高效液相色谱法测定五黄养阴颗粒中黄芩苷含量

杨帆

（重庆市食品药品检验所·重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121）

高效液相色谱法测定五黄养阴颗粒中黄芩苷含量

杨帆

（重庆市食品药品检验所·重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121）

目的 建立测定五黄养阴颗粒中黄芩苷含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法 色谱柱为Waters Symmetry Shield RP18柱(150 mm× 3.9 mm，5 m)，流动相为甲醇-用磷酸调节pH至2.7的0.05 mol／L磷酸二氢钠溶液(42∶58），检测波长为280 nm，流速为1.5 mL／min，柱温30℃。结果 黄芩苷进样量在0.10～2.00 g范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9)；平均回收率为98.70%，RSD=1.40% （n=6）。结论 该法简便、快速准确、灵敏度高，重复性好，可用于五黄养阴颗粒的质量控制。

五黄养阴颗粒；黄芩苷；高效液相色谱法；含量测定

五黄养阴颗粒为黄连、黄芩等药味组成的复方制剂，具有燥湿化痰、益气养阴的功效，用于消渴病属痰湿内滞、气阴两虚证，证见口渴喜饮，多食善饥，尿频尿多，头身困重，呕恶痰涎，倦怠乏力，气短懒言，自汗盗汗，心悸失眠，形体肥胖，咽燥口干，心烦畏热，溲赤便秘等。方中黄芩清热燥湿，与疗效具有直接的关系，但质量标准中未对其进行含量控制。笔者参考文献[1-3]，建立了高效液相色谱（HPLC）法，用于测定方中黄芩所含有效成分黄芩苷的含量。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国）；HP-Chemstation色谱工作站。黄芩苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110715-201117，含量为91.7%）；五黄养阴颗粒（重庆东田药业股份有限公司，批号为130302，130504，130702）；甲醇为色谱醇，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Waters Symmetry Shield RP18柱（150 mm×3.9 mm，5 μm）；流动相：甲醇-用磷酸调 pH至2.7的0.05 mol／L磷酸二氢钠溶液(42∶58）；流速：1.5 mL／min；检测波长：280 nm；柱温：30℃；进样量：10 μL。

2.2 溶液制备

精密称取黄芩苷对照品0.010 91 g，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取样品适量，研细，精密称取0.2 g，置50 mL量瓶中，加70%乙醇40 mL，密塞，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取缺黄芩的阴性样品适量，按供试品溶液制备方法制取阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：取2.2项下3种溶液10 μL，注入液相色谱仪，依法进样。结果阴性对照品溶液色谱与黄芩苷对照品溶液及供试品溶液色谱峰相应位置无色谱峰出现，表明阴性对照品对测定无干扰。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：取对照品溶液，分别进样1，5，10，15，20 μL，以进样量 C(μg)为横坐标、峰面积 A为纵坐标进行线性回归，得到回归方程 Y=3 456 X-40.28，r=0.999 9（n=5）。结果表明，黄芩苷进样量在0.10～2.00 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10 μL，连续进样5次，测定峰面积。结果的 RSD为0.9%（n=5），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同批样品（批号为130302），依法制备供试品溶液，测定黄芩苷的含量。结果的 RSD为1.03%（n=5），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取新制备的同一供试品溶液，分别于放置0，2，4，8，12 h时进样10 μL，测定黄芩苷峰面积。结果的 RSD=1.08% （n=5），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

加样回收试验：精密称取已测定含量的同批样品（批号为130302）6份各0.1 g，分置50 mL容量瓶中，分别精密加入黄芩苷对照品溶液适量，按供试品溶液制备方法操作，测定黄芩苷量，计算回收率。结果见表1。

表1 黄芩苷加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取样品适量，依法测定。结果批号为130302，130504，130702的样品中黄芩苷含量分别为16.79，17.32，16.51 mg／g。

3 讨论

参照2010年版《中国药典（一部）》黄芩药材黄芩苷含量测定项下方法，采用70%乙醇作为提取溶剂，检测波长为280 nm。试验中分别对超声提取时间20，30，40 min进行了考察，结果超声处理30 min能将样品中黄芩苷提取完全。

在流动相选择试验中，考察了黄芩苷测定常用的流动相：甲醇 -水-磷酸（47∶53∶0.2）[4-7]、甲醇-用磷酸调 pH至2.7的0.05mol／L磷酸二氢钠溶液(42∶58），结果采用后者为流动相时，供试品溶液中黄芩苷色谱峰的相对保留时间更稳定。

综上，本法操作简便，黄芩苷分离效果较好，具有良好的重复性和回收率，可以作为该制剂的质量控制方法。

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[5]田 静，许亚玲，任汝仙.反相高效液相色谱法测定暖宫孕子丸浸膏中黄芩苷含量[J].中国药业，2014，23（21）：49-50.

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Determination of Baicalin in Wuhuangyangyin Granules by HPLC

Yang Fan
(Chongqing Institute for Food and Drug Control，Chongqing，China 401121)

Objective To establish a method for the determination of Baicalin in Wuhuangyangyin Granules by HPLC.Methods Waters SymmetryShield RP18column(150 mm×3.9 mm，5 m)was used with the mobile phase of methnol-0.05% sodium dihydrogen phosphate solution(pH=2.7，42∶58)，The flow rate was 1.5 mL／min,the column temperature was 30℃.The detection wavelength was 280 nm. Results Baicalin showed good linear relationship at the range 0.10～2.00 g(r=0.999 9).The average recovery was 98.70% （RSD=1.40%，n=6）.Conclusion The method is convenient，quick，accurate，repeatable and is suitable for the quality control of Baicalin in Wuhuangyangyin Granules.

Wuhuangyangyin Granules;baicalin;HPLC;determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)17-0052-02

杨帆（1982-），女，大学本科，副主任中药师，研究方向为药物分析、药品实验室质量控制，（电话）023-86072723（电子信箱）18695847＠qq.com。

2015-01-27；

2015-03-24)