顶空气相色谱法测定苯甲酸阿格列汀原料药中3种有机溶剂残留量

2015-03-09徐济萍山东大学附属省立医院药剂科济南500济南市皮肤病防治院济南

中国药房 2015年9期

谢嵩，徐济萍，杨磊（.山东大学附属省立医院药剂科，济南 500；.济南市皮肤病防治院，济南

250022）

苯甲酸阿格列汀（Alogliptin benzoate）是由日本Takeda公司研发上市的降糖药，临床主要用于2型糖尿病的治疗，患者耐受性较好[1-4]。阿格列汀能高度选择性地抑制丝氨酸蛋白酶二肽基肽酶Ⅳ（DPP-Ⅳ），从而维持体内胰高血糖素样肽1（GLP-1）和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽（GIP）的水平，促进胰岛细胞产生胰岛素，同时降低胰高血糖素浓度，从而发挥降糖作用。

苯甲酸阿格列汀在制备过程中使用了甲苯、正丁醇、乙醇等有机溶剂[5-6]，这些有机试剂对人体有一定的危害性，故须确保产品中的残留量在规定的范围内。目前已有文献报道了苯甲酸阿格列汀片的含量测定[7-8]，但尚未见有关苯甲酸阿格列汀原料药中有机溶剂残留量检测方法的报道。为此，本研究建立了顶空毛细管气相色谱（GC）法测定苯甲酸阿格列汀原料药中甲苯、正丁醇、乙醇残留量的方法。

1 材料

1.1 仪器

6890型GC仪，包括氢火焰离子化（FID）检测器、色谱工作站及G1888自动顶空进样器（美国安捷伦公司）；X205型分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 药品与试剂

苯甲酸阿格列汀原料（自制，批号：130801、130802、130803，纯度＞99.0%）；甲苯、正丁醇、乙醇、二甲基亚砜（DMSO）均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司，纯度≥99.0%）；水为自制蒸馏纯化水。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

取苯甲酸阿格列汀原料约1.0 g，精密称定，置于20 ml顶空瓶中，精密加入DMSO 5.0 ml使溶解，密封，作为供试品溶液；精密称取甲苯、正丁醇、乙醇各适量，用DMSO定量稀释，制成每1 ml中约含甲苯0.089 mg、正丁醇0.5 mg、乙醇0.5 mg的溶液，精密量取5.0 ml，置于20 ml顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。

2.2 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：毛细管柱Agilent DB-624（30 m×0.53 mm，3.00 μm）；柱温：程序升温，起始温度40 ℃，保持1 min，以10 ℃/min的速率升至150 ℃，维持1 min，以20 ℃/min的速率升至220 ℃；载气：高纯度氮气；进样口温度：200 ℃；检测器温度：250 ℃；进样方式：分流进样，分流比为10∶1；流速：1 ml/min；进样量：20 μl。顶空瓶平衡温度：80 ℃；平衡时间：30 min；进样体积：1.0 ml。理论板数以乙醇峰计应不低于5 000，各峰间分离度不低于1.5。色谱见图1。

图1 气相色谱图A.对照品；B.供试品；1.乙醇；2.正丁醇；3.甲苯Fig 1 Gas chromatogramsA.reference substance；B.sample；1.ethanol；2.N-butanol；3.toluene

2.3 线性关系考察

精密称取甲苯、正丁醇、乙醇各适量，置于同一量瓶中，用DMSO定量稀释，制成每1 ml中约含甲苯0.89 mg、正丁醇5.0 mg、乙醇5.0 mg的溶液，作为对照品贮备液。分别精密量取对照品贮备液20.0、15.0、10.0、5.0、2.5 ml至100 ml量瓶中，加DMSO稀释至刻度，再按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以对照品的质量浓度（x，μg/ml）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标，进行线性回归。结果表明，各对照品的质量浓度均在各自线性范围内与其峰面积呈良好线性关系，详见表1。

表1 回归方程和线性范围Tab 1 Regression equations and linear range

2.4 精密度试验

精密量取对照品贮备液1 ml，置于10 ml量瓶中，加DMSO稀释成质量浓度分别为甲苯0.089 mg/ml、正丁醇0.5 mg/ml、乙醇0.5 mg/ml的溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，重复5次。结果，甲苯、正丁醇、乙醇峰面积的RSD分别为1.36%、1.13%、0.98%（n＝5），表明仪器精密度良好。

2.5 检测限和定量限

精密称取甲苯、正丁醇、乙醇各适量，用DMSO定量稀释，制成每1 ml中约含甲苯0.1 mg、正丁醇0.5 mg、乙醇0.02 mg的溶液，分别稀释400倍和2 000倍，按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。当信噪比＞3时，溶液中甲苯、正丁醇和乙醇的检测限分别为0.05、0.25、0.01 μg/ml；当信噪比＞10时，溶液中甲苯、正丁醇和乙醇的定量限分别为0.25、1.25、0.05 μg/ml。

2.6 加样回收率试验

精密称取样品1.0 g，置于20 ml顶空瓶中，分别加入相当于对照品溶液质量浓度80%、100%、120%的溶液（每个质量浓度3份）各5.0 ml，按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，按外标法计算含量，结果见表2。

表2 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 2 Results of recovery test（n＝9）

2.7 样品中有机溶剂残留量的测定

取3批样品（批号：130801、130802、130803）各适量，按“2.1”项下方法制备供试品溶液和对照品溶液，再按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，以外标法计算有机溶剂的残留量。根据2010年版《中国药典》（二部）[9]，本试验所检测的正丁醇和乙醇属于三类溶剂，药物中此类溶剂残留量应小于0.5%；甲苯属于二类溶剂，其残留量应小于0.089%。本试验中3批样品均未检出残留溶剂，结果符合规定。