气相色谱法测定油酸聚烃氧酯中脂肪酸的组成

张锦琳，张 玫，袁耀佐*，李宏丽，王保成江苏省食品药品监督检验研究院，南京 0009，南京威尔化工有限公司，南京 500

气相色谱法测定油酸聚烃氧酯中脂肪酸的组成

张锦琳1，张 玫1，袁耀佐1*，李宏丽2，王保成2
1江苏省食品药品监督检验研究院，南京 210009，2南京威尔化工有限公司，南京 211500

目的：建立可同时测定药用辅料油酸聚烃氧酯中油酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸等7种脂肪酸含量的方法。方法：采用毛细管气相色谱法，石英毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），柱温以2℃·min-1的速率从170℃升温至230℃，维持10 min，检测器为FID，温度为250℃，进样口温度250℃，分流比60∶1，试样甲酯化处理后进行测定。结果：上述7种脂肪酸在各自测定范围内有良好线性关系，方法精密度良好，各组分的检测限在0.86～2.32 μg·mL-1，定量限在2.54～8.21 μg·mL-1。结论：该方法准确可靠，已被2015版《中国药典》采用。

气相色谱法；油酸聚烃氧酯；脂肪酸组成

油酸聚烃氧酯（polyoxyl oleate）为非离子表面活性剂，具有优良的乳化、润湿、分散、增溶等作用。在药剂中常作为乳化剂、润湿剂、增溶剂，用于乳剂、乳膏剂、油膏剂、洗涤剂等的辅料；也可用于食品、化妆品工业，制造乳化食品、霜剂、香波等。油酸聚烃氧酯无毒，可生物降解，对皮肤和黏膜无刺激性，一般认为是安全的，在国外使用较为普遍。

油酸聚烃氧酯是油酸和聚乙二醇的单、双酯的混合物。可由动植物油酸环氧化或由油酸与聚乙二醇酯化得到。可能含有游离的聚乙二醇。聚合物的长度为5～6个或10个环氧乙烷单位数，分别为油酸聚烃氧（5～6）酯和油酸聚烃氧（10）酯[1]。

通过测定油酸聚烃氧酯中脂肪酸的组成，既可了解油酸聚烃氧酯的结构和组成，还可以控制原料油酸中的饱和酸、不饱和酸以及不饱和酸中的部分反式脂肪酸的含量，它们的含量组成变化对油酸聚烃氧酯的化学指标、应用性能、稳定性，甚至安全性均有影响。而脂肪酸的组成是控制油酸聚烃氧酯的一项重要指标，该检查项在《欧洲药典》EP8.0[1]和《美国药典》USP37/NF32[2]中均有收载。现行《中国药典》未收载该品种，拟在2015年版收载，在标准起草过程中发现，EP8.0版中检测方法较USP37版的方法操作步骤少，样品预处理时间短，为防止脂肪酸中不饱和的双键被氧化，在样品前处理过程中采用氮气保护，比较科学，因此标准中的拟定方法主要以《欧洲药典》同品种方法为基础进行改进。

1 材 料

1.1 仪器

岛津气相色谱仪GC-2010；火焰离子化检测器（FID）；石英毛细管柱（30 m×0.25 mm），固定相为聚乙二醇（PEG）-20M（液膜厚度0.25 μm）。

1.2 试药和试剂

肉豆蔻酸甲酯、棕榈酸甲酯、棕榈油酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯、亚麻酸甲酯，纯度均为99%（Sigma公司）；油酸聚烃氧（10）酯（批号：20130801、20130805、20130807），油酸聚烃氧（5-6）酯（批号：20130702、20130708、20130723），均由南京威尔化工有限公司提供。

试剂均为分析纯；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

载气为高纯N2；燃气为H2；助燃气为压缩空气（所有气体均经净化处理）；进样口温度250℃；分流比60∶1；柱流量0.8 mL·min-1；检测器温度250℃；进样量1 μL；初始温度170℃，以2℃·min-1的速率升温至230℃，维持10 min。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取各脂肪酸甲酯对照品适量，用正庚烷配制成每毫升中含肉豆蔻酸甲酯0.5 mg、棕榈酸甲酯1.0 mg、棕榈油酸甲酯0.5 mg、硬脂酸甲酯0.5 mg、油酸甲酯6.0 mg、亚油酸甲酯1.0 mg、亚麻酸甲酯0.5 mg的混合溶液，作为对照品溶液（a）。取1.0 mL对照品溶液（a），置10 mL量瓶中，加正庚烷稀释至刻度，作为对照品溶液（b）。

2.2.2 供试品溶液 取供试品约1.0 g置于25 mL两口烧瓶中，加入无水甲醇10 mL，60g·L-1的氢氧化钾甲醇溶液0.2 mL，振摇至溶解，通氮气（速度保持在50 mL·min-1），摇匀，加热至沸腾，当溶液变成透明后（通常约10 min），继续加热5 min，用水冷却烧瓶，再转移到分液漏斗中。用5 mL的正庚烷洗涤烧瓶内壁，再将该液体加入分液漏斗并摇匀。加入10 mL的氯化钠溶液（200 g·L-1），用力摇晃。将有机层放入瓶中，并用无水硫酸钠脱水，静置后进行过滤，移取该溶液1 mL置10 mL的量瓶中，用正庚烷稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.3 方法验证

2.3.1 专属性考察 对照品溶液中各脂肪酸甲酯理论板数良好，分离度均不小于1.8。如图1所示，各脂肪酸甲酯均得到较好分离。

图1 （A）对照品溶液（b）；（B）空白溶剂；（C）供试品溶液的气相色谱图

2.3.2 线性与范围 分别配制7种脂肪酸甲酯的系列对照溶液。在“2.1”色谱条件下取1 μL进样分析。以浓度质量C为横坐标X，以峰面积A为纵坐标Y，进行线性回归绘制标准曲线，结果见表1。表明本检测方法线性关系良好。

表1 各脂肪酸甲酯的回归方程与线性范围

2.3.3 精密度试验

重复性：分别称取油酸聚烃氧 （5～6）酯（20130702）6份，每份约1.0 g，精密称定，按“2.2.2”方法操作，在“2.1”色谱条件下进样分析，按照面积归一化法计算得油酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯、亚油酸甲酯含量的RSD分别为0.22%、1.14%、0.83%、1.11%、1.94%（棕榈油酸甲酯和亚麻酸甲酯均未检出），表明方法重复性良好。

中间精密度：本实验室的两位实验人员，分别称取油酸聚烃氧（5～6）酯（20130702）6份，每份约1.0 g，精密称定，按“2.2.2”方法操作，使用两台不同气相色谱仪，在“2.1”色谱条件下进样分析，按照面积归一化法计算得油酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、硬脂酸甲酯、亚油酸甲酯含量的RSD分别为0.90%、 1.54%、1.24%、1.78%、1.87%（棕榈油酸甲酯和亚麻酸甲酯均未检出），表明方法中间精密度良好。

重现性：本实验室人员和南京威尔化工实验人员，在各自实验室分别称取油酸聚烃氧 （5～6）酯（20130702）6份，每份约1.0 g，精密称定，按“2.2.2”方法操作，在“2.1”色谱条件下进样分析，按照面积归一化法计算得油酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯、亚油酸甲酯含量的RSD分别为

1.23%、1.78%、1.98%、2.76%、2.98%（棕榈油酸甲酯和亚麻酸甲酯均未检出），表明方法重现性良好。

2.3.4 定量限 取“2.3.2”线性试验项下各脂肪酸甲酯低浓度对照品溶液，按逐步稀释法配制溶液，精密量取1 μL，在“2.1”色谱条件下进样测定，记录色谱图，以信噪比为10∶1时的相应浓度确定定量限。各脂肪酸甲酯的定量限见表2。

2.3.5 检测限 取“2.3.2”线性试验项下各脂肪酸甲酯低浓度对照品溶液，按逐步稀释法配制溶液，精密量取1 μL，在“2.1”色谱条件下进样测定，记录色谱图，以信噪比为3∶1时的相应浓度确定检测限。各脂肪酸甲酯的检测限见表2。

表2 7种脂肪酸甲酯的定量限与检测限

2.3.6 溶液稳定性 称取油酸聚烃氧 （5～6）酯（20130702）约0.1 g，按“2.2.2”方法操作，在室温下放置，分别于0、2、4、6、8 h在“2.1”色谱条件下进样测定，按照面积归一化法计算得油酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯、亚油酸甲酯含量的RSD分别为0.82%、1.53%、0.53%、2.21%、1.54%（棕榈油酸甲酯和亚麻酸甲酯均未检出），表明供试品溶液在室温下8 h内稳定性良好。

2.3.7 耐用性 称取油酸聚烃氧 （5～6）酯（20130702）约0.1 g，按“2.2.2”方法操作，分别选用安捷伦DB-WAX石英毛细管柱 （30 m×0.25 mm× 0.25 μm）和HP-INNOWAX石英毛细管柱 （30 m× 0.25 mm×0.25 μm）两种毛细管柱，在“2.1”色谱条件下进行测定，测定结果基本一致，表明本方法及色谱系统具有良好的耐用性。

2.4 样品测定

分别称取油酸聚烃氧 （5～6）酯和油酸聚烃氧（10）酯约1.0 g，精密称定，按“2.2.2”方法操作，在“2.1”色谱条件下进样分析，色谱图见图1-C。按照面积归一化法计算得油酸甲酯、肉豆蔻酸甲酯、棕榈酸甲酯、棕榈油酸甲酯、硬脂酸甲酯、亚油酸甲酯、亚麻酸甲酯百分含量，见表3。

3 讨论与小结

3.1 本实验调研了EP8.0版及USP37版中脂肪酸组成的检测方法，相比之下，EP8.0的方法操作步骤少，样品预处理时间短，反应过程中氮气保护，可防止脂肪酸中不饱和的双键被氧化。

3.2 本文建立的气相色谱法，可同时测定油酸聚烃氧酯中肉豆蔻酸甲酯、棕榈酸甲酯、棕榈油酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯、亚麻酸甲酯7种脂肪酸组成的百分含量，参考《欧洲药典》标准，方法采用的是面积归一化法，由于各脂肪酸的对照品采购于Sigma，量少且昂贵，无法进行准确的校正因子的测定，未对面积归一化法的合理性作进一步验证。

表3 6批油酸聚烃氧酯脂肪酸组成测定结果（%）

3.3 从油酸聚烃氧酯中脂肪酸的组成可以看出绝大部分是不饱和脂肪酸，其中以油酸含量最高占70%～80%，亚油酸次之8%～9%，且油酸聚烃氧（5～6）酯中的油酸明显高于油酸聚烃氧（10）酯；而饱和脂肪酸中，含量最高的是棕榈酸，且油酸聚烃氧（5～6）酯中的棕榈酸明显低于油酸聚烃氧（10）酯，因此建立的气相色谱法，可以快速鉴别产品的真伪，区分油酸聚烃氧酯（5～6）酯和油酸聚烃氧（10）酯，可为油酸聚烃氧酯的质量评价提供依据。同时由于本品含有醚键和双键，容易氧化生成环氧乙烷，提示油酸聚烃氧酯需要充氮密封保存。

[1]EP8.0[Z].2659-60.

[2]USP37/NF32[Z].6132-3.

Contents Determination of Seven Fatty Acids in Pharmaceutical Excipient Polyoxyl Oleate by GC

ZHANG Jin-lin1,ZHANG Mei1,YUAN Yao-zuo1*,LI Hong-li2,WANG Bao-cheng2
1Jiangsu Institute for Food and Drug Control,Nanjing 210009;2Nanjing Well Chemical Co.Ltd,Nanjing 211500

Objective:To develop a method for the determination of oleic acid,myristic acid,palmitic acid,palmitoleic acid,stearic acid,linoleic acid and linolenic acid in polyoxyl oleate simultaneously.Methods:Test samples were analyzed by gas chromatography after methyl esterification.They were determined with a flame ionization detector at 250℃,injection temperature was at 250℃,the split ration was 60∶1.The compounds were separated on an quartz capillary column by using temperature programming from 170℃ to 230℃ by 2℃·min-1and maintained for 10 min.Results:These fatty acids mentioned above showed good linear relationship respectively.The precision of the method was good.The limit of detection of each compound was 0.86～2.32μg·mL-1,the limit of quantitation was 2.54～8.21μg·mL-1.Conclusion:This method is accurate and has been recorded in the Pharmacopoeia of the Peoples's Republic of China 2015 Edition.

Gas chromatography;Polyoxyl oleate;Contents of fatty acids

R927.1

A

1673-7806（2015）05-465-03

张锦琳，女，主管药师 E-mail:zjluser@126.com

*通讯作者袁耀佐，男，博士，主任药师 E-mail:yyzyz7256@sina.cn

2015-05-22

2015-07-01