基上25℃恒温培养，待菌丝长出后，进行纯化转移至新的PDA培养基上培养，4℃保存菌种。

观察菌落、菌丝、产孢结构及孢子形态，参考魏景超（1979）[4]的方法对病原进行初步鉴定。

1.2.2离体南瓜茎接种试验在PDA培养基上划线接种分离的真菌，25℃培养6～8d，向培养皿中倒入无菌水10～15ml，用曲玻棒在菌落表面轻轻刮动数次，即制成孢子母液，倒入灭菌小烧杯中，加入适量无菌水，用玻璃棒充分搅拌。用4层灭菌纱布过滤到另一个无菌小烧杯中，制成1×105cfu/ml孢子悬浮液。

取10株健康的南瓜植株，切取长为5cm左右的健康嫩茎，接种孢子悬浮液，保湿处理，7d后观察结果。对病斑进行再次组织分离，观察比较所得病原菌与初次分离病原菌形态有无差异。

1.2.3孢子萌发试验取已灭菌试管7支，各倒入1×105cfu/ml孢子悬浮液9ml，然后分别加入无菌水，腈菌唑·福美双800、900、1000倍液，百菌清600、800、1000倍液各1ml。每处理重复3次，置于25℃处，12h后观察并记录结果，用悬滴法测孢子的萌发率及抑制率。

1.2.4温室防病试验选取健康南瓜种子，温水浸种3d催芽，选取出芽较一致的种子，播到装有灭菌土的营养钵中，每盆4～5粒。参考李光华等（2003）[5]和曹守军等（2011）[6]的方法，等幼苗长出一片真叶时，喷浓度为106cfu/ml孢子悬浮液10ml/株，每天1次，连续喷4d。在第2次喷孢子悬浮液前，分别喷无菌水及药剂腈菌唑·福美双800倍液和百菌清600倍液各10ml/株，植株液滴消失后，再喷孢子液，每处理6盆。最后一次接种病原菌后7d，观察结果并记录病情。

分级标准：参照李保聚（1997）[7]对苗期黄瓜黑星病的分级标准，略有改动。0级：植株健康，叶片形状与叶色未发生变化；1级：叶片萎缩或出现直径小于0.5mm的病斑，叶柄及茎表面无病斑；2级：叶片出现大于0.5mm的病斑，叶柄及茎表面出现病斑，病斑未凹陷龟裂；3级：叶柄及茎表面出现凹陷龟裂病斑，植株未在龟裂病斑处倒伏；4级：植株在龟裂病斑处倒伏，出现萎蔫症状，生长点还存在；5级：植株死亡或生长点腐烂死亡。

病情指数=∑（各级病株数×相应病级代表值）/（调查总株数×最高病级代表值）×100

防治效果（%）=（对照组病情指数-处理组病情指数）/对照组病情指数×100

1.3数据分析

试验数据均由SPSS17.0软件进行分析，经Duncan氏新复极差法进行差异显著性分析。

2结果与分析

2.1病原菌形态学鉴定结果

经组织分离，得到1株菌株，其分离率达85%。该菌株在PDA培养基上培养3～4d后，可形成单个菌落（图1-A），菌落为圆形，边缘较整齐，初期白色，后期为灰褐色，菌落生长缓慢。其菌丝（图1-B）初期无色，后期为褐色，光滑壁薄，呈锐角分支，有隔，排列紧密。分生孢子梗（图1-C与1-D）无色或浅色，直立细长，有分支，有隔。顶端尖锐，分生孢子顶生，2～4个孢子串生，以分生孢子链进行分支。分生孢子（图1-F）淡褐色或橄榄色，单胞，壁薄，少见分隔，大小不一，一般为（28.9～41.6）μm×（12.8～14.6）μm。孢子间易断裂，孢子萌发（图1-E）时，多从一端长出菌丝，有时可见两端长出菌丝。endprint