胃癌组织中血管内皮生长因子C的表达及其临床意义

葛艳丽　张俊杰　王志荣　黄滨滨

·基础研究·

胃癌组织中血管内皮生长因子C的表达及其临床意义

葛艳丽张俊杰王志荣黄滨滨

【摘要】目的探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)与其受体-3(VEGFR-3)与胃癌临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学染色，检测20例正常胃组织和98例胃癌组织中VEGF-C表达。结果胃癌组织中VEGF-C阳性表达率为71.4%(70/98)，而癌旁组织和正常胃粘膜组织中其阳性表达率为9.2%(9/98)和5.0%(1/20)。98例胃癌组织中VEGF-C表达与患者性别、肿瘤直径大小、肿瘤部位、分化程度、是否存在血管浸润以及浸润深度无显著相关，而与淋巴结转移、淋巴管浸润、远处转移、TNM临床分期显著相关(P<0.05)。结论VEGF-C及其受体系统是淋巴管生成的重要调节因子，对于胃癌区域淋巴管生成、淋巴转移途径有非常重要的意义。

【关键词】胃癌；血管内皮生长因子C；临床意义

The Expression and Clinical Significance of Vascular Endothelial Growth Factor- C in Gastric Cancer Tissues

GEYanli，ZHANGJunjie，WANGZhirong，etal.TongjiHospitalAffiliatedtoTongjiUniversity，Shanghai，200065

【Abstract】ObjectiveTo study the vascular endothelial growth factor-C(VEGF-C) and its receptor(VEGFR-3) and their relationship with clinical pathological factors of gastric cancer.MethodsExpression of VEGF-C in 20 cases of normal gastric tissues and 98 cases of gastric cancer tissues were detected by immunohistochemical staining.ResultsVEGF-C positive expression rate was 71.4%(70/98) in gastric cancer tissues，and VEGF-C positive expression rates in tissues adjacent to tumors and normal gastric mucosa tissues were 9.2%(9/98) and 5.0%(1/20).The expression of VEGF-C in 98 cases of gastric cancer tissues and patient's gender，tumor diameter，size，location，degree of differentiation，presence of vascular invasion and infiltration depth had no significant correlation，but were significantly correlated with lymph node metastasis，lymphatic vessel invasion，distant metastasis，and TNM clinical stage (P<0.05).ConclusionVEGF-C and its receptor system is an important regulatory factor of lymphangiogenesis，it has very important significance in lymphangiogenesis of gastric cancer region and lymphatic metastasis.

【Key words】Gastric cancer；Vascular endothelial growth factor-C；Clinical significance

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:159～161)

1材料与方法

1.1　研究对象

收集本院2002年3月-2008年10月间，手术切除的胃癌及癌旁组织的石蜡标本共98例，另选择20例正常胃组织石蜡标本作为对照组。患者术前均未实行放疗或化疗。均经过病理检查证实。98例胃癌中，男性62例，女性36例；年龄22~76岁，平均年龄(55±8)岁；肿瘤体积：直径<5 cm者57例，≥5 cm者41例；肿瘤部位：胃底33例，胃窦、幽门65例；肿瘤分化程度：高、中分化腺癌55例，低分化腺癌43例；区域性淋巴结转移：阴性者61例，阳性者37例；15例发生远处转移；淋巴管侵犯：阴性者47例，阳性者51例； 静脉侵犯：阴性者74例，阳性者24例；超声检测浸润深度：T1~T2 33例，T3~T4 65例；根据国际抗癌联盟的新TNM分期:Ⅰ、Ⅱ期39例，Ⅲ、Ⅳ期59例。对98例患者进行随访2~6年，平均4.6年，其中86例获随访，随访率为87.8%。

1.2　研究方法

免疫组化染色：采用链霉素-生物素(SP)免疫组化技术，血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C)兔抗人多克隆抗体和鼠抗人D-240单克隆抗体购自美国SANTA CRUZ公司。实验步骤按照说明书进行操作，以实验胃癌阳性切片作为阳性对照，用PBS作为阴性对照，同一条件下进行SP染色。

1.3　结果判定

首先在低倍镜下选取阳性癌细胞最密集区域，然后在高倍视野下记数其中5个视野中的1 000个癌细胞，以阳性细胞占肿瘤细胞总数的百分率表示(%)。VEGF-C染色结果以超过30%的肿瘤细胞胞质中出现染色颗粒为阳性表达。D-240染色以出现染色的内皮细胞簇或条状为阳性，无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，深褐色为3分。0分为阴性，1~3分为阳性。

1.4　统计学处理

应用SPSS 19.0统计软件进行分析，并应用χ2检验，Spearman分析两者的相关性。生存率分析用Kaplan-Meier和Log-rank检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1　VEGF-C在胃癌组织中的阳性表达率

在胃癌组织中VEGF-C阳性表达率为71.4%(70/98)，而癌旁组织和正常胃粘膜组织中大都为阴性和弱阳性，其阳性表达率为9.2%(9/98)和5.0%(1/20)。表明VEGF-C在胃癌组织中的阳性表达率远高于正常胃粘膜组织的(P<0.01)，差异具有统计学意义。

2.2　VEGF-C在胃癌组织中的表达与其临床病理特征的关系(表1)

98例胃癌组织中，VEGF-C表达与患者性别、肿瘤部位、肿瘤直径大小、分化程度、是否存在血管浸润以及浸润深度无显著相关，但淋巴结转移者其阳性率显著高于无淋巴结转移者(89.2% vs 60.7%，P=0.0005)，存在淋巴管浸润者其阳性率明显高于不存在淋巴管浸润者(90.2% vs 51.1%，P=0.001)。同样，发生远处转移者其阳性表达率也高于对照组(90.5% vs 66.2%，P<0.022)。TNMⅢ、Ⅳ期患者其阳性表达率显著高于Ⅰ、Ⅱ期患者(86.4% vs 48.7%，P=0.042)。

2.3　VEGF-C表达与胃癌预后的关系

VEGF-C阳性表达患者术后2、4、6年生存率为58.8%、34.1%、33.7%，而同样时间阴性表达患者术后生存率为85.6%、72.2%、69.4%，后者明显高于前者(P<0.05)。

表1　VEGF-C表达与胃癌临床病理特征的关系(例，%)

3讨论

恶性肿瘤转移的主要播散途径之一是其扩散到原发部位之外，侵入淋巴管，称为淋巴结转移[1]，是严重影响患者预后的因素。肿瘤淋巴结转移主要依靠肿瘤部位淋巴结的生成，但是由于缺乏淋巴内皮细胞特异性标记物和其相关生物因子的研究，其淋巴结转移的分子机制迄今为止尚不明确[2]。直到1996年随着VEGF-C的发现[3]，止步不前的肿瘤淋巴结转移研究出现转机。

VEGF-C 是VEGF 家族的成员，其编码基因位于染色体4q34，能表达含有419个氨基酸片段的蛋白，其相对分子质M约为46 KD[4]。VEGF-C是分泌性糖蛋白结构高度保守，对淋巴管、血管的形成和动脉血管渗透性具有调节作用，并且参与调控体内多种病理和生理过程[5]。血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3) 特异表达于淋巴管内皮，作为VEGF-C的特异性受体，通过与其结合，参与受体的酪氨酸激酶信号系统的介导和启动调控，MAPK由胞内激酶的反应所介导，被VEGF-C激活后，加速淋巴管内皮细胞的有丝分裂和增殖进程，最终导致新生淋巴管的生长[6-7]。在肿瘤患者体内，VEGF-C可能在附近的淋巴管内皮细胞和肿瘤细胞原发灶之间相互旁分泌过程中发挥重要调节作用，肿瘤细胞分泌VEGF-C，对淋巴管内皮产生强烈的化学吸引作用，在转移早期就对肿瘤细胞侵袭淋巴管产生加速作用[8]。

本研究发现，98例胃癌患者中有70例患者组织中出现VEGF-C表达，而在正常和癌旁组织中多表达为阴性和弱阳性。证实胃癌细胞具有分泌VEGF-C的功能，通过自分泌方式作用于VEGFR-3利于淋巴管增生；本研究中有淋巴结转移、淋巴管浸润、远处转移、TNM临床分期Ⅲ、Ⅳ期的患者癌组织中VEGF-C的表达明显增高。在有淋巴结转移和淋巴管浸润的情况下，VEGF-C表达的阳性率显著高于无淋巴结转移和无淋巴管浸润的情况，说明VEGF-C的表达与淋巴管侵袭和淋巴结转移之间存在功能性相关关系。胃癌细胞通过分泌VEGF-C与VEGFR-3特异性结合，刺激淋巴管内皮生长并加速其新生，促进肿瘤细胞对淋巴管的侵袭作用，最终提升肿瘤在淋巴中转移的概率。Ⅲ、Ⅳ期组胃癌组织中VEGF-C的阳性表达显著高于Ⅰ、Ⅱ期组(P<0.05)，表明随着VEGF-C表达升高，胃癌细胞向周围组织器官浸润得到了促进和增强，更有利于出现淋巴转移。而与一些研究报道相反[9]，我们发现病程中出现肿瘤细胞远处转移的患者体内，VEGF-C阳性表达率有明显升高(P<0.05)，有统计学意义，阐释VEGF-C表达升高促进了原发病灶中肿瘤的转移，加快出现肿瘤细胞远处转移。

综上所述，检测VEGF-C在胃癌中的表达情况，进一步阐明了胃癌发生淋巴转移的机制，由此可见，VEGF-C及其受体系统是淋巴管生成的重要调节因子，对于肿瘤区域淋巴管生成、淋巴途径的转移具有非常重要的意义。

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(编辑：吴小红)

(收稿日期2014-07-23修回日期 2014-09-21)

中图分类号：R735.2

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2015)02-0159-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.02.001

通讯作者：王志荣

基金项目：国家自然科学基金资助(编号：NO.1200170111)
作者单位：200065 同济大学附属同济医院消化内科